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利用免疫磁珠法分离环境及食品中产生TDH副溶血性弧菌的研究
采用免疫磁珠法分别从1份海水、1份海泥和3份蛤肉中检出了神奈川现象阳性,并产生耐热直接溶血毒素(TDH)的副溶血性弧菌,血清型为O3:K6.该方法与一般的细菌培养分离法相比,极大地提高了环境样品及食品中病原性副溶血性弧菌的检出率,也为研究TDH阳性副溶血性弧菌在环境中的分布及预防由其引起的食物中毒提供了依据.
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1株大肠埃希菌O157:H45的鉴定
2000年8月,我们用免疫磁珠法(IMS)对动物粪便分离O157:H45调查中,从鸭粪中分离出1株大肠埃希菌O157:H45菌株.
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小细胞肺癌外周血肿瘤细胞定量研究方法的比较
目的 建立定量检测小细胞肺癌(SCLC)循环肿瘤细胞(CTC)的方法,分析其敏感性和稳定性.方法 设计前胃泌素释放肽原(preproGRP)特异性引物和探针,建立检测preproGRP mRNA的定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法,通过癌细胞掺入法评价检测的敏感性.同时采用免疫磁珠法(MACS)分离纯化外周血CTC,结合形态学诊断计数CTC.结果 MACS分离外周血CTC的敏感性为30％左右,检出下限为5个CTC/ml全血.preproGRP定量RT-PCR检测外周血CTC的敏感性为0.64个CTC/反应,检出下限为50个CTC/ml全血,低于MACS,但通过Ct值计算的CTC数量与实际细胞数量符合程度(80％左右)高于MACS法.结论 preproGRP定量RT-PCR和MACS在检测SCLC患者外周血CTC方面各有优缺点,MACS敏感性更高,适合＜50个CTC/ml全血的检测,preproGRP定量RT-PCR检测的CTC数量更符合实际含量.
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免疫磁珠法分离和纯化重症肌无力患者骨髓CD34+造血干细胞
目的分离和纯化重症肌无力(MG)患者骨髓CD34+造血干细胞. 方法采用免疫磁珠法(MiniMACS)分离和纯化CD34+细胞,用流式细胞仪对其进行评估并检测纯化后细胞活力. 结果骨髓分离纯化前、后CD34+ 细胞的百分率分别为(2.65±0.65)% 、(85.37±7.47)% (P<0.001);CD34+细胞分离纯化前、后细胞活力未受影响(P>0.05). 结论 MiniMACS可有效地分选MG患者CD34+骨髓造血干细胞,且细胞活力不受影响.
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内皮祖细胞及其在血管组织工程中的应用
内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)是指能从骨髓迁移到外周血,并分化为血管内皮细胞的祖细胞,又称血管内皮干细胞(endothelial stemcells).1997年Asahara等[1]应用免疫磁珠法从成人外周血中分离CD34+细胞,并在预衬纤维连接蛋白(fibronectin,Fn)的培养皿培养,得到的细胞可表达vWF、CD34、CD31、VEGFR-2等内皮细胞特异性抗原,因而将CD34+细胞命名为内皮祖细胞.
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用免疫磁珠检测T淋巴细胞亚群的方法评估
T淋巴细胞是机体免疫系统内功能重要的一大细胞群,不同的T淋巴细胞亚群的数量和功能发生异常可以导致机体免疫系统紊乱,发生一系列的病理变化.因此,T淋巴细胞亚群的检测对于控制疾病的发生、发展和了解发病机制、指导临床治疗、判断预后等均有重要的理论意义和临床意义.免疫磁珠法是近年来应用于临床的新的检测方法,它具有操作简单、快捷,稳定性和重复性良好,无需特殊的仪器设备,试剂费用较低等优点,现将免疫磁珠(DYNAbeads)法进行重复性、稳定性评估,结果总结如下
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嗜酸性粒细胞的提纯
正常人血液中嗜酸性粒细胞占白细胞的0.5%～5%,绝对值小于0.5×109/L.在患变态反应性疾病、寄生虫病(特别是寄生在肠道外组织的寄生虫)、皮肤病、血液病等疾病时嗜酸性粒细胞数升高,尤其是前两者其比例可达10%或更多.
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重症肌无力患者造血干/祖细胞及其亚群富集纯化的研究
目的:获得高纯度造血干/祖细胞及其亚群, 用于重症肌无力(MG)造血干细胞移植治疗和生物学特性的研究.方法:用免疫磁珠法(Mini MACS)从MG骨髓中富集CD34+细胞后再用荧光激活细胞分选(Fluorescent activated cell sorter, FACS)纯化CD34+/CD38+和T CD34+/CD38-细胞亚群. 结果:MiniMACS分选的CD34+细胞群纯度达90%, FACS 分选的CD34+/CD38-和CD34+/CD38+两细胞亚群纯度可达95%以上. 结论:联合使用MiniMACS和 FACS可迅速大量纯化HSC/HPC及其重要细胞亚群, 可用于临床造血干细胞移植、基因治疗和研究HSC/HPC及其亚群生物学特性.
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间充质干细胞分离方法的研究与进展
背景：间充质干细胞作为种子细胞广泛应用于组织工程和临床治疗，而安全、高效的分选方法是间充质干细胞建系的前提。
目的：综述近年来间充质干细胞分选方法的研究进展，比较各方法的优缺点，为安全、高效分离间充质干细胞提供理论依据。
方法：第一作者检索 CNKI 数据库(http：//epub.cnki.net/)和 PubMed 数据库(http：//www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/)的相关文献。中文检索词为“间充质干细胞、分离方法”；英文检索词为“mesenchymal stem cel s (mscs)，isolation methods”。查阅1965至2014年来间充质干细胞分离方法的相关文献，包括综述、临床研究和基础研究，终纳入52篇文献。
结果与结论：①全骨髓贴壁法可快速获得大量间充质干细胞，但需要进一步纯化。②梯度密度离心法选择密度为1.073 g/mL的介质在原代能得到相对较纯的间充质干细胞。③组织消化法适用于脂肪、脐带等组织进行消化分离，选用胶原酶Ⅱ消化效果更佳，但是均存在操作技术要求高的缺陷。④免疫磁珠法适用于研究表达特定细胞表面标记物的某一个间充质干细胞亚群的生物学特性。⑤各种分离方法相结合也是一种理想选择。⑥对于近年来出现的分离新方法，由于案例有限，其可靠性有待进一步研究。 -
结直肠癌干细胞增殖及侵袭中ABCG2基因的效应
背景:ABCG2转运蛋白能介导多重耐药,高表达 ABCG2蛋白能提高干细胞对于化疗药物的耐受性,但是ABCG2基因对结直肠癌干细胞增殖、侵袭机制尚未证实.目的:探讨ABCG2基因在结直肠癌干细胞增殖、侵袭中的作用.方法:常规培养结直肠癌细胞系HCT116,将其随机分为4份:其中2份采用免疫磁珠法分离CD133阳性细胞(结直肠癌干细胞),分别用ABCG2-siRNA和ABCG2过表达质粒转染,构建结直肠癌干细胞ABCG2蛋白低表达与过表达模型,设为ABCG2蛋白低表达和过表达组;另2份HCT116细胞分别设为细胞正常组、空质粒转染后对照组.用 MTT、Transwell 法测定不同模型下结直肠癌干细胞的增殖、侵袭变化;利用酶联免疫吸附实验及PCR法测定两种不同细胞模型下基质金属蛋白酶与mRNA表达水平.结果与结论:①流式细胞仪检测显示CD133阳性细胞在结直肠癌细胞系HCT116中占2.4%,经免疫磁珠分选纯化后其比例升至94.51%,证实分离培养的细胞为结直肠癌干细胞;②转染前4组细胞MTT值比较无差异(P > 0.05);ABCG2蛋白低表达细胞模型转染后MTT值低于过表达组(P < 0.05);③Transwell结果表明:ABCG2蛋白低表达组细胞迁移能力受到明显的抑制;而ABCG2过表达组穿过基底膜数目相对较多,细胞的迁移及侵袭能力明显增强(P < 0.05);④酶联免疫吸附实验显示ABCG2蛋白低表达组基质金属蛋白酶水平低于过表达组(P < 0.05);PCR测试mRNA结果与酶联免疫吸附实验相似;⑤提示:下调ABCG2蛋白表达能抑制结直肠癌干细胞增殖、侵袭,ABCG2基因通过调控基质金属蛋白酶水平影响结直肠癌干细胞活性.
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分离与鉴定人脂肪间充质干细胞来源的外泌体
背景:脂肪间充质干细胞是重要的种子细胞之一,可通过较简单的方法大量提取,但其储存条件较苛刻,运输不便,临床应用较困难.外泌体可由脂肪间充质干细胞分泌,其结构稳定,不易分解,为脂肪间充质干细胞在临床应用提供了新的可能性.目的:提取人脂肪间充质干细胞,鉴定脂肪间充质干细胞,诱导脂肪间充质干细胞多向分化,提取脂肪间充质干细胞来源的外泌体,鉴定脂肪间充质干细胞来源的外泌体.方法:收集青岛大学附属医院医学美容中心的正常成年女性行吸脂术后腹部浅层皮下脂肪组织,用酶消化法分离提取脂肪间充质干细胞进行原代培养,用细胞贴壁法纯化,胰酶消化传代.选取第3代细胞分别行流式细胞学鉴定,成脂肪细胞诱导与鉴定;成骨细胞诱导与鉴定.取第3-6代脂肪间充质干细胞,收集细胞上清液,差速离心法提取外泌体,BCA法测定蛋白浓度,透射电镜观察外泌体形态,粒度仪测外泌体直径分布,免疫磁珠法和流式细胞学鉴定.结果与结论:①脂肪间充质干细胞形态为长梭形,形似成纤维细胞,排列紧密时呈巢状;②流式细胞学检测显示CD29,CD44,CD90及CD105均为阳性表达,CD34和CD45为阴性表达;③成骨细胞诱导至第9天碱性磷酸酶染色为蓝紫色,诱导至21 d时,茜素红S染色可见细胞外基质内出现红色钙结节;④成脂肪细胞诱导14 d后油红O染色呈橘红色;⑤透射电镜显示外泌体结构为杯状,直径为(81.225±22.226)nm,有膜结构.蛋白浓度约为1.5 g/L,直径分布集中于70-100 nm,外泌体流式细胞学显示CD9,CD29,CD44,CD63,CD90和CD105为阳性表达,CD34和CD45为阴性表达;⑥结果证实,人脂肪间充质干细胞来源的外泌体能通过超速离心法顺利提取,并通过透射电子显微镜、免疫磁珠法和流式细胞学检测相结合的方法成功鉴定.
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补肾益气方对人蜕膜CD4+T细胞分泌IL-4和IFN-γ的调控作用
目的:观察补肾益气方对人早孕蜕膜CD4+T细胞分泌IL-4和IFN-γ的调节作用,探讨其调节母胎界面Th1/Th2免疫保胎机制.方法:将40只成年雌性SD大鼠随机分成两组:补肾益气方组和生理盐水组,分别灌服体积相同的中药和生理盐水,早晚各一次,3天后颈动脉取血;收集孕6～10周行人工流产术的正常孕妇的蜕膜组织,用免疫磁珠方法分离出CD4+T细胞进行培养,分4组:10%胎牛血清为正常对照组(A组),10%中药血清组(B组),20%中药血清组(C组),10%生理盐水血清组(D组),分别培养24、48、72小时,以ELISA检测法检测细胞培养上清中IL-4和IFN-γ的水平.结果:与A组相比,B组和C组的Th2型细胞因子IL-4的水平均显著升高(P＜0.05);Th1型细胞因子IFN-γ的水平显著降低(P＜0.01),但是B组和C组的结果之间无显著差异.结论:补肾益气方通过促进蜕膜CD4+T分泌IL-4,并抑制其产生IFN-γ,从而促进母胎界面形成Th2优势.
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基于免疫磁珠富集粪便脱落细胞的大肠癌筛选法
大肠癌是目前发病率、致死率均较高的恶性肿瘤,严重危害人民健康生活.现有的临床检测技术均存在一定的局限性,因而限制了其临床应用的范围.与常规临床大肠癌检测相比,粪便脱落细胞检测法具有高特异性、高灵敏性且容易被受试者接受等显著优点.作为新型的脱落细胞检测法一免疫磁珠富集粪便脱落细胞检测法除具有一般脱落细胞检测法的优点外,还具有细胞回收效率高、肿瘤细胞特异性高等优点.本文阐述了脱落细胞检测大肠癌的原理和基本方法,着重介绍了免疫磁珠富集脱落细胞的原理和操作过程以及针对脱落细胞进行大肠癌检测的多种方法,并对全自动、快速、高通量的自动化脱落细胞检测仪器应用于脱落细胞检测进行了展望.
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应用免疫磁珠法首次在宝山区检出大肠杆菌O157:H7
[目的]了解宝山区是否存在大肠杆菌O157:H7以及动物带菌和食品、水源的污染情况. [方法]对采集的肉、乳制品、家禽、家畜粪便,快餐原料、各类水源等标本应用免疫磁珠法集菌进行E.coliO157:H7分离和鉴定. [结果]共采集家禽、家畜、肉乳制品、快餐原料、各类水源等标本610份,检出E.coliO157:H7 3株,总检出率为0.49%.其中以肉类制品检出率高,为1.37%;其次为其它标本,检出率为1.02%,家禽、家畜粪便,检出率为0.38%. [结论]宝山区存在O157:H7大肠杆菌感染爆发或流行的隐患.
关键词： 免疫磁珠法 O157:H7大肠杆菌 检出率 -
免疫磁珠法富集循环肿瘤细胞研究进展
循环肿瘤细胞富集为肿瘤的分期诊断、判断复发、分析预后和制定个体化治疗的有力向导.本文综述了免疫磁珠法富集肿瘤细胞的原理,肿瘤细胞检测的方法比较及常用的细胞表面标志物和目前临床上的实际应用方面的进展.
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用免疫磁珠法检测抗白念珠菌烯醇化酶抗体
目的 建立检测人血清抗白念珠菌烯醇化酶(Eno) IgG类抗体的免疫磁珠法,并评估其在念珠菌血症诊断中的价值.方法 将Eno重组蛋白耦联至磁性微珠上,以辣根过氧化物酶(HRP)标记的羊抗人IgG为二抗,优化免疫磁珠法的反应条件,考察其精密度和特异性.收集经血培养确诊的念珠菌血症患者(n=113)、念珠菌定植者(n=50)、细菌菌血症患者(n=30)和健康人对照者(n=100)血清,用免疫磁珠法测定抗Eno抗体,并与ELISA法结果进行比较.结果 免疫磁珠法测定抗Eno抗体的批内、批间变异系数(CV)分别为8.2％和14.2％,重组Eno抗原对相应抗体的阻断率为91.6％.以吸光度(A)值0.29为cut off值时,诊断念珠菌血症的敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值分别为80.5％、92.3％、90.1％和84.5％.免疫磁珠法的敏感性和特异性与ELISA法比较无统计学差异,但检测流程从37℃2.5h缩短至常温1h.结论 免疫磁珠法检测抗Eno IgG类抗体简便、快捷、可靠,在侵袭性念珠菌感染研究中具有潜在的应用价值.
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免疫磁珠法纯化自体外周血CD34+造血干细胞移植治疗重症肌无力2例(附文献复习)
目的 探讨免疫磁珠法纯化自体外周血CD34+造血干细胞移植治疗难治性重症肌无力的临床疗效.方法 对难治性重症肌无力2例进行免疫磁珠法纯化的CD34+细胞移植,动员得CD34+细胞分别为1.7×106个/kg,2.4×106个/kg;纯化后CD34+细胞分别为1.02×106个/kg,1.68×106个/kg.纯度和回收率分别为:83.13%、60.04%:92.45%、70.15%.采用氟达拉滨、抗胸腺细胞球蛋白和环磷酰胺组成预处理方案.结果 2例患者均造血重建,肌无力症状1例消失,1例明显改善.结论 免疫磁珠法纯化的自体外周血CD34+造血干细胞移植可使患者造血功能得到较快重建,临床症状改善,效果显著.
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外周血CD5+ B淋巴细胞与不明原因自然流产的关系性研究
目的:通过检测不明原因自然流产患者和正常育龄妇女外周血CD5+B淋巴细胞的含量,探讨CD5+B淋巴细胞与不明原因自然流产的关系.方法:选择自然流产患者5例,正常育龄妇女5例.运用免疫磁珠法分离外周血中B淋巴细胞,采用流式细胞术检测CD5+B淋巴细胞的含量.结果:正常育龄组外周血中CD5+B淋巴细胞的比例为(0.78±0.40)％;自然流产组为(6.64±4.34)％.自然流产组明显高于正常育龄组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:CD5+B淋巴细胞可能参与不明原因自然流产的发病过程.
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免疫磁珠法分选小鼠肝脏Kupffer细胞及其特性观察
目的:建立免疫磁珠法,分离纯化小鼠肝脏Kupffer细胞并进行功能鉴定.方法:采用原位肝脏酶灌注、制备肝非实质细胞悬液、加入PE标记的大鼠抗小鼠F4/80一抗,然后结合山羊抗大鼠IgG Dynabeads免疫磁珠分选Kupffer细胞,流式细胞仪检测其纯度并检测其吞噬功能.结果:在经过胶原酶Ⅳ型消化、免疫磁分选,获得小鼠肝Kupffer细胞产量约为(8.05±0.34)×106/鼠肝,细胞纯度为(96.6±0.7)%,细胞活力大于90%.结论:应用免疫磁珠法能有效地分离纯化小鼠肝脏Kupffer细胞,为体外进一步研究提供了高纯度和活力的Kupffer细胞群.
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结直肠癌患者外周血 LAP ＋CD4＋调节性T 细胞的分离纯化及功能鉴定
目的：应用免疫磁珠分选法分离纯化结直肠癌患者外周血中 LAP ＋CD4＋调节性 T 细胞（LAP ＋CD4＋T），并对分选获得的目的细胞进行体外功能的初步研究。方法按照免疫磁珠两步法（阴性分选和阳性分选）分离结直肠癌患者外周血单个核细胞中的 LAP ＋CD4＋T 细胞，流式细胞术（FACS）检测分选后细胞的纯度；台盼蓝染色检测细胞存活率；CCK-8掺入法检测其对 LAP －CD4＋T 细胞的增殖抑制效应；ELISA 法检测体外细胞因子 TGF-β和IL-10表达。结果经免疫磁珠法分选获得的 LAP ＋CD4＋T 细胞纯度为（95．16±2．11）％，台盼蓝染色细胞存活率为（93．64±1．33）％。CCK-8掺入法检测结果显示 LAP ＋CD4＋T 细胞干预后 LAP －CD4＋T 细胞生长明显受到抑制（P ＝0．000）；ELISA 结果显示 LAP ＋CD4＋T 细胞较 LAP －CD4＋T 细胞分泌更高浓度的细胞抑制因子 TGF-β和 IL-10（P ＝0．000）。结论免疫磁珠法分选结直肠患者外周血中 LAP ＋CD4＋T 细胞具有高效、快捷、纯度高等优点，且不损伤细胞活性。
关键词： 结直肠癌 免疫磁珠法 LAP +CD4 +调节性 T 细胞
