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miR-33a通过抑制SIRT6的表达促进结直肠癌细胞的增殖
目的 研究miR-33a对结直肠癌细胞增殖的影响及其作用机制.方法 采用Real-timePCR检测miR-33a在人结直肠癌组织和细胞系中的表达.转染miR-33a抑制剂和类似物到人结直肠癌细胞中,通过CCK8实验检测结直肠癌细胞的增殖活性.通过Real-timePCR检测转染miR-33a抑制剂后结直肠癌细胞中SIRT6mRNA的表达.采用双萤光素酶报告基因系统探索miR-33a与SIRT6的作用机制.结果 miR-33a在结直肠癌组织和结直肠癌细胞系HCT116中的表达均高于癌旁组织和对照细胞系(P<0.05).转染miR-33a抑制剂后结直肠癌细胞的增殖活性显著低于对照细胞系(P<0.05).结直肠癌组织和细胞中SIRT6的mRNA表达水平均低于癌旁组织和对照细胞系(P<0.05).转染SIRT6后,结直肠癌细胞增殖活性被显著抑制.双萤光素酶报告基因结果 显示,过表达miR-33a后,野生型3ˊ-UTR报告载体的萤光素酶活性被明显抑制,而突变型3ˊ-UTR报告载体的萤光素酶活性无明显变化.在HCT116细胞中抑制miR-33a的表达后,SIRT6mRNA的水平显著升高(P<0.05).结论 miR-33a可以通过抑制SIRT6的表达来促进结直肠癌细胞的增殖.
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SIRT6/NF-κB信号轴在人参皂苷Rg1延缓造血干/祖细胞衰老中的作用
目的:探讨SIRT6/NF-κB信号轴在人参皂苷Rg1延缓造血干/祖细胞衰老中的作用,为寻找延缓HSC/HPC衰老途径提供理论和实验依据.方法:免疫磁性分选法分离纯化Sea-1+ HSC/HPC后分为:正常对照组、衰老组、阳性对照组、Rg1延缓衰老组、Rg1治疗衰老组.衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)细胞化学染色、流式细胞术分析细胞周期和造血祖细胞混合集落(CFU-Mix)培养确定Rg1延缓或治疗Sca-1+ HSC/HPC衰老生物学作用.荧光定量PCR及Western blotting检测衰老调控分子SIRT6,NF-κB mRNA及蛋白的表达.结果:与衰老组相比,Rg1延缓及治疗衰老组SA-β-gal染色阳性细胞百分比降低,G1期细胞比例下降,生成CFU-Mix数量增加,SIRT6 mRNA及蛋白表达上调,NF-κB mRNA及蛋白表达下调;Rg1延缓衰老组各指标变化均较Rg1治疗衰老组明显.结论:Rg1可能通过调控SIRT6-NF-κB信号通路发挥其对抗t-BHP诱导的Sca-1+ HSC/HPC衰老的作用.
关键词： 人参皂苷Rg1 SIRT6 NF-κB Sca-1+ HSC/HPC 衰老 -
SIRT6招募mRNA结合蛋白IMP1调控IGF2在293T细胞表达
目的 探讨SIRT6对肿瘤重要调节分子胰岛素样生长因子2(IGF2)的转录后调控机制.方法 在工具细胞系293T细胞中过表达SIRT6以及应用免疫共沉淀(IP)方法富集所有可能与SIRT6相互作用的蛋白,行质谱实验鉴定,并进一步通过IP/Western blot方法,检测SIRT6和IGF2 mRNA结合蛋白(IMP1)的相互作用,以及 SIRT6对IMP1的乙酰化/磷酸化修饰水平的影响.结果 质谱结果证明SIRT6和IMP1存在相互作用,并通过构建SIRT6和IMP1的过表达载体,进一步验证了SIRT6与IMP1的直接相互作用.检测乙酰化和磷酸化水平发现,SIRT6并未直接影响IMP1的乙酰化水平,而是促进其磷酸化修饰.结论 SIRT6可能通过促进对IMP1的磷酸化而起到在转录后水平抑制细胞中IGF2 mRNA的作用.
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衰老调控因子SIRT6在人参皂苷Rg1延缓造血干/祖细胞衰老中的作用
目的 探讨SIRT6在人参皂苷Rg1延缓造血干/祖细胞(HSC/HPC)衰老中的作用.方法 三丁基过氧化氢(t-BHP)诱导Sea-1+HSC/HPC衰老,构建HSC/HPC衰老体外模型,Sca-1+HSC/HPC连续移植3代,构建HSC/HPC衰老体内模型.给予体内外衰老模型Rg1预防和治疗衰老.造血祖细胞混合集落(CFU-Mix)培养,细胞周期分析和衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色,分析Rg1体内外调控Sca-1+HSC/HPC衰老的作用.荧光定量PCR及Western blot检测衰老调控因子SIRT6 mRNA及蛋白的表达.结果 与体内外衰老模型组相比,Rg1治疗及预防衰老处理后Sca-1+ HSC/HPC G0/G1期细胞比例、SA-β-Gal染色阳性率下降(P＜0.05),CFU-Mix数量升高(P＜0.05);SIRT6 mRNA及蛋白表达上调(P＜0.05);Rg1预防衰老组各指标变化均较Rg1治疗衰老组明显.结论 Rg1在体内外均可通过调控SIRT6发挥其延缓Sca-1+HSC/HPC衰老的作用.
关键词： SIRT6 Sca-1+HSC/HPC 衰老 人参皂苷Rg1 -
慢性阻塞性肺疾病中Sirtuins的研究进展
Sirtuins是第Ⅲ类组蛋白去乙酰化酶,主要成员SIRT1、SIRT6与慢性阻塞性肺疾病(COPD)发病机制有密切关系.SIRT1、SIRT6在COPD患者肺部中表达下调,并通过多种机制调节炎性反应、肺部自噬与衰老.Sirtuins可能是COPD发生过程中的一个调控分子家族.
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SIRT6在能量代谢中的作用
SIRT6是沉默信息调节蛋白家族成员之一,是一种依赖于烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)的组蛋白去乙酰化酶及ADP-核糖基转移酶的蛋白酶.其在机体的生理、病理过程中具有重要的调控作用,参与调控机体寿命与衰老、癌症、肥胖、胰岛素抵抗及炎症反应等过程.近期研究发现,SIRT6在脂代谢、糖代谢过程中具有重要的调控作用.SIRT6基因敲除小鼠具有严重的低血糖、脂肪肝等.此外,SIRT6具有保护高脂饮食引起的肥胖及胰岛素抵抗的作用.该综述主要概述了SIRT6在能量代谢中的作用.
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S IRT6功能与疾病研究进展
SIRT6是酵母sir2在哺乳动物中的同源物sirtuin家族SIRT1-SIRT7中的一员。SIRT6具有NAD＋依赖的蛋白去酰化酶和ADP核糖基转移酶活性，主要定位在细胞核。SIRT6可通过对组蛋白和非组蛋白去酰化或对部分蛋白底物核糖基化而在基因组稳定性、代谢、炎症、细胞衰老、肿瘤以及寿命等调控过程中发挥重要作用。本文仅从其生理功能与疾病相关性方面作一介绍。
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结肠癌患者SIRT6表达与病理特征的相关性
目的 研究结肠癌患者SIRT6表达与病理特征的相关性及其可能的机制.方法 纳入2015年4月至2017年4月哈尔滨医科大学附属第五医院普外科60例结肠癌患者作为研究对象,所有患者均取手术切除的结肠癌组织和癌旁正常结肠组织作为病检标本,采用Western blot法和免疫组化法检测SIRT6蛋白和HIF-1α 表达水平,收集60例患者性别、年龄、肿瘤TNM分期、分化等临床病理特征,记录结肠癌和癌旁组织中SIRT6和HIF-1α 水平,比较SIRT6不同表达水平病理特征的差异,分析SIRT6与病理特征和HIF-1α 的关系.结果 Western blot法检测的结肠癌组织中SIRT6和HIF-1α 蛋白表达分别为(1.87±0.65)和(1.72±0.59),癌旁组织中SIRT6和HIF-1α 分别为(2.34±1.13)和(0.84±0.36),结肠癌组织和癌旁组织中SIRT6和HIF-1α 表达水平差异有统计学意义(t=2.793,9.862;P=0.006,0.000).60例患者中结肠癌组织中SIRT6蛋白阳性13例,阴性47例.Logistic多因素分析显示肿瘤分期是影响结肠癌患者癌组织中SIRT6蛋白高表达水平的独立因素(OR=0.335;P=0.000).结肠癌组织中SIRT6蛋白表达与HIF-1α 水平呈显著负相关性(r=-0.819,P=0.000).结论 结肠癌组织中SIRT6蛋白表达水平与肿瘤分期关系密切,SIRT6蛋白对结肠癌病理进程有抑制作用,这可能与SIRT6调控HIF-1α 蛋白有关.
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SIRT6基因沉默对肝癌细胞增殖和凋亡的影响
目的 探讨SIRT6基因沉默对肝癌细胞增殖和凋亡的影响.方法 构建肝癌细胞系,转染SIRT6,检测SIRT6 mRNA及蛋白质的表达水平;将表达shSIRT6的慢病毒感染Huh-7细胞,培养后检测SIRT6 mRNA、蛋白质表达水平及凋亡情况.结果 成功构建了沉默SIRT6基因的Huh-7稳定细胞系,在Huh-7细胞中,mRNA表达的抑制率达81.25%,其SIRT6蛋白质水平亦受到抑制;Huh-7细胞的凋亡比例为(16.52±2.08)%.结论 SIRT6基因沉默可诱导人肝癌细胞凋亡,进而抑制其增殖.
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吡格列酮和高脂喂养对SD大鼠SIRT6表达的影响
目的 观察吡格列酮和高脂喂养对SD大鼠附睾脂肪组织、肝脏和肌肉SIRT6表达的影响.方法 24只雄性SD大鼠随机分为3组:空白对照组(NC)、单纯高脂饮食组(HF)、高脂+吡格列酮组(FP).RT-PCR及Western blot方法检测附睾脂肪组织、肝脏和肌肉SIRT6表达.结果 (1)与NC组相比,HF组大鼠体重、空腹血糖、胰岛素、甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇均明显升高(P＜0.05),高密度脂蛋白胆固醇则明显下降(P＜0.01).与HF组相比,FP组大鼠体重、空腹血糖、胰岛素、甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇明显下降(P＜0.05).(2)与正常对照组比较,HF组大鼠附睾脂肪组织、肌肉和肝脏SIRT6 mRNA及蛋白表达轻度下降.吡格列酮治疗后,上述组织SIRT6 mRNA及蛋白表达均显著增高(P＜0.05).结论 高脂饮食可诱导大鼠糖脂代谢紊乱,轻度降低SIRT6的表达,吡格列酮改善糖脂代谢紊乱可能通过上调SIRT6的表达.
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SIRT6在原发性肝癌中的表达变化与抑瘤机制分析
SIRT6是Sirtuin家族的组成部分，是烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD+）依赖的组蛋白去乙酰化酶。 SIRT6是肝脏葡萄稳态主调节者，通过对胰岛素/IGF1样信号（IIS）途径的影响，基于多个网络调控机制，实现对葡萄糖代谢的影响，对人体生命维系和控制肿瘤产生作用。本文笔者以SIRT6为出发点，分析其在原发性肝癌中的表达变化与抑瘤机制。
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三丁基过氧化氢体外诱导造血干/祖细胞衰老中的SIRT6/NF-κB信号轴
背景：SIRT6/NF-κB信号轴是细胞衰老的调控通路，但其在造血干/祖细胞(hematopoietic stem and progenitor cel ，HSC/HPC)衰老中的作用尚不清楚。目的：探讨SIRT6/NF-κB信号通路在三丁基过氧化氢体外诱导造血干/祖细胞衰老中的作用。方法：免疫磁性分选法分离、纯化小鼠Sca-1+ HSC/HPC。用100μmol/L三丁基过氧化氢体外诱导Sca-1+HSC/HPC构建体外衰老模型，通过衰老相关β-半乳糖苷酶细胞化学染色、流式细胞术分析细胞周期、造血祖细胞混合集落培养确定三丁基过氧化氢诱导 Sca-1+HSC/HPC 衰老的生物学作用。荧光定量 PCR 及Western blotting检测衰老调控分子SIRT6、NF-κB mRNA及蛋白的表达。结果与结论：与对照组比较，衰老组Sca-1+ HSC/HPC β-半乳糖苷酶染色阳性细胞数、G0/G1期细胞比例增高，形成造血祖细胞混合集落数量减少；SIRT6 mRNA及蛋白表达下调，NF-κB mRNA及蛋白表达上调。结果表明三丁基过氧化氢可能通过调控SIRT6/NF-κB信号通路发挥诱导Sca-1+HSC/HPC衰老作用。
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急性呼吸窘迫综合征炎症损伤患儿肺泡SIRT6表达情况及相关性研究
目的 探讨急性呼吸窘迫综合征炎症损伤患儿肺泡SIRT6表达情况,及其与炎症因子、动脉血气指标相关性.方法 选取自2016年2月至2018年1月安康市中心医院收治的下呼吸道感染患儿(A组)与急性呼吸窘迫综合征炎症损伤患儿(B组)各72例为研究对象.检测并比较两组患儿肺泡SIRT6含量、血清炎症因子水平及动脉血气指标,并分析SIRT6与炎症因子及动脉血气指标的相关性.结果 B组患儿肺泡SIRT6含量及血清肿瘤坏死因子 α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)水平均显著高于A组,组间比较,差异有统计学意义(P<0.05).B组患儿血氧分压(PaO2)、氧合指数(PaO2/FiO2)值低于A组,血二氧化碳分压(PaCO2)高于A组,组间比较,差异均有统计学意义(P<0.05).采用Pearson相关系数分析显示,肺泡SIRT6含量与TNF-α、IL-6、PaCO2呈显著正相关,与PaO2、PaO2/FiO2呈显著负相关(P<0.05).结论 急性呼吸窘迫综合征炎症损伤患儿伴有肺泡SIRT6的过表达与炎症因子的大量释放,两者呈正相关,SIRT6表达影响急性呼吸窘迫综合征的发病过程.
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抗衰老因子SIRT1和SIRT6抗衰老作用研究新进展
衰老是生物体在遗传因素和内外环境相互作用下出现进行性，不可逆的生理功能下降的生物学过程。早在75年前， McCay和他的同事首先发现热量限制的大鼠比自由饮食的大鼠寿命更长。尽管这一发现已经过去了很久，但对于促使寿限延长的分子机制一直扑朔迷离。初在酵母中发现的沉默信息调控因子2（Sir2），是一种NAD＋依赖性去乙酰转移酶，在对于酵母寿限的调节方面发挥着重要的作用。后来，在通过热量限制延长酵母寿限方面，发现Sir2在其中起重要作用。这些发现推出了生物学中一个新的领域：对于Sir2以及其在哺乳动物中的同源蛋白--Sirtuins家族的研究。其中，SIRT1抗衰老作用经历了肯定，质疑，再到肯定的一个过程〔1～6〕；SIRT6则是Sirtuins家族具有抗衰老作用的另外一个重要的家族成员〔7〕。
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长寿老人SIRT6基因的罕见及常见变异研究
目的 SIRT6基因属于Sirtuin家族的一员,是长寿候选基因.本文旨在长寿老人中探索SIRT6基因的罕见及常见变异分布情况.方法 从如皋长寿及衰老队列的长寿组中随机抽取102例长寿老人(≥95岁),对SIRT6基因的启动子及外显子区域进行PCR扩增和直接测序,识别罕见及常见变异,并与千人基因组中汉族人群数据进行频率比对.结果 总共完成约10 kb的测序,覆盖了SIRT6基因的8个外显子和1.5kb的启动子区域.在发现的20个已报道变异位点中,6个分布在启动子区,1个分布在外显子上,2个分布在3'UTR区域,11个分布在内含子区.共有12个已报道变异位点的小等位基因频率(minor allele frequencies,MAFs)超过0.05;其中,rs352493(MAF=0.245)为非同义突变.在剩下8个MAF低于0.05的已报道位点中,rs117541451 (MAF=0.010)和rs146420357(MAF=0.029)与千人基因组中汉族人相应频率差异具有统计学意义(P=0.021).观察到5个新发位点,其MAF均为0.005.这5个位点中,有1个分布在外显子上,1个分布在启动子区,1个分布在3'UTR区域,2个则分布在内含子区.结论 在如皋长寿人群SIRT6基因上首次观察到20个已报道变异位点(12个为常见位点)及5个新发位点(均为罕见位点).这为长寿的遗传学探索及功能研究提供了新的重要候选位点,进一步强调了罕见变异在长寿中的重要作用.
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siRNA抑制骨肉瘤U2OS细胞系中SIRT6的表达及其生物学作用研究
背景与目的:sirtuin6(SIRT6)蛋白是对人体细胞生长、代谢调控及应激反应等具有重要作用的一种核蛋白,常在细胞核中发挥多种调控作用.但该蛋白在骨肉瘤中的作用还不清楚,本研究通过下调人骨肉瘤U2OS细胞系中SIRT6的表达,观察其对U2OS细胞的作用.方法:设计合成SIRT6的siRNA序列,通过LipofectamineTM2000转染U2OS细胞系,通过蛋白质印迹法(Western blot)检测SIRT6蛋白的表达情况,利用流式细胞术检测细胞凋亡,细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)法检测细胞增殖,Transwell法检测细胞侵袭和迁移能力,CCK-8法分析对紫杉醇的敏感性.结果:成功构建SIRT6 siRNA序列,Western blot检测转染后24、48和72 h的蛋白水平,实验组较对照组明显降低.流式细胞术检测细胞凋亡也显示实验组凋亡增加(P<0.05).Transwell法检测结果显示,实验组侵袭与迁移能力较对照组下降(P<0.05).CCK-8法检测细胞生长情况,可见经紫杉醇处理后实验组生长较对照组下降明显,差异有统计学意义(P<0.05).结论:下调骨肉瘤U2OS细胞中SIRT6的表达可以抑制骨肉瘤细胞侵袭,促进凋亡,并增强骨肉瘤细胞对紫杉醇的化疗敏感性.
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非小细胞肺癌SIRT6基因表达与临床因素的相关性
目的 探讨非小细胞肺癌(NSCLC) SIRT6基因的表达并分析其与临床因素的相关性.方法 收集2011年5月至2014年12月手术治疗、术后病理诊断为Ⅰ～Ⅲ期NSCLC患者38例为研究对象(研究组),其中腺癌20例,鳞癌18例,其中16例患者癌旁正常肺组织作为对照组.应用实时定量PCR、Western blot、免疫荧光检测腺癌、鳞癌癌组织及正常肺组织中SIRT6 mRNA蛋白的表达,对SIRT6蛋白的表达与NSCLC临床因素做Spearman相关分析.结果 研究组腺癌及鳞癌肺癌组织SIRT6 mRNA及蛋白相对表达量均较对照组明显减少,差异有统计学意义(P均＜0.01),而腺癌及鳞癌组织SIRT6 mRNA及蛋白相对表达量差异无统计学意义(P＞0.05);正常肺组织可见到大量的SIRT6阳性细胞位于细胞核中,腺癌及鳞癌肺癌组织中几乎未见SIRT6阳性细胞,SITRT6阳性细胞百分比与正常肺组织比较差异有统计学意义(P均＜0.01),而腺癌及鳞癌组织比较无统计学差异(P＞0.05);SIRT6蛋白表达与非小细胞肺癌组织分期及分化程度无相关性(P均＞0.05).结论 NSCLC癌组织中几乎不表达SIRT6,SIRT6蛋白表达与非小细胞肺癌组织分期及分化程度无关,SIRT6基因可能在NSCLC发生的起始阶段发挥重要作用,但与疾病的进展无关.
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人类SIRT6蛋白硝基化位点突变体的构建
目的 构建人类SIRT6蛋白硝基化位点突变体,用于其活性调节机制的研究.方法 以野生型pCD-NA3.1-SIRT6-FLAG真核表达重组体为模板,用定点突变PCR的方法获得SIRT6的酪氨酸突变体;突变产物转化大肠杆菌DH5α进行筛选、序列测定;野生型和突变型重组体转到293H细胞,Western blot鉴定SIRT6的表达.结果 ①经PCR法得到了SIRT6的突变重组体;②SIRT6突变重组体测序图谱与预期结果完全一致;③Western blot检测野生和突变型SIRT6蛋白能表达.结论 获得了能真核表达硝基化位点的突变型SIRT6蛋白的重组体.
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Sirt6促进自噬抑制软骨细胞衰老的体外研究
目的:明确Sirt6对软骨细胞衰老的影响,探讨自噬在Sirt6抑制软骨细胞衰老中的作用.方法:体外培养SD大鼠膝关节软骨细胞,通过连续传代致软骨细胞衰老,β-半乳糖苷酶(β-gal)染色检测细胞衰老, Western blot检测Sirt6的蛋白表达变化.原代软骨细胞中借助慢病毒敲低Sirt6或过表达Sirt6,比较各组的大传代次数及细胞衰老情况,通过qPCR比较二型胶原(Collagen-Ⅱ)、蛋白聚糖(Aggrecan)、基质金属蛋白酶-13(MMP-13)及ADAMT-5的mRNA表达来探讨Sirt6对软骨细胞功能的影响.在软骨细胞中过表达Sirt6后通过免疫荧光染色观察细胞中自噬泡的变化,Western blot检测LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的比例来探讨Sirt6对软骨细胞自噬的影响.在过表达Sirt6的同时通过使用自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)来验证细胞自噬在Sirt6抑制软骨细胞衰老和功能退变中的作用.结果:连续体外培养软骨细胞,随着细胞传代次数的增加, Sirt6基因的表达量逐渐降低,原代软骨细胞中敲低Sirt6后,软骨细胞提前衰老,P16蛋白的表达量明显升高;软骨细胞中过表达Sirt6可以明显延缓细胞衰老;Sirt6可以促进软骨细胞自噬的发生;使用自噬抑制剂后可以明显抑制Sirt6对软骨细胞的保护作用.结论:提高Sirt6的表达水平可以延缓软骨细胞衰老及退变,且这种作用与Sirt6促进软骨细胞自噬相关.
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白藜芦醇对5/6肾切除大鼠脑组织中sirt1、sirt6的影响
目的:探讨白藜芦醇对5/6肾切除慢性肾衰大鼠脑组织中sirt1和sirt6表达的影响.方法:雄性SD大鼠32只随机分为假手术组(Sham)、病理组(Nx)、氯沙坦治疗组(Lst)、白藜芦醇治疗组(Res),Nx、Lst、Res组行5/6肾切除手术.第7周开始,Lst组每天水饲氯沙坦(50 mg/L),Res组每天灌胃给予白藜芦醇100 mg/kg,持续两周.8周末处理大鼠,试剂盒测定血清肌酐、尿素氮,HPLC测定脑组织中NAD+、NADH含量,PCR测定脑组织sirt1、sirt6表达量.结果:与Nx组比较,Res组血清肌酐含量显著降低,NAD+含量显著上升,sirt1表达量上升,sirt6表达量显著上升(P ＜0.05或P＜0.01).结论:白藜芦醇可能通过增加肾衰大鼠脑组织中NAD+含量来激活sirt1和sirt6,从而改善脑组织代谢及衰老状况.
