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糖尿病大血管纤维病变中丝裂原活化蛋白激酶信号通路的表达及中药桃仁的干预作用研究
目的 基于丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases,MAPK)信号通路探究桃仁治疗2型糖尿病大血管纤维化大鼠的作用机制.方法 雄性SD大鼠200只,随机选取30只为空白对照组,余170只制备2型糖尿病大血管纤维化大鼠模型,分为早期干预组、低剂量组、高剂量组、模型对照组;早期干预组与低剂量组予桃仁颗粒剂水溶液10 mL/(kg·d)灌胃,高剂量组予桃仁颗粒剂水溶液20 mL/(kg·d)灌胃,模型对照组予0.9％氯化钠10 mL/(kg·d)灌胃,空白对照组不干预,其中早期干预组从2型糖尿病模型成模后随即开始干预,余各组从2型糖尿病大血管纤维化大鼠模型成模后开始干预.药物干预1周、3周及7周后处死并取材.观察大鼠股动脉病理改变,采用Western blotting方法检测股动脉的ERK1/2及p-ERK1/2的表达情况,采用RT-PCR检测MAPKmRNA表达水平.结果 (1)Westernblotting方法检测ERK1/2及p-ERK1/2表达比较:空白对照组与其他四组相比,差异有统计学意义(P<0.05),空白对照组大鼠股动脉ERK1/2、p-ERK1/2表达值低;第1、3周,早期干预组与其他四组相比,差异有统计学意义(P<0.05),早期干预组大鼠股动脉ERK1/2、p-ERK1/2表达值低于低剂量组、高剂量组、模型对照组;第7周,早期干预组与高剂量组相比,差异无统计学意义(P>0.05);第3、7周,低剂量组与高剂量组、模型对照组,高剂量组与模型对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05),高剂量组大鼠股动脉ERK1/2、p-ERK1/2表达值低于低剂量组,低剂量组大鼠股动脉ERK1/2、p-ERK1/2表达值低于模型对照组.(2)大鼠股动脉MAPK mRNA表达组间比较:空白对照组与其他四组相比,差异有统计学意义(P<0.05),空白对照组大鼠股动脉MAPK mRNA表达量低;第1、3周,早期干预组与其他四组相比,差异有统计学意义(P<0.05),早期干预组大鼠股动脉MAPK mRNA表达量低于低剂量组、高剂量组、模型对照组;第7周,早期干预组与高剂量组相比,差异无统计学意义(P>0.05);第3、7周,低剂量组与高剂量组、模型对照组,高剂量组与模型对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05),高剂量组大鼠股动脉MAPK mRNA表达量低于低剂量组,低剂量组大鼠股动脉MAPK mRNA表达量低于模型对照组.结论 桃仁能降低ERK1/2、p-ERK1/2及MAPK mRNA的表达,对糖尿病大血管纤维化病变有改善作用,其作用与剂量和干预时间有相关性.
关键词： 2型糖尿病 大血管纤维化 桃仁 丝裂原活化蛋白激酶信号通路 -
糖尿病大血管纤维化探析及活血化瘀中药干预机制
糖尿病大血管病变是糖尿病常见的慢性并发症,严重影响患者的生存质量,糖尿病大血管病变是一个复杂的多因素疾病,血管纤维化尤其是ToLL样受体作用研究可能成为糖尿病大血管病变机理研究的突破口.中医认为瘀血是糖尿病及其血管并发症的重要病理基础,活血化瘀方剂桃核承气汤能明显降低糖尿病鼠大动脉转化生长因子-β、结缔组织生长因子(CTGF)、血小板衍生生长因子(PDGF)、血管内皮生长因子(VEGF)、胶原蛋白Ⅰ、胶原蛋白Ⅲ含量,具备有效的抑制糖尿病大血管向纤维化发展的倾向.对糖尿病血管合并症的基础研究起到了推动作用.
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Apelin-13减轻糖尿病小鼠主动脉损伤
目的 探讨apelin-13对糖尿病小鼠主动脉结构的影响及其机制.方法 对照组:8周龄C57/BL6j小鼠6只;糖尿病组:8周龄kkAy小鼠6只;apelin-13处理组:kkAy小鼠6只,皮下埋微量植渗透泵释放apelin-13[30Lg/(kg·d)].4周后取材,进行HE、Masson染色,光学显微镜下观察血管的形态学改变及胶原纤维的沉积情况,弹性蛋白染色观察血管弹力纤维板的形态学改变,免疫组织化学染色分析血管内信号蛋白转化生长因子β1(TGF-β1)的表达水平.结果 与正常对照组相比,糖尿病组小鼠血管壁中膜明显增厚,主动脉内胶原纤维含量明显升高(P＜0.05),弹力纤维排列紊乱、断裂,同时血管壁TGF-β1表达增强(P＜0.05),而apelin-13处理组小鼠血管壁中膜较糖尿病组明显变薄,血管间质内胶原纤维的含量较糖尿病组小鼠显著下降(P＜0.05),弹力纤维排列较整齐,血管壁TGF-β1表达也显著下调(P＜0.05).结论 外源性Apelin-13可能通过抑制TGF-β1以及平滑肌细胞增殖减轻糖尿病引起的主动脉纤维化以及血管中膜弹力纤维损伤.
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桃核承气汤对糖尿病大鼠大血管纤维病变Toll样受体通路作用研究
[目的]通过免疫印记法检测实验性Ⅱ型糖尿病大鼠下肢股血管中Toll样受体-2(TLR-2)、Toll样受体-4(TLR-4)表达,并通过观察桃核承气汤对相关指标影响,揭示糖尿病大血管纤维化病变的发病机制,及中药桃核承气汤在糖尿病血管纤维化中的干预作用.[方法]雄性SD大鼠170只,随机分为5组:A-正常对照组(n=30),余140只造糖尿病模型模,造模成功123只,随机分为4组:B-模型对照组(n=31)、C-中药高剂量治疗组(n=30)、D-中药中剂量治疗组(n=31)、E-中药低剂量治疗组(n=31);A组不予药物干预,B组每日给予0.9%生理盐水10 mL/kg灌胃,C组每日给予桃核承气汤1.8g/kg,D组每日给予桃核承气汤0.9g/kg,E组每日给予桃核承气汤0.45g/kg.药物干预第1周、12周、20周,按计划处死大鼠,各组分别取材,保存标本,免疫印记法检测TLR-2、TLR-4沉积部位及表达情况.[结果]TLR-2、TLR-4在糖尿病大鼠股动脉中均显著表达,中药桃核承气汤干预可有效降低TLR-2及TLR-4的表达.[结论]糖尿病大血管病变可能与Toll样受体通路有关,中药组方桃核承气汤对糖尿病大血管病变有明显改善作用,可减缓纤维化进程,其干预作用于用药剂量和用药时间相关.
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胶原蛋白Ⅰ、胶原蛋白Ⅲ在糖尿病大鼠血管病变中的表达及中药的干预
[目的]对中药干预下的糖尿病大鼠动脉损伤模型的胶原蛋白的表达进行研究,为糖尿病大鼠动脉损伤纤维病变学说和中药干预糖尿病血管并发症的可行性提供实验学依据.[方法]雄性SD大鼠48只,按随机数字表法随机分为A-正常对照组,B-糖尿病对照组,C-中药治疗组,D-二甲双胍治疗组,其中B、C、D3组为糖尿病模型组,观察各组大鼠股动脉中胶原蛋白Ⅰ、Ⅲ的含量.[结果]糖尿病模型组与正常对照组比较,胶原蛋白Ⅰ、胶原蛋白Ⅲ均明显升高；各治疗组治疗后与糖尿病对照组比较,胶原蛋白Ⅰ、Ⅲ表达明显下降；中药治疗组与西药治疗组比较,胶原蛋白Ⅰ、Ⅲ表达下降(P＜0.05).[结论]胶原蛋白Ⅰ、Ⅲ在中、晚期糖尿病大鼠的大血管中显著增加,提示糖尿病大血管病变可能与胶原蛋白有关；中药组方加味桃核承气汤能有效降低致纤维化因子胶原蛋白在实验性糖尿病大血管病变中的表达,对糖尿病大血管病变有改善作用.
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桃核承气汤对大鼠糖尿病大血管Toll样受体表达的影响
目的:观测桃核承气汤早期干预对糖尿病鼠大血管病变中TOLL样受体2(TLR-2)、TOLL样受体4(TLR-4)及转化生长因子(TGF-β)、胰岛素样生长因子1(IGF-1)表达的影响.方法:雄性SD大鼠130只,正常对照组(A组)30只,其余100只制造糖尿病模型,分为模型对照组(B组)、中药早期干预组(C组)及中药治疗组(D组).A组不予药物干预;B组给予0.9％氯化钠10 mL·Kg-1·d-1灌胃;C组自造模前予桃核承气汤水溶液灌胃0.9 g·Kg-1·d-1,造模后继续给予桃核承气汤0.9 g·Kg-1·d-1灌胃;D组造模后给予桃核承气汤0.9 g·Kg-1·d-1灌胃.药物干预第1、12、20周处死,分别取材.免疫组化法检测糖尿病大鼠大血管中TLR-2、TLR-4、TGF-β、IGF-1表达情况.结果:药物干预20周后C组大鼠股动脉TLR-2为(3.750±1.282) pg/mL,较B组[(9.333±2.338) pg/mL]明显降低(p＜0.05),D组与B组大鼠股动脉TLR-2表达无明显差异(P＞0.05).C组及D组大鼠股动脉TLR-4表达为(3.750±1.282)pg/mL、(5.750±1.982) pg/mL,较B组[(10.333±2.658) pg/mL]明显降低(P＜0.05),且C组对大鼠股动脉TLR-4表达干预作用强于D组(P＜0.05).随着用药时间延长,C组与D组大鼠股动脉TLR-2、TLR-4表达干预作用趋于相近(P＞0.05).大鼠股动脉TGF-β C组为(403.438± 11.273) pmol/L,D组为(535.313±12.384) pmol/L,均明显降低(P＜0.05);IGF-1 C组为(1104.375±55.495) pmol/L,D组为(861.000±28.656),均有明显升高(P＜0.05),且C组作用较D组强.结论:中药桃仁承气汤可减轻糖尿病大血管纤维化,且早期干预对糖尿病大血管纤维化有预防作用.
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桃核承气汤对糖尿病鼠大血管纤维病变转化生长因子β和胰岛素样生长因子-1的表达干预作用
目的:通过观测糖尿病鼠大血管病变中转化生长因子-β(TGF-β)和胰岛素样生长因子-1(IGF-1)表达,及中药干预作用,明确中药在治疗糖尿病大血管纤维病变的效果.方法:雄性SD大鼠170只,正常对照组30只,余140只造糖尿病模型模,成功123例,随机分为4组:模型对照组31只、中药高剂量治疗组30只、中药中剂量治疗组31只、中药低剂量治疗组31只.药物干预第1周、12周、20周,按计划处死大鼠,各组分别取材.光镜下观测股动脉细胞形态学改变;免疫组化法检测糖尿病大鼠大血管中TGF-β、IGF-1表达情况.结果:糖尿病大鼠股动脉血管平滑肌细胞排列紊乱,内膜、中膜层明显增厚,血管腔狭窄,以纤维性增生为主.与正常对照组比较,各实验组大鼠TGF-β表达水平均有所上升(P＜0.05),而各组大鼠IGF-1表达水平均有所下降(P＜0.05),中药桃核承气汤干预可降低糖尿病大鼠大动脉中TGF-β表达,升高IGF-1表达.其干预作用与用药剂量相关.结论:中药桃核承气汤能有效降低致纤维化因子TGF-β表达,并升高IGF-1在实验性糖尿病鼠大血管纤维病变中的表达,其对糖尿病大血管纤维病变有改善作用,并存在剂量依赖关系.
