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过氧亚硝基在机械性创伤致心肌细胞凋亡中的作用
目的 通过制备小鼠机械性创伤模型,观察过氧亚硝基(ONOO-)在机械性创伤致心肌细胞凋亡中的作用和机制.方法 利用 Noble-Collip 创伤仪制作非致死性小鼠创伤模型,通过比色法测定心肌组织 caspase3 活性,TUNEL染色观察心肌细胞凋亡指数,化学发光法检测总一氧化氮(NOx)含量,ELISA 方法检测心肌组织中过氧亚硝基标志物硝基酪氨酸(Nitrotyrosine,NT)含量.结果 机械创伤小鼠心肌组织中发生明显的细胞凋亡,同时心肌组织中一氧化氮含量和硝基酪氨酸含量均增高.结论 过氧亚硝基造成的心肌组织蛋白质硝基化是机械创伤致心肌细胞凋亡的重要机制,减少过氧亚硝基的生成有助于减轻机械创伤后心肌损伤.
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大鼠在体心肌缺血-再灌注早期应用L-精氨酸对心功能的保护作用
目的 心肌缺血/再灌注早期给予L-精氨酸,观察其对心脏的保护作用.方法 雄性 Wistar 大鼠 45 只,随机分为 3 组(n＝15):伪手术组(Sham 组),缺血/再灌注+生理盐水组(Vehicle 组),L-精氨酸早期处理组(L-Arg 组).结扎大鼠心脏左冠脉前降支,建立在体心肌缺血/再灌注模型,缺血 30 min、再灌注 5 h,分别在缺血/再灌注早期和晚期给予 L-精氨酸.动态监测大鼠左心室功能;再灌注结束后,以 Evan′s 蓝和 TTC 双染法检测心梗面积,化学发光法检测总 NO(NOx)含量,以 ELISA 法检测心肌组织过氧亚硝基(ONOO-)标志物硝基酪氨酸含量.结果 再灌注早期给予 L-精氨酸显著减轻了缺血/再灌注诱导的大鼠心功能降低(LVSP 和 dp/dtmax)、减少了心肌梗死面积、减少了心肌组织细胞毒性物质 ONOO-的生成.结论 心肌缺血/再灌注早期给予 L-精氨酸可以通过增加 NO 的生成,减轻再灌注诱导的心肌损伤,进而加快心肌缺血/再灌注后心功能的恢复.
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氨基胍缓解糖尿病大鼠主动脉内皮损伤
糖尿病大血管病变是糖尿病严重慢性并发症之一,其病理基础是动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS).血管内皮损伤被认为是AS的始动和关键环节.氨基胍(aminoguanidine,AG)对糖尿病主动脉内皮的保护作用,是否通过抑制诱导性一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS),进而降低过氧亚硝基(ONOO-)的过量生成而发挥作用?尚未见报道.本研究探讨AG对糖尿病大鼠主动脉内皮保护作用的机制.
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机械创伤通过增加活性氧和NO导致心肌细胞凋亡
目的 观察机械创伤后活性氧和一氧化氮(N0)水平的变化规律,并探讨其在创伤致心肌细胞凋亡中的作用. 方法 使用Noble-Collip创伤仪制备大鼠机械创伤模型.创伤后0,3,6,12,24 h检测各指标.同时在创伤后随即给予FeTMPyP,按照2 mg/kg剂量腹腔注射,溶剂对照组给予等量生理盐水,创伤后12 h比较各指标.采用光泽精加强发光法测定心肌组织超氧阴离子的含量,应用化学发光法检测心肌组织NO的含量,通过ELISA方法测定心肌组织硝基酪氨酸(NT)含量,使用TUNEL和caspase-3活性测定两种方法观察心肌细胞凋亡情况. 结果 机械创伤后心肌细胞凋亡显著增高(P＜0.01),心肌组织超氧阴离子水平和NO含量显著升高(P＜0.01),且二者结合的产物过氧亚硝基(ONOO-)也明显增加(P＜0.01)；给予ONOO-清除剂可显著降低心肌组织NT水平(P＜0.01),且显著降低心肌细胞凋亡(P＜0.01). 结论 机械创伤通过使活性氧和NO水平增加而导致心肌细胞凋亡.
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两种筛选玄参中清除过氧亚硝基活性成分的在线检测方法比较研究
建立柱后HPLC-DAD-(Luminol-ONOO-)-CL(方法1)和柱前ONOO--HPLC-DAD(方法2)两种简单、快速在线检测清除ONOO-的方法,将这两种方法应用于从玄参中筛选具有清除ONOO-作用的活性物质,并结合HPLC-ESI-Q-TOFMS/MS对主要的活性成分进行鉴定.方法l从玄参中共筛选出了P1 (decaffeoylacteoside)、P9 (acteoside)、I6(6"-O-feruloylharpagide)、P11 (cis-acteoside)、P13(angoroside)等5个具有清除ONOO-作用的活性成分,方法2从玄参中筛选出了P9和P13两个具有清除ONOO-作用的活性成分.两种筛选方法各具特点:方法1需要的仪器系统较为复杂,操作简单检测灵敏度高;方法2需要的仪器简单,操作相对方法1繁琐且灵敏度低.但是筛选结果表明,方法1和方法2均可以从复杂体系中快速地筛选出具有清除ONOO-作用的活性物质,这两种方法可以为中药复杂体系中天然ONOO-清除剂的快速发现提供技术平台.
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外周血循环内皮祖细胞减少参与了硝化应激引起的衰老大鼠阻力血管内皮依赖性舒张功能降低
目的：观察自然衰老大鼠中硝化应激对阻力血管内皮依赖性舒张功能的影响，探讨衰老血管内皮功能障碍的机制。方法：3月龄、9月龄和20月龄健康雄性SD大鼠分为：青年组、中年组、老年组及各自给予过氧亚硝基（ peroxynitrite， ONOO－）清除剂（ FeTMPyP）组。 Weastern blot检测肝脏衰老相关蛋白P53和P21水平；免疫组化法检测血管3－硝基酪氨酸（3－nitroty－rosine，3－NT）水平；离体动脉血管环灌流，观察其对不同浓度乙酰胆碱（ acetylcholine， ACh）的反应；流式细胞术检测外周血内皮祖细胞数量。结果：免疫组化结果显示衰老大鼠肠系膜动脉3－NT水平升高，提示出现明显的硝化应激反应，采用FeTMPyP干预可明显降低3－NT水平；衰老大鼠肠系膜动脉内皮依赖性舒张功能和外周血循环内皮祖细胞数量较青年和中年大鼠显著下降，采用FeTMPyP干预可明显提高衰老阻力血管内皮依赖性舒张功能和外周血循环内皮祖细胞的数量。结论：外周内皮祖细胞减少参与了硝化应激引起的衰老大鼠阻力血管内皮依赖性舒张功能降低。
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养阴活血方药对糖尿病大鼠肾皮质氧化应激损伤的保护作用
目的:通过观察养阴活血方药对糖尿病(DM)大鼠肾皮质一氧化氮合酶(NOS)及过氧亚硝基(ON00)水平的影响,探讨养阴活血方药对糖尿病大鼠肾皮质氧化应激损伤的保护作用.方法:将16只SD大鼠采用链脲佐菌素(STZ)复制糖尿病大鼠模型造模,造模成功后,随机分为糖尿病对照组(DM组,n=8)和养阴活血方药组(NYPBR组,n=8),另设8只健康SD大鼠为正常对照组(NC组).NYPBR组给予养阴活血方药干预.至10周末,检测各组大鼠肾皮质丙二醛(MDA)含量及超氧化物岐化酶(SOD)、总NOS(TNOS)、诱导型NOS(iNOS)和固有型NOS(cNOS)的活性,免疫组化检测肾皮质ON00-特异性标志物硝基酪氨酸(NT)的生成,检测各组大鼠血糖、体质量、肾质量、24小时尿蛋白及血肌酐.结果:与NC组相比,DM组大鼠肾皮质MDA[(1.78±0.16) nmol/mgprot]水平升高(P＜0.05),SOD [(68.96±3.82)U/mgprot]活性下降,TNOS(3.44±0.30)U/mgprot与iNOS (2.54±0.21)U/mgprot活性显著升高,NT[(42.66±3.14)]生成明显增加,肾质量/体质量、24小时尿蛋白、血肌酐水平显著升高.上述指标2组比较差异均有统计学意义(P＜0.05).干预后,BYPBR组肾质量/体质量、24小时尿蛋白、血肌酐较DM组均有明显改善,MDA[(1.56±0.08) nmol/mgprot]下降,SOD[(76.44±4.90) U/mgprot]升高,i-NOS[(2.54±0.21)U/mgprot]活性和NT(26.19±1.58)生成均显著降低,上述指标组内比较差异均有统计学意义(P＜0.05).cNOS 3组比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论:NYPBR可显著减轻糖尿病大鼠肾皮质氧化应激损伤,此作用可能与提高SOD活性,降低iNOS活性及ON00-的生成有关.
