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云南省华宁县荒川库蠓形态和遗传多态性研究
目的 了解云南省荒川库蠓形态多样性及遗传多态性.方法 2015年7月在云南省华宁县采集库蠓样本,制备压片进行形态学鉴定,同时提取基因组DNA,用细胞色素氧化酶亚基Ⅰ(COⅠ)基因和间隔区-1(ITS-1)基因特异引物进行PCR扩增和序列测定,采用Clustal X、DNAStar和Mega 6.1等软件进行核苷酸同源性和遗传进化分析.结果 共采集到库蠓955只,其中12只库蠓在R1和R2室下端多出1个淡斑,翅面共有15个淡斑;另外943只库蠓翅面有14个淡斑.对12只翅面有15个淡斑的库蠓(A组)和14只翅面有14个淡斑的库蠓(B组)进行形态学和分子生物学鉴定,26只库蠓均具有两复眼分离、小眼面间无柔毛、触角第15节无嗅觉器、1个大梨形受精囊、翅面有小圆形淡斑的形态学特征.两组库蠓的HR和TR2值差异有统计学意义(P＜0.05),而AR、PR、CR和TR1、TR3值的差异均无统计学意义(P＞0.05).CO Ⅰ基因和ITS-1基因遗传进化分析显示26只库蠓与荒川库蠓亲缘关系近;但是在CO Ⅰ基因进化树上26只库蠓分为明显的两个进化簇,其中14只库蠓(B组)形成1个单独的进化簇,与另一进化簇核苷酸同源性在94％以下.结论 云南省华宁县除了荒川库蠓外,还存在1种翅面有形态差异的变种库蠓以及CO Ⅰ基因序列差异较大的荒川库蠓,提示该地区荒川库蠓的形态学和遗传学具有多态性.
关键词： 荒川库蠓 细胞色素氧化酶亚基Ⅰ基因 间隔区-1基因 分子鉴定 多态性 -
云南省江城县苏岛库蠓形态学和分子生物学鉴定
目的 采用形态学和分子生物学方法对在云南省江城县采集的库蠓进行鉴定,明确该库蠓的准确分类.方法 2017年9月在云南省江城县采集蠓虫样本,采用不损伤库蠓形态的方法提取基因组DNA,用CO Ⅰ基因和ITS-1基因特异引物进行PCR扩增和序列测定,采用Clustal X、DNAStar和Mega 6.1等软件进行核苷酸同源性和系统进化分析.同时将库蠓虫体压片,在体视显微镜下进行形态学鉴定,并计算AR、HR、PR、CR和TR1、TR2、TR3等数值.结果 在江城县采集15只库蠓,均具有两复眼相连接,小眼面间无柔毛,触角15节,第3、11～15节分布有嗅觉器,翅面翅基、径中、径端、径5室、中4室各有1个淡斑,中1室、中2室分别有2个和3个淡斑,其中基淡斑大,向后延伸至臀室基部翅缘;腹部有2个发达受精囊不等大,PR=3.10:±0.48,与苏岛库蠓PR值差异无统计学意义(t=1.79,P＞ 0.05).遗传进化分析显示,在ITS-1基因进化树上江城县采集的15只库蠓与苏岛库蠓位于同一分支内,核苷酸同源性在96.8％～99.3％之间,而与其他库蠓核苷酸同源性均低于94.2％;在CO Ⅰ基因进化树上15只库蠓形成一个独立进化簇,这15只库蠓核苷酸同源性在99.4％以上.结论 15只江城采集的库蠓均为苏岛库蠓,其种内变异较小.本研究增添了苏岛库蠓种类鉴定所需要ITS-1基因和CO Ⅰ基因序列,为库蠓快速鉴定和遗传进化研究提供了序列信息.
关键词： 苏岛库蠓 细胞色素氧化酶Ⅰ基因 间隔区-1基因 分子鉴定 形态学鉴定
