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柳州市和喀什地区推广应用结核病新诊断技术的效果分析
目的 探索我国边疆少数民族地区推广应用发光二级管荧光显微镜(简称“LED荧光显微镜”)和线性探针耐药检测技术的可行性.方法 采用典型调查,选择广西壮族自治区柳州市和新疆维吾尔自治区喀什地区作为研究现场,研究对象为2013年1月1日至2016年12月31日期间,所有初次到当地结核病防治机构(简称“结防机构”)就诊的肺结核可疑症状者.推广新技术前(2013年)柳州市和喀什地区分别纳入肺结核可疑症状者14 337和32 022例;推广新技术后(2014-2016年)柳州市和喀什地区分别纳入肺结核可疑症状者年平均12 796和36 649例.推广的新技术主要为研究地区县级结防机构配备LED荧光显微镜,对初诊患者的痰标本进行涂片镜检,以诊断涂片阳性肺结核和活动性肺结核;地市级结防机构配备线性探针耐药检测设备和试剂,检测痰涂片阳性标本对一线抗结核药物利福平和异烟肼的耐药性.回顾性收集推广新技术前的数据,并前瞻性收集推广新技术后的数据,对比分析推广新技术前后初诊患者查痰率和耐药高危人群耐药筛查率的变化情况.结果 柳州市和喀什地区初诊患者查痰率分别从推广新技术前的54.15％(7763/14 337)和65.36％(20 930/32 022)增加到推广新技术后的年平均64.25％(8221/12 796)和74.34％(27 246/36 649),差异均有统计学意义(x2=285.00,P＜0.001;x2=658.00,P＜0.001);其中,LED荧光显微镜查痰比率从均为0.00％分别增加到79.36％(6524/8221)和92.88％(25 307/27 246),差异均有统计学意义(Fisher精确检验法,P值均＜0.001).2个地区耐药高危人群筛查率从均为0.00％分别增加到94.61％(158/167)和74.96％(494/659),差异均有统计学意义(Fisher精确检验法,P值均＜0.001);其中使用线性探针检测的比率从均为0.00％分别增加到80.38％(127/158)和52.83％(261/494),发现的利福平耐药肺结核和(或)耐多药肺结核患者例数占总例数的比率从均为0.00％分别增加到81.82％(9/11)和53.06％(26/49).结论 结核病新诊断技术有助于边疆少数民族地区实现结核病防治规划目标,应用于边疆少数民族地区具有现实可行性,但需要长期持续的保障.
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荧光PCR熔解曲线法检测结核分枝杆菌耐药基因的结果分析
目的 分析和探讨荧光PCR熔解曲线法对结核病的诊断和耐药检测的应用价值.方法 收集2015年9月至2016年12月新疆维吾尔自治区胸科医院的976例疑似结核病患者的痰标本,运用探针荧光PCR熔解曲线法来检测结核分枝杆菌及其对利福平、异烟肼的耐药突变情况.以BACTEC MGIT 960液体培养法及液体药敏试验检测结果为标准,评价探针荧光PCR熔解曲线法鉴定结核分枝杆菌及其耐药突变检测的敏感度、特异度、一致率、Kappa值等.结果 以MGIT 960液体培养结果为标准,荧光PCR熔解曲线法鉴定结核DNA的敏感度为85.44％(135/158),特异度为94.01％(769/818),Kappxa值为0.75,诊断符合率为92.62％(904/976).以MGIT960液体药敏试验结果为标准,荧光PCR熔解曲线法对异烟肼耐药突变检测的敏感度为83.33％(20/24),特异度为94.59％(105/111),Kappa值为0.76,诊断符合率为92.59％(125/135);荧光PCR熔解曲线法对利福平耐药突变检测的敏感度为95.83％(23/24),特异度为95.50％(106/111),Kappa值为0.86,诊断符合率为95.56％(129/135).结论 荧光PCR熔解曲线法检测速度快,对利福平和异烟肼耐药突变检测结果具有良好的敏感度和特异度,可用于临床上对结核分枝杆菌利福平和异烟肼耐药情况的快速筛查.
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MTBDRplus V2用于诊断涂阴疑似肺结核患者的效果评价
目的 评价MTBDRplus V2线性探针技术(简称“MTBDRplus V2”)用于诊断涂阴疑似肺结核患者的检测效能.方法 连续纳入2014年1-12月在安徽省胸科医院和西安市胸科医院就诊的涂阴疑似肺结核患者1973例,对其1973份痰标本同时开展MTBDRplus V2和MGIT 960快速液体培养(mycobacterial detection system,BACTECTM MGITTM 960,简称“MGIT 960培养法”),对培养阳性鉴定为结核分枝杆菌复合群(Mycobacterium tuberculosis complex,MTBC)的菌株,开展利福平和异烟肼药物敏感性试验(简称“药敏试验”),对两种方法耐药检测结果不一致样本进行耐药相关基因测序验证.采用SPSS 22.0软件进行统计学分析,两种方法对MTBC检出率的比较使用x2检验,以P＜0.05为差异有统计学意义.对利福平和异烟肼耐药基因检测的效能比较分析用敏感度、特异度进行效果评估.结果 1973例涂阴疑似肺结核患者中,MTBDRplus V2和MGIT960培养法对MTBC 的检出率分别为27.67％(546/1973)和26.76％(528/1973),差异无统计学意义(x2=0.05,P=0.974).以MGIT 960培养法为标准,MTBDRplus V2检测痰标本中MTBC的敏感度和特异度分别为86.74％(458/528)和93.84％(1356/1445).以MGIT 960药敏试验检测利福平和异烟肼耐药结果为标准,MTBDRplus V2检测利福平和异烟肼耐药性的敏感度分别为94.34％(50/53)和77.38％(65/84),特异度为96.62％(372/385)和98.02％(347/354).结论 MTBDRplus V2可快速准确检测出涂阴疑似肺结核患者痰标本中的MTBC,并可同时检测利福平和异烟肼对MTBC的药物敏感性,其检测结果敏感度和特异度高,对于结核病防控有很好的应用价值.
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荧光PCR探针熔解曲线法检测结核分枝杆菌复合群对利福平和异烟肼耐药性的价值
目的 评价荧光PCR探针熔解曲线法(简称“探针熔解曲线法”)检测结核分枝杆菌复合群对利福平(RFP)和异烟肼(INH)耐药性的价值.方法 从2015年1月至2018年7月山东省菏泽市传染病医院收治的883例肺结核和耐多药结核病(MDR-TB)患者中,选择萋-尼染色结果为阳性的结核病患者的痰标本共215份(例)进行分离培养,对鉴定为结核分枝杆菌复合群(MTBC)的200株(例)菌株同时使用比例法药物敏感性试验(DST)和探针熔解曲线法检测对RFP和INH的耐药性.以DST检测结果为金标准,分析探针熔解曲线法检测RFP和INH的敏感度、特异度、符合率和一致性(Kappa检验).结果 200株(例)MTBC分离株中,以DST检测结果 为标准,探针熔解曲线法检测RFP耐药性的敏感度、特异度和符合率分别为96.4％ (106/110;95％CI:90.7％～98.9％)、80.0％(72/90;95％CI:70.5％～87.1％)和89.0％(178/200);对INH耐药性检测的敏感度、特异度和符合率分别为85.4％(123/144;95％CI:78.6％～90.7％)、96.4％(54/56;95％CI:87.7％～99.6％)和88.5％(177/200).探针熔解曲线法与DST检测MTBC对RFP耐药性的Kappa值为0.78,对INH耐药性的Kappa值为0.74.结论 探针熔解曲线法检测MTBC对RFP和INH的耐药性均有较高的敏感度和特异度,且探针熔解曲线法与DST检测MTBC对RFP和INH耐药性的一致性较高,有助于对耐药结核病患者的及早发现和治疗.
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食品中转基因大豆成分的定性和定量检测
为建立食品中转基因成分的定性定量分析,运用传统的定性PXR方法检测大豆加工产品中转基因成分的存在,运用Taqman探针技术,对存在的转基因成分进行准确定量.对于定量过程中由于扩增效率的不同造成的误差,通过大豆的内源基因Lectin进行校正,根据△Ct值对应于校正曲线计算出转基因大豆的含量.本方法灵敏度达到0.1%,误差范围小于30.0%.可用于转基因大豆的监测管理.
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多色组合探针实时PCR技术在检测食源性病原菌中的应用
目的 探讨多色组合探针编码技术实时PCR(MCPC-PCR)检测食品标本中的沙门菌和金黄色葡萄球菌等病原细菌的检测限,并应用于食物中毒标本的检测.方法 配制系列浓度(101～109CFU/ml)的菌悬液,以鲜肉样品和蛋糕制备模拟样本各11份,应用MCPC-PCR方法检测22份模拟标本中沙门菌和金黄色葡萄球菌;101份冻存的食物中毒标本营养肉汤增菌液,以及某次食物中毒事件的5例首批患者肛拭营养肉汤增菌液提取DNA后进行MCPC-PCR检测.结果 MCPC-PCR技术在食品标本中沙门菌和金黄色葡萄球菌检测的检测限为102copies/test(每个PCR测试管含有的拷贝数);101份冻存的食物中毒标本营养肉汤增菌液以MCPC-PCR检测,结果阳性23份,其中18份经细菌学方法分离菌株证实,MCPC-PCR和细菌学方法检测结果均相同的为96份,结果符合率达95.05%;采自某次食物中毒事件的5个首批患者肛拭标本MCPC-PCR检测结果提示为副溶血性弧菌,与细菌学分离结果完全符合.结论MCPC-PCR技术灵敏度高、特异度好,可应用于多种食源性病原菌的快速筛查和快速检测.
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多模态分子影像技术应用于肿瘤的研究进展
肿瘤是威胁人类健康的重要疾病之一[1].肿瘤的早期诊断和治疗是提高患者生存质和治愈率的关键.传统的X线、超声、CT、MRI和PET难以发现早期阶段的肿瘤,对其定位、定性诊断相当困难[2],而随着纳米技术的发展及分子探针在影像学中的不断应用,影像医学已从对传统的解剖和生理功能的研究深入到分子水平成像,为肿瘤的早期诊断、治疗及生物学特性研究带来了希望[3,4].
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一种快速定量检测炭疽杆菌方法的建立
目的建立一种快速、准确、特异定量检测炭疽杆菌的方法.方法根据复合探针荧光定量分析原理,以炭疽杆菌染色体rpoB基因为靶序列,设计合成引物和探针,对炭疽杆菌进行实时定量聚合酶链反应(PCR)检测,并探讨荧光探针与淬灭探针用量及比例、镁离子浓度、淬灭探针长度对定量结果的影响.结果本法适条件:荧光探针浓度300 nmol/L、荧光探针与淬灭探针的比例为1/2,镁离子浓度为3 mmol/L,淬灭探针长15个核苷酸,该法检测炭疽杆菌的灵敏度达103拷贝,能特异区分炭疽杆菌与其他蜡样杆菌. 结论复合探针荧光定量PCR技术能够快速准确、特异、敏感地对炭疽杆菌进行定量分析,可为临床诊断提供帮助.
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基于分子倒置探针的乙型肝炎病毒耐药基因单碱基突变检测技术的建立
目的：建立一种检测乙型肝炎病毒耐药基因单碱基突变的分子倒置探针（ MIP）检测技术。方法方法学建立。收集第三军医大学大坪医院检验科分离的乙型肝炎病毒（ HBV）耐药突变YVDD的野生株和突变株DNA。以HBV耐药基因突变YVDD为研究对象，建立针对该基因突变位点的MIP检测技术。分别采用构建的MIP技术和测序技术对1例HBV耐药突变YVDD野生株和1例突变株进行检测，通过比较MIP技术和测序技术的检测结果，明确MIP技术在临床标本检测中的准确性。结果 MIP技术用于单碱基突变检测时采用Taq DNA 连接酶和Ampligase DNA 连接酶进行热循环单碱基延伸及连接反应可保证检测的特异性。 MIP检测技术的佳探针浓度为1 nmol/L。通过对不同浓度靶序列的检测确定MIP技术的检测灵敏度为1 nmol/L。临床标本初步验证发现， MIP技术检测结果与测序方法结果一致。结论成功建立了检测HBV耐药基因单碱基突变的MIP技术。
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等温扩增检测耐药基因mecA方法的建立及其临床应用
目的建立环介导的等温扩增快速检测葡萄球菌耐药基因mecA的方法.方法利用包被有SPA单克隆抗体的磁珠富集样品中的金黄色葡萄球菌,快速提取其DNA, 用环介导的等温扩增反应(LAMP)扩增金黄色葡萄球菌耐药基因mecA,扩增条件为65°C 保温1 h.在反应过程中,荧光探针与mecA基因的扩增产物互补序列结合,产生荧光,通过检测反应管中的荧光值来判定结果.结果该方法的低检测限为10 CFU/ml,与M-H培养基苯唑西林药敏试验结果相比较,灵敏性99%,特异性90.9%;而与PCR方法比较,灵敏性100%,特异性100%;试验时间缩短为1 h.结论该方法具有灵敏度高,特异性强,操作简便快速,适用于检测临床标本中的MRSA.
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线性探针技术在骨关节结核快速诊断中的应用价值
目的 评估线性探针技术在骨关节结核快速诊断中的应用价值.方法 回顾性纳入新疆维吾尔自治区胸科医院骨科2014年1月至2017年2月接受病灶清除手术的157例疑似骨关节结核患者,同时采用线性探针技术、结核分枝杆菌培养及抗酸染色对病灶组织(均为术中切除病灶组织)进行检测.以临床诊断为金标准,计算线性探针技术检测结核分枝杆菌的敏感度、特异度,并结合药物敏感性试验(简称“药敏试验”)结果评价线性探针技术在骨关节结核快速诊断中的应用价值.结果 157例患者中127例临床确诊为骨关节结核,30例为非骨关节结核.线性探针技术、结核分枝杆菌培养及抗酸染色检测手术切除病灶组织的敏感度分别为76.38％(97/127)、55.12％(70/127)、37.01％(47/127),差异有统计学意义(x2=40.06,P＜0.05);特异度分别为73.33％(22/30)、76.67％(23/30)、93.33％(28/30),差异无统计学意义(x2=4.50,P=0.11).与结核分枝杆菌培养及药敏试验相比较,157例患者中,培养+药敏试验10例检测为耐药菌株,线性探针技术也检测出10例耐药菌株,患者与上述10例相同.其中,4例对异烟肼耐药,线性探针技术检测结果均为对异烟肼单耐药;1例对利福平耐药,线性探针技术检测为对异烟肼、利福平同时耐药;其余5例为耐多药结核病,线性探针技术检测结果均为对异烟肼、利福平同时耐药.结论 线性探针技术检测病灶组织中结核分枝杆菌的敏感度高、耗时短,且可同时检测样本中的结核分枝杆菌是否对异烟肼、利福平耐药,对骨关节结核快速诊断及耐药结核病的早期筛查有较好的临床应用价值.
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多色探针熔解曲线法在结核分枝杆菌耐药性检测中的应用
目的 评价多色探针熔解曲线法(multicolor melting curve analysis,MMCA)在MTB耐药性检测中的临床应用价值.方法 收集235例浓集抗酸杆菌检测阳性和(或)MTB分子检测阳性患者的晨痰,同时用MMCA和分枝杆菌液体培养及比例法药物敏感性试验(简称“药敏试验”)进行耐药性检测,采用Kappa检验比较两方法的一致性.两方法有差别的标本用基因测序的方法进行比较.结果 MMCA和比例法药敏试验检测利福平(RFP)、异烟肼(INH)、乙胺丁醇(EMB)、左氧氟沙星(Lfx)、莫西沙星(Mfx)及耐多药结核(MDR-TB)的符合率分别为94.04(221/235)、90.64％ (213/235)、80.00％ (188/235)、94.89％ (223/235)、77.87％ (183/235)、89.36％(210/235);RFP、INH、Lfx及MDR-TB两方法比较Kappa值分别为0.88、0.81、0.88、0.77,具有极好的一致性;以上不一致的标本经基因测序技术验证,痰液及培养分离株两种标本类型的MMCA与测序结果总符合率分别为89.80％(132/147)、98.64％(145/147).结论 采用MMCA法直接、快速检测临床患者痰液MTB耐药情况,与金标准比例法药敏试验及参考方法基因测序技术一致性好,且操作简便、快速、准确,在结核病诊断及耐药结核病快速筛查中将发挥重要作用.
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GenoType线性探针技术检测结核分枝杆菌及其药物敏感性的价值
目的 与对硝基苯甲酸(PNB)菌种鉴定法和BACTEC MGIT 960检测系统(简称“MGIT 960法”)药物敏感性试验(简称“药敏试验”)结果进行对比,评价GenoType线性探针技术(简称“GenoType法”)检测结核分枝杆菌(MTB)及其药物敏感性的应用价值.方法 选取2014-2015年天津市结核病控制中心门诊部确诊的364例涂阳肺结核患者作为研究对象,收集本次抗结核治疗前痰标本.应用GenoType法鉴定分枝杆菌菌种并检测其对异烟肼和利福平的耐药情况,并与PNB法菌种鉴定结果和MGIT 960法药敏试验结果进行比较,比较上述方法的检测敏感度、特异度及一致性.结果 以PNB法为金标准,GenoType法检测报告为“未检测到MTB”预判非结核分枝杆菌(NTM)的敏感度为83.3％(10/12),特异度为99.7％(351/352),一致率为99.2％(361/364),Kappa=0.87,差异无统计学意义(x2=0.33,P=0.56).以MGIT 960法为金标准,GenoType法检测对利福平耐药的敏感度为92.6％(25/27),特异度为97.5％(316/324),一致率为97.2％(341/351),Kappa=0.82,差异无统计学意义(x2 =3.60,P=0.06);GenoType法检测对异烟肼耐药的敏感度为68.7％(46/67),特异度为98.9％(281/284),一致率为93.2％(321/351),Kappa=0.75,差异有统计学意义(x2=13.50,P＜0.01);GenoType法判断耐多药的敏感度为69.2％(18/26),特异度为98.5％(320/325),一致率为96.3％(338/351),Kappa=0.71,差异无统计学意义(x2 =0.69,P=0.41).结论 GenoType法在检测MTB及其对利福平耐药和耐多药判断方面与表型药敏试验方法的检测结果具有较好的一致性,可用于指导临床治疗.
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采用GenoType MTBDR plus检测技术快速检测结核分枝杆菌耐药性的研究
目的 评价GenoType MTBDR plus方法[线性探针杂交技术(HAIN技术)中的一种方法,以下简称“HAIN技术”]检测深圳地区结核分枝杆菌菌株耐药性的临床应用能力.方法 采用HAIN技术检测2014-2016年深圳市耐药监测项目(来自于深圳市慢性病防治中心及深圳市各区慢性病防治院)的1140株临床菌株的耐药性,以传统药物敏感性试验(简称“药敏试验”)的比例法(简称“比例法药敏试验”)作为对照,评价HAIN技术检测耐药的能力.分别利用McNemar检验对检测效果进行评价,敏感度和特异度对检测结果真实性进行评价,阳性预测值和阴性预测值对检测方法应用价值进行评价,以及利用Kappa检验对两种方法检测结果的一致性进行评价.结果 比例法药敏试验检测结果为异烟肼耐药123例,利福平耐药75例,耐多药52例;HAIN技术检测异烟肼耐药120例、利福平耐药79例、耐多药52例,两种检测方法比较差异均无统计学意义(McNemar检验,P值分别为0.250、0.219、1.000).以比例法药敏试验结果为标准,HAIN技术检测异烟肼耐药的敏感度和特异度分别为97.6％(120/123)和100.0％(1017/1017),阳性预测值和阴性预测值分别为100.0％ (120/120)和99.7％(1017/1020),Kappa值为0.986;检测利福平耐药的敏感度和特异度分别为98.7％(74/75)和99.5％(1060/1065),阳性预测值和阴性预测值分别为93.7％(74/79)和99.9％(1060/1061),Kappa值为0.958;检测耐多药的敏感度和特异度分别为96.2％(50/52)和99.8％(1086/1088),阳性预测值和阴性预测值分别为96.2％(50/52)和99.8％(1086/1088),Kappa值为0.960.HAIN技术检测利福平耐药基因rpoB发生频率高的突变是野生型条带8缺失及S531L位点突变(58.7％,44/75),其次是野生型条带7缺失及H526Y位点突变(10.7％,8/75),以及单纯野生条带2缺失(10.7％,8/75);异烟肼耐药基因突变频率高的是katG的野生条带l缺失及S315T1位点突变(70.8％,85/120),其次是inhA的野生条带1缺失及C15T位点突变(18.3％,22/120).结论 HAIN技术是一种快速检测耐药结核病的诊断方法,对耐异烟肼和耐利福平有较高的敏感度和特异度,可用于临床结核病耐药的快速检测.
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线性探针技术检测结核分枝杆菌耐药性的效果分析
目的 探讨线性探针技术(GenoType(R) MTBDRplus)检测结核分枝杆菌耐药性的效能.方法 对378例结核分枝杆菌临床分离株采用分子线性探针技术检测利福平(RFP)和异烟肼(INH)的耐药性,并用传统比例法药敏试验(简称“药敏试验”)对该378例菌株进行RFP和INH的耐药性试验,比较两种方法检测耐药性的差别.用SPSS 13.0软件进行统计学分析.率的比较采用x2检验,P＜0.05为差异有统计学意义;一致性比较采用Kappa检验,Kappa≥0.75表示两者一致性较好.结果 线性探针法与比例法检测RFP的耐药率分别为12.2％(46/378)和10.6％(40/378),差异无统计学意义(x2=3.60,P＞0.05),两种方法检测的总体一致率为97.4％(368/378),具有很高的一致性(Kappa=0.87);检测INH的耐药率分别为14.3％(54/378)和12.2％(46/378),差异无统计学意义(x2=3.20,P＞0.05),两种方法检测的总体一致率为94.7％(358/378),一致性较好(Kappa=0.77);检测耐多药率分别为7.4％(28/378)和7.9％(30/378),差异无统计学意义(x2=0.40,P＞0.05),两种方法检测的总体一致率为97.4％(368/378),一致性较好(Kappa=0.81).以比例法为金标准,线性探针法检测RFP耐药的敏感度和特异度分别是95.0％(38/40)和97.6％(330/338),检测INH耐药的敏感度和特异度分别是87.0％(40/46)和95.8％(318/332),检测耐药性的敏感度和特异度分别是80.0％(24/30)和98.9％(344/348).结论 线性探针技术检测结核分枝杆菌临床分离株耐药性是可行的.
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西尼罗病毒一步实时RT-PCR检测准确度评价
目的 了解已建立的一步实时RT-PCR对西尼罗病毒感染细胞和组织的灵敏度及其对国内常见的黄病毒属病毒的特异性,为西尼罗病毒感染的实验室检测和流行病学调查奠定基础.方法 使用Vector NTI Suite8软件比较探针与西尼罗病毒不同系毒株之间的同源性.采用西尼罗病毒感染的Vero细胞培养上清和BALB/c小鼠脑组织样本评价一步实时RT-PCR法的灵敏度,同时用国内常见的黄病毒属病毒评价其特异性.结果 此一步实时RT-PCR法可用于西尼罗病毒1系多数毒株的检测,灵敏度高,对西尼罗病毒的低检出浓度为5.75×102pfu/ml;与黄病毒属乙型脑炎、登革热、蜱传脑炎以及甲病毒属东部马脑炎等虫媒病毒均未出现交叉反应.结论 西尼罗病毒一步实时RT-PCR法具有灵敏度高、特异性强的特点,适用于西尼罗病毒感染细胞和组织的早期检测及流行病学调查.
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CD4+T细胞抗体标记超顺磁性氧化铁MR成像诊断异种胰岛移植免疫排斥反应的实验研究
目的 探讨利用抗人分化抗原簇(CD)4+T细胞抗体标记的纳米免疫超顺磁性氧化铁(SPIO)作为MRI生物探针,诊断胰岛细胞移植后免疫排斥反应的可行性.方法 27只BALB/C裸鼠,每只左肾被膜下移植分离纯化后的猪胰岛细胞2000个,3周后MRI可观察到肾包膜下移植物大小,然后采用数字表法随机将实验动物分为实验组(21只)和对照组(6只).将人T淋巴细胞注入实验组鼠腹腔内重建人的T淋巴细胞免疫系统,其中20只重建成功.实验组动物免疫系统重建前及重建后3、7和14 d,经尾静脉注射纳米免疫SPIO,30 min后行MRI T2WI,观察移植物的MRI信号改变.MRI结束后立即安乐死方法牺牲动物,取下左肾行移植物病理组织检查;对照组动物胰岛细胞移植后,不进行免疫处理,与实验组动物相同时间点给予相同检查.并以病理检查为金标准,用临床诊断一致性检验计算MRI对异种胰岛细胞移植后免疫排斥反应诊断的灵敏度、特异性、Youden指数和符合率.结果 2组动物在移植胰岛细胞3周后MRI可显示移植物.实验组BALB/C裸鼠,重建免疫系统前及重建成功后3 d注入纳米免疫SPIO,MRI移植物局部未见异常信号;免疫系统重建成功后7 d,MRI显示移植物对应区域信号减低,苏木精.伊红及CD4+T免疫组织化学染色显示移植物局部大量淋巴细胞浸润,提示免疫排斥反应发生.对照组动物移植物所有MRI均未见异常;病理组织学检查移植物局部未见炎性细胞浸润.MRI对免疫反应检测的灵敏度、特异度、Youden指数和符合率分别为:(72.96±0.24)%、100%、0.73±0.24、(88.46±0.13)%(Kappa值为0.76).结论 通过抗人CD4+T细胞抗体标记的纳米免疫SPIO牛物探针MRI,可以检查异种胰岛细胞移植后免疫排斥反应,并能早期、实时、无创性的对移植受体免疫排斥反应进行诊断.
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近红外荧光染料标记表皮生长因子探针在荷人乳腺癌裸鼠移植瘤中的分子成像研究
均荧光强度明显减弱(t=16.772,P<0.01);而阻断组MDA-MB-435S肿瘤区平均荧光强度为(11460±896)au,与MDA-MB-435S未阻断组的平均荧光强度差异无统计学意义(t=0.6504,P=0.551).离体MDA-MB-231肿瘤内可探测到明显的荧光信号,HE染色证实为低分化腺癌.结论 EGF-Cy5.5能与乳腺癌细胞的EGFR特异性结合,NIRF成像能实时、无创示踪EGF-Cy5.5在EGFR阳性肿瘤中的分布.
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荧光及磁示踪法观测脑组织液的引流分区特征
目的:对比光、磁两种探针示踪显示脑组织间隙(interstitial space,ISS)内分子扩散与团流运动的结果,研究脑组织液(interstitial fluid,ISF)在ISS内的分区引流特征.方法:36只 SD大鼠随机分为荧光检查组(18只)和磁示踪组(18只),每组再随机分为尾状核(caudate nucleus,Cn)、丘脑(thalamus,T)和黑质(substantia nigra,Sn)3个亚组,每亚组6只.荧光检查组:参考脑立体定位图谱,选取冠状位苍白球为中心层面,以Cn、T和Sn为靶点进行穿刺定位,分别导入2 μL 10 mmol/L荧光黄(lucifer yellow,LY)于相应脑区的中心位置,于Cn 3 h、T 2 h和Sn 1 h对大鼠用4％(体积分数)多聚甲醛进行心脏灌注固定后,将取出的鼠脑置于脑切片模具中,沿视交叉向后切片,以进针位点所在的冠状切片为中心层面,计为1片,前取3片,后取2片,每片厚约1 mm,共6片待检测,应用激光扫描共聚焦显微镜(laser scanning confocal microscope,LSCM)对离体切片进行采集,测量离体切片LY扩散的面积;磁示踪组大鼠也以Cn、T和Sn为靶点进行穿刺定位导入2 μL 10 mmol/L钆喷酸葡胺(gadolinium-diethylene triamine pentaacetic acidm,Gd-DTPA),应用磁共振(magnetic resonance imaging,MRI)动态监测示踪剂在大鼠脑内的扩散,并利用Radiant软件测量Gd-DTPA的扩散面积.结果:LY与Gd-DTPA在Cn、T和Sn的ISS内扩散区域各不相同,Cn亚组LY与Gd-DTPA导入3 h后,比较1～6层LY与Gd-DTPA扩散面积为:(10.95±4.27) mm2 vs.(8.33±2.25) mm2、(18.16±4.74) mm2 vs.(16.42±2.88) mm2、(24.57±3.65) mm2 vs.(20.75±2.29) mm2、(34.81±3.32) mm2 vs.(28.88±1.51) mm2、(30.53±3.12) mm2 vs.(20.92±2.75) mm2、(12.15±4.92) mm2 vs.(10.00±1.89) mm2,对其在每层两组间扩散面积进行t检验,扩散面积差异均无统计学意义(t=0.940,P=0.400;t=0.546,P=0.614;t=1.534,P=0.200;t=2.809,P=0.480;t=2.693,P=0.055;t=0.707,P=0.518);T亚组中LY与Gd-DTPA导入2 h后,比较1～6层LY与Gd-DTPA扩散面积为:(5.56±4.61) mm2 vs.(3.33±2.25) mm2、(16.21±3.36) mm2 vs.(11.42±2.88) mm2、(19.00±5.21) mm2 vs.(15.75±2.29) mm2、(25.32±5.49) mm2 vs.(22.33±3.25) mm2、(17.34±5.31) mm2 vs.(15.92±2.75) mm2、(7.67±6.19) mm2 vs.(5.00±1.89) mm2,对其在每层两组间扩散面积进行t检验,差异均无统计学意义(t=0.753,P=0.493;t=1.875,P=0.134;t=0.990,P=0.378;t=0.810,P=0.464;t=0.413,P=0.701;t=0.716,P=0.514);Sn亚组LY与Gd-DTPA导入1 h后,比较1～6层LY与Gd-DTPA扩散面积为:(6.78±4.56) mm2 vs.(4.75±2.00) mm2、(12.65±5.04) mm2 vs.(10.44±1.13) mm2、(19.51±6.54) mm2 vs.(17.55±0.30) mm2、(28.72±5.45) mm2 vs.(24.48±1.32) mm2、(21.34±4.42) mm2 vs.(17.72±0.25) mm2、(13.00±5.46) mm2 vs.(12.00±2.88) mm2,对其在每层间扩散面积进行t检验,扩散面面积的差异均无统计学意义(t=0.705,P=0.519;t=0.743,P=0.499;t=0.517,P=0.656;t=1.310,P=0.260;t=1.416,P=0.292;t=0.281,P=0.793),但LY扩散面积略大于Gd-DTPA.结论:荧光法证实了磁示踪法发现的ISF在ISS内的分区引流特征,并且可为磁示踪法提供离体验证的技术与方法.荧光ISS成像法具有更高的对比度和分辨率,得到了更加精细的ISF引流分区区域.
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光磁双模态分子探针Gd-DO3A-EA-FITC在脑组织间隙成像分析中的应用
目的:研究光磁双模态分子探针Gd-DO3A-ethylthiourea-fluorescein isothiocyanate(Gd-DO3A-EA-FITC)在脑组织间隙(interstitial space,ISS)成像分析中的应用价值.方法:24只SD雄性大鼠随机分为磁示踪组(6只)、荧光示踪组(6只)和光磁示踪组(12只),光磁示踪组随机分为磁示踪亚组(6只)和荧光示踪亚组(6只).分别在大鼠尾状核区注入磁示踪剂钆-二乙三胺五乙酸(gadolinium-diethylene triamine pentaacetic acid,Gd-DTPA)、光示踪剂异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)和光磁双模态分子探针Gd-DO3 A-EA-FITC,应用磁共振成像(magnetic resonance imaging,MRI)检测示踪剂在脑ISS中的扩散和分布,利用自主研发的脑ISS图像处理系统测量Gd-DO3A-EA-FITC和Gd-DTPA在脑ISS内的扩散系数、清除率、体积分数和半衰期等扩散参数.注射示踪剂2h后,利用激光扫描共聚焦显微镜(laser scanning confocal microscope,LSCM)对离体脑切片进行荧光信号的采集,并对比分析斜矢状位切片中示踪剂扩散分布的大面积.结果:Gd-DTPA和Gd-DO3A-EA-FITC在鼠脑内的平均扩散系数分别为(3.31 ±0.11) ×10-4 mm2/s和(3.37±0.15)×10-4mm2/s(=0.942,P=0.360),清除率分别为(3.04±0.37) mmol/L和(2.90±0.51) mmol/L(t=0.640,P=0.531),体积分数分别为17.18％ ±0.14％和17.31％ ±0.15％ (t=1.961,P=0.068),半衰期分别为(86.58 ±3.31) min和(84.61 ±2.38) min (t=1.412,P=0.177),扩散分布大面积分别为(22.71±1.00) mm2和(23.25±0.68) mm2(t=1.100,P=0.297),两者的各项扩散参数差异均无统计学意义.FITC和Gd-DO3A-EA-FITC在鼠脑内扩散分布大面积分别为(22.10±1.29) mm2和(22.61±1.16) mm2(t =0.713,P=0.492),两者差异无统计学意义,Gd-DO3A-EA-FITC的扩散面积略大于FITC.结论:Gd-DO3A-EA-FITC与传统的Gd-DTPA的成像结果相同,可用于ISS的测量.
