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  • 蝙蝠葛酚性碱对人胰腺癌荷瘤裸鼠移植瘤形态学的研究

    作者:刘宏;仲丽丽;杜徽;张维嘉

    目的:观察蝙蝠葛酚性碱(PAMD)对人胰腺癌细胞BxPC-3裸鼠移植瘤的抑制作用及其病理形态学影响.方法:雌性的裸鼠40只,被接种人源性的胰腺癌细胞株BxPC-3于裸鼠的右腋皮下,主要用于建立人胰腺癌皮下异位移植瘤的实验动物模型.24 h后用随机法将其分为5组,每组8只,分别为PAMD高、低剂量组(20,10 mg·kg-1)5-氟尿嘧啶(5-FU)组(20mg·kg-1),模型组和正常组.PAMD与5-Fu组ip给药,模型组与正常组则给予同体积的生理盐水,但正常组不接种瘤株,给药20 d后,按照相关的公式计算其抑瘤率;在光镜和透射电镜下,观察PAMD对移植瘤组织病理形态学的影响.结果:与正常组比较,模型组瘤重明显增加(P<0.01),肿瘤组织的病理形态和超微结构瘤细胞胞体变大,核浆比例失调,病理性核分裂象增大,核浆比例增大;与模型组比较,PAMD高、低剂量组和5-Fu组对胰腺癌BxPC-3荷瘤裸鼠的瘤组织生长都有一定的抑制作用(P<0.05),其抑瘤率分别为51.67%,37.26%,33.58%,通过光镜和透射电镜显示,PAMD对肿瘤组织的病理形态和超微结构均有一定的改善作用.结论:PAMD能够有效的抑制胰腺癌细胞株BxPC-3荷瘤裸鼠肿瘤细胞的生长,PAMD高、低剂量组对BxPC-3荷瘤裸鼠瘤组织的病理形态学变化,具有一定的改善作用.

  • Fas基因在胰腺癌细胞凋亡中的研究

    作者:刘大川;李非;孙家邦

    目的探讨雌激素受体拮抗剂三苯氧胺诱导雌激素受体阳性胰腺癌细胞凋亡过程中与Fas基因间的关系.方法流式细胞仪分离Fas(+)和Fas(-) 胰腺癌细胞,通过TAM诱导Fas(+)和Fas(-)胰腺癌细胞株Bxpc-3凋亡,MTT法检测细胞活度,TUNEL法检测细胞凋亡,采用RT-PCR-ELISA法检测端粒酶活性,进行相关性分析.结果 TAM可以诱导出Fas(+)胰腺癌细胞凋亡,不能诱导出Fas(-)胰腺癌细胞凋亡.结论 TAM诱导雌激素受体阳性胰腺癌细胞株Bxpc-3凋亡,必须有Fas(+)抗体的介导,不能单纯用表面膜受体拮抗剂的理论来解释TAM诱导雌激素受体阳性胰腺癌细胞株Bxpc-3凋亡.

  • 人胰腺癌细胞株HPAC和BxPC-3中Src/MAPK信号转导途径中pp60c-Src和pERK1/2表达的差异

    作者:孔璐;张玉祥;孙林;马慧苹;贺旭;谢千池;李宝红

    目的 研究人胰腺癌细胞株HPAC和BxPC-3中Src/MAPK信号转导系统,探寻不同类型胰腺癌信号转导通路的差异,为研究靶点药物提供基础.方法 将1640培养的HPAC和BxPC-3经细胞计数相同后各分为4组,分别为对照组、TGF-α组、TGF-α+PP2组和TGF-α+PD组.细胞贴壁并达70%融合后,换无血清培养48 h.无血清处理作对照,用无血清培养基溶解终浓度为7 nmol/L的TGF-α刺激TGF-α组2 h,TGF-α+PP2组先加入终浓度为10umol/L的PP2刺激细胞20 min后加入7 nmol/L的TGF-α刺激2 h,TGF-α+PD组先加入30umol/L的PD98059刺激细胞20 min后加入终浓度为7 nmol/L的TGF-α刺激2 h.用蛋白印迹方法分析HPAC和BxPC-3的4组细胞pp60c-Src和pERK1/2的表达.结果 HPAC细胞pp60c-Src的表达:对照组显著高于TGF-α组、TGF-α+PD组(P<0.05)和TGF-α+PP2组(P<0.01);HPAC细胞pERK1/2的表达:TGF-α组显著高于对照组和TGF-α+PD组(P<0.01),与TGF-α+PP2组相比较差异无统计学意义(P>0.05).BxPC-3细胞pp60c-Src的表达:TGF-α组显著高于对照组(P<0.05)和TGF-α+PP2组(P<0.01),与TGF-α+PD组相比较差异无统计学意义(P>0.05);BxPC-3细胞pERK1/2的表达:TGF-α组显著高于对照组、TGF-α+PD组和TGF-α+PP2组(P<0.01).结论 HPAC和BxPC-3细胞中Src/MAPK信号途径存在差异.推测在BxPC-3细胞株中c-Src是活化Ras/Raf/MAPK途径的关键信号分子,应进一步研究在HPAC细胞株中c-Sic的作用.

  • TUNEL法检测胰腺癌细胞凋亡和Ki-67表达的研究

    作者:刘爽;刘大川;李非;孙家邦

    为探讨胰腺癌细胞Ki-67与细胞凋亡的关系,通过1,25(OH)2D3诱发胰腺癌细胞株Bxpc-3凋亡,采用MTT法检测细胞增生情况,TUNEL法检测细胞凋亡指数,免疫组化法检测Ki-67阳性表达指数,并进行相关性分析.结果:在10-8 mol/L 1,25(OH)2D3诱发Bxpc-3凋亡过程中,肿瘤细胞凋亡指数与Ki-67阳性表达指数呈负相关.提示:对凋亡指数及Ki-67阳性表达指数的综合分析,可全面反映细胞凋亡和增生的平衡状态,对于判断肿瘤细胞的增生具有参考价值.

    关键词: 1 25(OH)2D3 BxPC-3 凋亡 Ki-67
  • 葡萄籽原花青素抗人胰腺癌细胞的实验研究

    作者:史志勇;刘建生;曹军

    目的 探讨GPC对人胰腺癌细胞株BXPC-3体外生长抑制作用及机制.方法 经预实验选用不同浓度GPC分别作用于BXPC-3细胞24h,48h后采用MTT法检测不同浓度GPC对BXPC-3细胞增殖的影响;免疫组织化学染色SP法检测GPC作用后COX-2的影响;FCM法检测GPC对细胞周期的影响.结果 GPC以时间剂量关系抑制BXPC-3的增殖并下调COX-2的表达;诱导细胞停滞在G0/G1期.结论 GPC可在体外明显抑制BXPC-3细胞的殖,阻滞细胞周期,诱导细胞亡,而这种作用可能与COX-2的表达有关.

    关键词: GPC BxPC-3 胰腺癌
  • 蝙蝠葛酚性碱对BXPC-3荷瘤小鼠细胞凋亡基因p16表达的影响

    作者:苏云明;章艳;崔艳;李薇婕;李宜航;刘坤

    目的:观察蝙蝠葛酚性碱(PAMD)的抗肿瘤作用并进一步探讨其作用机制.方法:通过实时定量PCR(Real-time PCR)技术观察PAMD对胰腺癌细胞株BXPC-3皮下异位移植瘤细胞凋亡相关基因p16 mRNA表达的影响,以此探讨PAMD抗肿瘤作用机理.结果:PAMD能够显著升高胰腺癌细胞株BXPC-3裸鼠皮下异位移植瘤组织中p16mRNA表达量.结论:PAMD对胰腺癌细胞株BXPC-3裸鼠皮下异位移植瘤表现出明显抑制作用,能够有效的抑制肿瘤生长,其机理可能与PAMD能够诱导细胞凋亡及影响凋亡相关基因表达有关.

  • 蝙蝠葛酚性碱对胰腺癌瘤组织中DPC4蛋白表达的影响

    作者:王家明;白云;闻喜英;冯大志;苏云明

    目的:观察蝙蝠葛酚性碱(PAMD)对胰腺癌(BXPC-3)荷瘤小鼠肿瘤组织中DPC4蛋白表达的影响.方法:采用蛋白印迹技术(Western-blot)检测肿瘤DPC4蛋白表达的差异.结果:PAMD高、中、低剂量上调BXPC-3荷瘤小鼠瘤组织中DPC4蛋白表达量,与模型对照组比较,差异具有统计学意义(P<0.01);结论:PAMD对BXPC-3荷瘤小鼠具有明显的抑瘤作用,其抑瘤作用可能通过上调DPC4基因蛋白表达,影响TGF-β信号传导通路,从而抑制肿瘤生长.

  • 蝙蝠葛酚性碱对BXPC-3肿瘤抑制作用及肿瘤组织中MMP-9含量的影响

    作者:苏云明;刘坤;章艳;李薇婕;李宜航;崔艳

    目的:观察蝙蝠葛酚性碱对BXPC-3肿瘤裸鼠肿瘤的抑制作用和对BXPC-3肿瘤裸鼠瘤组织中MMP-9表达的影响.方法:建立BXPC-3肿瘤裸鼠的动物模型,检测蝙蝠葛酚性碱对转移瘤的抑制率.应用S-P免疫组织化学方法,检测蝙蝠葛酚性碱对瘤组织MMP-9表达的影响.结果:蝙蝠葛酚性碱高、中、低剂量对BXPC-3肿瘤裸鼠均有明显抑制肿瘤生长的作用,其抑瘤率分别为34.91%、52.83%、41.51%,与模型对照组比较具有统计学意义(P<0.01).蝙蝠葛酚性碱对BxPC-3肿瘤裸鼠的MMP-9表达有明显抑制作用(P<0.01).结论:蝙蝠葛酚性碱对BXPC-3肿瘤裸鼠具有明显的抑瘤作用,其抑瘤作用可能与通过降低MMP-9含量有关.本研究为其在临床应用提供了一定的实验和理论依据.

  • 蝙蝠葛酚性碱对BxPC-3荷瘤裸鼠细胞凋亡相关基因P53蛋白表达的影响

    作者:周忠光;白云;赵鑫;范越;王怀刚;朱丹;朱孝娟;苏云明

    目的:观察蝙蝠葛酚性碱(PAMD)对胰腺癌(BXPC-3)荷瘤裸鼠肿瘤组织中P53蛋白表达的影响.方法:通过蛋白印迹技术(Western blotting)观察PAMD对胰腺癌细胞株BxPC-3皮下异位移植瘤细胞凋亡相关基因p53蛋白表达的影响.结果:PAMD能够显著降低胰腺癌细胞株BxPC-3裸鼠皮下异位移植瘤组织中p53蛋白表达量.结论:PAMD对胰腺癌细胞株BxPC-3裸鼠皮下异位移植瘤表现出明显抑制作用,能够有效的抑制肿瘤生长,其机理可能与PAMD能够诱导细胞凋亡及影响凋亡相关基因P53蛋白的表达有关.

  • 蝙蝠葛酚性碱对BXPC-3荷瘤小鼠抑瘤作用及外周血TNF-α含量的影响

    作者:孟丹;白云;苏云明;章艳;崔艳;李薇婕;李宜航;刘坤

    目的:通过实验研究,探讨蝙蝠葛酚性碱对胰腺癌(BXPC-3)荷瘤小鼠的抑制作用及外周血TNF-α含量的影响.方法:采用体内实验法,按0.2mL·只-1(约含瘤细胞数1×106个)接种于消毒后的小鼠右前肢腋部皮下,制备裸鼠胰腺癌模型,腹腔注射给药21d,停药后次日,称取小鼠体重,摘眼球取血处死小鼠,计算抑瘤率;采用ELISA法检测BXPC-3荷瘤小鼠外周血TNF-α含量.结果:PAMD高、中、低剂量组对BXPC-3荷瘤小鼠均有明显抑制肿瘤生长的作用,在一定剂量内对荷瘤小鼠免疫器官指数无明显影响,PAMD可明显增加荷瘤小鼠外周血TNF-α含量.结论:PAMD对BXPC-3荷瘤小鼠具有明显的抑瘤作用,其抑瘤作用可能通过调节机体免疫功能,充分调动细胞因子生物学活性有关.

  • 北豆根调控K-ras与DPC4蛋白表达的研究

    作者:刘玉斌;苏慧;苏云明;杜永强

    目的:观察北豆根提取物蝙蝠葛酚性碱(PAMD)对胰腺癌(BXPC-3)荷瘤鼠肿瘤组织中k-ras与DPC4蛋白表达的调控作用,探讨其抗胰腺癌的相关机制.方法:蛋白印迹技术检测肿瘤组织中k-ras和DPC4的蛋白表达,探讨PAMD抗胰腺癌作用的相关靶点.结果:PAMD三个给药剂量组均能降低BXPC-3荷瘤鼠瘤组织中K-ras蛋白表达,增加DPC4蛋白表达,与模型对照组比较,差异具有统计学意义(P<0.01).结论:PAMD通过下调K-ras蛋白表达,上调DPC4蛋白表达,影响TGF-β信号传导通路,抑制BXPC-3肿瘤生长,从而达到对BXPC-3的治疗目的.

  • 蝙蝠葛酚性碱及其单体成分对BxPC-3细胞增殖作用的影响

    作者:白云;李洋;张英博;贾博宇;周忠光

    目的:探讨蝙蝠葛酚性碱(PAMD)、蝙蝠葛碱(Dau)、蝙蝠葛苏林碱(DS)及比例组(Dau与DS按3:1混合)药物对体外胰腺癌细胞BxPC-3增殖的影响.方法:BxPC-3细胞传代培养,分别加入高、中、低三个剂量的PAMD、DS、Dau及比例组溶液,空白对照组加入等体积的生理盐水,作用72h,以MTT比色法检测吸光度(OD值),计算各组对BxPC-3细胞的增殖抑制率.结果:PAMD高、中、低剂量组的抑制率分别为93.27%、24.64%、15.45%;Dau高、中、低剂量组的抑制率分别为67.18%、24.09%、12.00%;DS高、中、低剂量组的抑制率分别为20.18%、15.64%、6.27%;比例组高、中、低剂量组的抑制率分别为30.18%、41.27%、17.36%.与空白对照组比较,除Dau和DS低剂量组外各组均有统计学差异(P<0.05).结论:PAMD及其单体成分Dau和DS对BxPC-3细胞的增殖均有抑制作用,但是Dau、DS及比例组药物对BxPC-3细胞的增殖抑制作用弱于PAMD组,说明PAMD对BxPC-3细胞的增殖抑制作用还可能与PAMD内其他成分有关系.

  • 吉西他滨对人胰腺癌细胞系BxPC3黏附影响的实验研究

    作者:于俊骁;郝士畅;孙备;孔瑞

    目的 通过对人胰腺癌细胞系BxPC-3诱导吉西他滨耐药细胞黏附性质变化,初步探讨其耐药的分子生物学机制.方法 0.2μmol/L吉西他滨培养基诱导2个月获得BxPC-3细胞系的耐药细胞株BxPC-3-GEM,观察细胞的生长状态,通过ELISA、Western blot等方法测定细胞产生的可溶性细胞间黏附因子-1(sICAM-1)和E-钙黏连蛋白(E-cadherin),应用细胞集落形成以及黏附实验判断细胞的黏附特点.结果 与亲代细胞株比较,耐药细胞株BxPC-3-GEM细胞大小无明显变化,仍呈现聚集性生长,但胞浆内颗粒较大,细胞核明显、异形细胞核增多.体外增殖能力减弱,分泌的sICAM-1减少.结论 通过吉西他滨诱导获得的胰腺癌BxPC-3-GEM细胞黏附率下降,影响了体内肿瘤细胞的转移.

  • Notch2表达与胰腺癌干细胞相关

    作者:周竹超;董强刚;倪泉兴

    目的:以Notch2为表面标志对胰腺癌干细胞进行分离鉴定.方法:采用磁性细胞分选(magnetic activatedcell sorting,MACS)技术纯化胰腺癌Bxpc-3和Panc-1细胞株中的Notch2+细胞,通过NOD-SCID小鼠皮下移植评估其致瘤能力.在无血清条件下培养观察细胞的球体形成能力,应用免疫荧光检测法检测干细胞相关标志八聚体结合转录因子4(octamer-binding transcription factor 4,0ct4)、Nanog和胰十二指肠同源异型盒1(pancreatic andduodehal homeobox 1,PDlX1)的表达,并通过测序检测其K-ras基因突变的情况.结果:Notch2+细胞具有显著致瘤性.胚胎干细胞核心转录因子Oct4、Nanog和胰腺干细胞标志PDX1阳性表达.在无血清条件下培养能形成细胞球体,并存在K-ras基因的突变.结论:人胰腺癌Notch2<'+>Bxpc-3和Panc-1细胞具有肿瘤干细胞特性.

  • 5-氟尿嘧啶、表阿霉素、丝裂霉素单用及合用时对胰腺癌细胞Aspc-1和Bxpc-3的抑制作用

    作者:邹君杰;冯耀良;施海彬;戴存才

    目的:观察5-氟尿嘧啶(5-FU)、表阿霉素(E-ADM)和丝裂霉素(MMC)体外对胰腺癌细胞(Aspc-1及Bxpc-3)的作用和药物联合应用时的相互作用.方法:采用MTT测定法观察5-FU、E-ADM和MMC单用及合用时对细胞的抑制作用,并应用中效原理判定药物合用的效果.结果:单用或者合用时随着药物浓度的增加其对细胞的抑制作用也增加,5-FU和MMC合用于Aspc-1细胞株,当效应为 0.84 时CI为1,大剂量时(效应大于 0.84)是协同作用(CI<1),小剂量时(效应小于 0.84)是拮抗作用(CI>1).MMC和E-ADM合用时表现为轻度的拮抗作用.5-FU和MMC、MMC和E-ADM合用于Bxpc-3,当效应分别为 0.49、0.62 时CI为1,大于此效应表现为轻度拮抗(C>1),小于此效应则相反.5-FU和E-ADM合用对两株细胞量效曲线图的形态相似表现为轻度的拮抗作用,随着效应的增加拮抗作用略有下降.结论:药物的相互作用与药物浓度有关,药物及细胞株的不同其量效曲线存在较大差异.通过动脉灌注或保留导管持续灌注以提高化疗药物局部浓度能够改善胰腺癌的化疗效果.

  • 甲羟戊酸激酶基因真核及shRNA表达载体构建及其对BxPC-3细胞周期蛋白表达的影响

    作者:金锐;王芳;栾康;罗欣;张胜权

    目的 构建甲羟戊酸激酶( MVK)基因真核及shRNA表达载体并转染至BxPC-3细胞中,观察其对细胞周期蛋白的影响.方法 从BxPC-3细胞中提取总RNA, 逆转录PCR ( RT-PCR)法获得目的基因 MVK 以及通过化学合成 MVK (751~779)和 MVK(1 089~1 117)位点寡核苷酸片段,构建真核表达及shRNA表达载体并转染至BxPC-3细胞,筛选稳定表达细胞系.Western blot法分析转染后对BxPC-3细胞周期蛋白的影响.结果 成功获得MVK基因真核表达( pcD-NA3. 1-mvk)及两个针对 MVK shRNA 表达载体( piLenti-RNAi-shRNA1/2). 通过抗生素筛选及Western blot分析获得了稳定的MVK过表达及低表达细胞株. Western blot分析显示:过表达MVK的细胞株及MVK knockdown的细胞株中细胞周期蛋白Cyclin B1、Cyclin E表达量与正常及对照细胞相比均显著降低. 结论 MVK过表达及低表达均抑制Bx-PC-3细胞周期蛋白Cyclin B1、Cyclin E的表达.

  • TLR7激动剂Gardiquimod上调BxPC-3细胞中IL-15 mRNA表达

    作者:王芳;金锐;李磊;程丰伟;罗欣;张胜权

    目的:研究TLR7在胰腺癌BxPC-3细胞中表达,并探讨TLR7激动剂激活TLR7后细胞因子白介素15( IL-15)的表达。方法通过 Western blot 和 Real-time PCR 分析TLR7在细胞内的表达水平;BxPC-3细胞经过不同时间点Gardiquimod(3μg/ml)的处理后,Real-time PCR 分析 TLR7激活后 IL-15 mRNA 水平表达变化;Western blot 分析Gardiquimod刺激细胞后,磷脂酰肌醇-3-激酶-蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶( PI3K-AKT)信号通路的变化。结果 Western blot和 Real-time PCR结果显示:与外周血单核细胞( PBMC)相比, TLR7在 BxPC-3中弱表达;Real-time PCR分析显示:Gardiquimod处理细胞后能刺激细胞中IL-15的表达;TLR7激动剂能够激活 PI3K-AKT信号通路。结论 Gardiquimod激活TLR7后能够上调 IL-15的表达,并且其激活与 PI3K-AKT信号途径相关。

  • 蝙蝠葛酚性碱对BXPC-3裸鼠抑瘤作用及对VEGF表达的影响

    作者:苏云明;李薇婕;李宜航;刘坤;孟丹;章艳;崔艳

    目的 研究蝙蝠葛酚性碱(PAMD)对BXPC-3裸鼠抑瘤作用及对肿瘤新生血管内皮因子(VEGF)表达的影响,并进一步探讨其作用机制.方法 建立BXPC-3裸鼠的动物模型,检测蝙蝠葛酚性碱对转移瘤的抑瘤率,采用免疫组织化学方法 检测各组BXPC-3小鼠肿瘤组织 VEGF的表达水平.结果 蝙蝠葛酚性碱对BXPC-3胰腺癌裸鼠瘤组织具有一定的抑制作用,与模型对照组比较具有统计学意义(P <0.01).PAMD各剂量均能明显降低BXPC-3胰腺癌裸鼠瘤组织VEGF的表达水平.结论 蝙蝠葛酚性碱对BXPC-3裸鼠胰腺癌具有明显的抑制作用.其机制可能是通过改善裸鼠免疫功能,抑制肿瘤新生血管形成来实现的.

  • 蝙蝠葛酚性碱对BxPC-3裸鼠的抑瘤作用及对bFGF表达的影响

    作者:苏云明;崔艳;李薇婕;李宜航;刘坤;孟丹;章艳

    目的 研究蝙蝠葛酚性碱(PAMD)对BxPC-3裸鼠的抑瘤作用及对肿瘤新生血管bFGF表达的影响,进一步探讨其作用机制.方法 建立BxPC-3裸鼠的动物模型,检测蝙蝠葛酚性碱对转移瘤的抑制率,同时应用SP免疫组织化学方法检测各组BxPC-3裸鼠肿瘤组织bFGF的表达水平.结果 蝙蝠葛酚性碱对BxPC-3裸鼠瘤组织具有抑制作用,高、中、低剂量组抑瘤率分别为34.91%、52.83%、41.51%,与模型对照组比较具有统计学意义(P<0.01);各剂量均能明显降低BxPC-3裸鼠瘤组织bFGF的表达水平.结论 蝙蝠葛酚性碱对BxPC-3裸鼠肿瘤具有明显的抑制作用,其机制可能是通过改善裸鼠免疫功能,抑制肿瘤新生血管形成来实现的.

  • 蝙蝠葛酚性碱对BXPC-3肿瘤抑制作用及外周血IL-1含量的影响

    作者:焦广宇;魏兴刚;苏云明

    目的 观察蝙蝠葛酚性碱对BXPC-3荷瘤裸鼠的肿瘤抑制作用及外周血IL-1含量的影响.方法 建立BXPC-3荷瘤裸鼠动物模型,检测蝙蝠葛酚性碱对转移瘤的抑制率;采用ELISA法检测荷瘤小鼠外周血IL-1含量变化.结果 蝙蝠葛酚性碱高、中、低剂量时BXPC-3荷瘤裸鼠均有明显抑制肿瘤生长的作用,其抑瘤率分别为34.91%,52.183%和41.51%,可以降低BXPC-3荷瘤小鼠血清IL-1含量.结论 蝙蝠葛酚性碱对BXPC-3荷瘤裸鼠具有明显的抑瘤作用,其抑瘤作用可能与降低BXP&3荷瘤小鼠血清IL-1含量有关,该研究为其临床应用提供了一定的实验和理论依据.

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