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克里米亚-刚果出血热病毒实时荧光RT-PCR检测方法的建立
目的 建立一种快速、敏感检测克里米亚-刚果出血热病毒的实时荧光RT-PCR检测方法.方法 分析克里米亚-刚果出血热病毒S基因片段核酸序列的保守性,设计实时荧光RT-PCR引物和探针,优化引物和探针浓度,确定佳反应体系,并进行灵敏性、重复性、特异性检测.结果 建立的克里米亚-刚果出血热病毒实时荧光RT-PCR方法的检测灵敏性为7.26× 102 copies/μ1,重复性好,与汉坦病毒等无交叉反应.结论 建立的克里米亚-刚果出血热病毒实时荧光RT-PCR法能准确、快速地检测克里米亚-刚果出血热病毒.
关键词： 克里米亚-刚果出血热病毒 实时荧光RT-PCR -
克里米亚-刚果出血热病毒特征核酸序列克隆载体的构建
[目的]构建含有克里米亚-刚果出血热病毒特征序列的克隆载体.[方法]设计RT-PCR引物及反应体系,从克里米亚-刚果出血热病毒RNA中扩增获得目的序列,进行分离纯化和回收,将纯化的扩增片段与pMD18-T载体进行连接,进行酶切鉴定与测序鉴定.[结果]确定检测克里米亚-刚果出血热病毒一步法RT-PCR的反应条件及体系,引物终浓度为400nmol/L,反应条件为:50℃ 30 min,94℃4 min,94℃ 30s,57℃ 30 s,72℃30 s,35cycles.成功将CCHF的特征序列片段克隆,pMD18-T载体经DNA测序鉴定正确.[结论]构建的pMD18-CCHF质粒,可用于克里米亚-刚果出血热病毒RT-PCR实验的阳性对照.
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基孔肯亚热、克里米亚-刚果出血热、裂谷热病毒核酸液相芯片检测方法的建立
目的 建立基孔肯亚热、克里米亚-刚果出血热、裂谷热病毒核酸液相芯片检测方法.方法 建立探针偶联至荧光微球、多重PCR扩增方法、杂交检测方法,并对所建立的液相芯片检测方法的灵敏度和特异性进行评价.结果 建立的液相芯片检测方法能对基孔肯亚热、克里米亚-刚果出血热、裂谷热病毒中的任意1种、任意2种或者3种同时进行筛查检测,基孔肯亚热病毒检测的灵敏度为1×104 copies/PCR,克里米亚-刚果出血热病毒检测的灵敏度为1×105copies/PCR,裂谷热病毒检测的灵敏度为1×103 copies/PCR.该方法对汉坦病毒、埃博拉病毒、黄热病毒、西尼罗病毒、马尔堡病毒的检测结果均为阴性.结论该方法具有高通量、多重检测、快速、敏感、特异的特点,为基孔肯亚热、克里米亚-刚果出血热、裂谷热病毒的筛查检测提供一种新方法.
关键词： 基孔肯亚热病毒 克里米亚-刚果出血热病毒 裂谷热病毒 液相芯片 检测 -
NanoLuc标记的重组克里米亚-刚果出血热病毒及其初步用于抗病毒药物筛选
目的 为了构建可分泌表达NanoLuc荧光素酶的重组克里米亚-刚果出血热病毒(Crimean-Congo hemorrhagic fever virus,CCHFV)并探讨其用于抗病毒药物高通量快速初筛的可行性.方法 将NanoLuc基因与CCHFV M节段上的mucin编码框融合,拯救重组病毒,并以利巴韦林为阳性对照,评估Furin抑制剂在体外对重组病毒的抑制效果.结果 成功获得可分泌表达NanoLuc荧光素酶的重组CCHFV(rCCHFV mucin NLuc),且在感染细胞上清中,表示NanoLuc活性的相对光单位(relative light unit,RLU)与病毒半数组织感染剂量(TCID50)呈显著正相关性(cor=0.998,P=0.001).10μmol/L浓度下,Furin抑制剂处理后1～3 d感染细胞上清中NanoLuc荧光素酶活力与利巴韦林处理组无明显差异(P>0.1),但第4天Furin抑制剂处理组上清中RLU值显著高于利巴韦林处理组(P=0.001),且与未处理病毒对照组无明显差异(P>0.1).结论 成功构建1株NanoLuc标记的rCCHFV并可用于抗病毒药物的体外快速初筛.
关键词： 荧光素酶 克里米亚-刚果出血热病毒 抗病毒药物 筛选 -
感染乳鼠组织中克里米亚-刚果出血热病毒的RT-PCR检测与形态学鉴定
目的:检测并鉴定感染组织中的克里米亚-刚果出血热病毒.方法:分别经皮下与腹腔两种途径感染乳小鼠;应用RT-PCR技术对病毒核酸进行检测;利用透射电镜超薄切片技术对病毒进行形态学鉴定.结果:RT-PCR可在心脏、肝脏、脾脏、肾脏以及脑组织内检测到病毒核酸,透射电镜下可在肝细胞胞浆内观察到形态典型的病毒粒子.结论:应用RT-PCR技术可以对感染组织中的克里米亚-刚果出血热病毒进行检测,利用透射电镜可以对病毒的形态进行观察与鉴定.
关键词： 克里米亚-刚果出血热病毒 逆转录-聚合酶链反应 形态学 -
克里米亚-刚果出血热病毒新型治疗性抗体研制展望
随着人们认识的增加,烈性传染性病毒不断被发现和鉴定,高致病性、高传播性的病毒往往由于变异,导致反复流行.如在非洲和阿拉伯半岛多次暴发 1931 年 首 次 分 离 到 的 裂 谷 热 病 毒 (Rift Valley fever virus,RVFV)[1];1937 年发现于非洲,并于1999 年传入美国且在多个州暴发的西尼罗病毒(West Nile virus,WNV)[2-3];1944、1956、1965 年分别发现于俄国克里米亚、非洲刚果和我国新疆巴楚地区的克里米亚-刚果出血热病毒(Crimean-Con-go haemorrhagic fever virus,CCHFV),1967 年分离出该病毒,被我国称为新疆出血热病毒(Xinjiang haemorrhagic fever virus,XHFV)[4].
关键词： 克里米亚-刚果出血热病毒 新疆出血热病毒 抗体 展望 -
克里米亚-刚果出血热病毒疫苗的研究进展
克里米亚-刚果出血热病毒(CCHFV)是引起克里米亚-刚果出血热的病原体,尚缺乏特异性的治疗药物和预防控制疫苗.本文综述了当前CCHFV疫苗的研究进展,并分析了疫苗存在的问题及研制策略.
关键词： 克里米亚-刚果出血热病毒 新疆出血热 疫苗
