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蔡氏育肾培元方对卵巢低反应患者卵巢颗粒细胞基因表达及分泌功能的影响
目的:探讨蔡氏育肾培元方对卵巢低反应(POR)患者卵巢颗粒细胞基因表达及分泌功能的影响.方法:选取检测合格的6例样本,随机分为治疗组与对照组,每组各3例.治疗组服用育肾培元方,对照组不用任何药物.于干预前及干预3个月后拮抗剂方案超促排卵,取两次取卵的卵巢颗粒细胞进行RNA-seq测序,并对相关差异基因进行qPCR和免疫印迹验证;同时对颗粒细胞进行分离培养,检测两组颗粒细胞的生长及分泌功能.结果:①RNA-seq测序显示,治疗组患者的颗粒细胞在药物治疗后表达上调的相关基因主要富集于免疫应答、细胞活化和细胞黏附等功能,且治疗组第二次取卵时上调的免疫应激基因的数量显著降低;通过进一步的基因富集分析表明,治疗组治疗3个月后卵巢颗粒细胞的卵泡发育相关基因及卵巢相关基因均较对照组上调.②通过对部分上调基因(PTPN6、CYBA、FOS、ITGB7等)以及一些下调基因(IL1B,TNFAIP3)的qPCR验证显示,这些基因的表达模式与RNA测序结果较为一致;另外,在表达上调基因中发现,部分基因与卵巢功能密切相关,如FOS和PTPN6基因.③免疫印迹结果显示,育肾培元方可改善PTPN6、CYBA、ITGB7及IL1B基因在颗粒细胞中的表达模式.④细胞实验证实,对照组颗粒细胞在体外培养过程中细胞贴壁能力较差,细胞活力较低,细胞突触不发达;而治疗组颗粒细胞在体外培养过程中细胞贴壁能力较强,细胞突触发达且细胞增殖速度较快.⑤对颗粒细胞体外分泌功能测定显示,治疗组的颗粒细胞分泌的雌二醇(E2)和孕酮(P)都显著高于对照组(P＜0.05).结论:育肾培元方可以降低POR患者的免疫应激反应,改善卵巢颗粒细胞卵巢及卵泡发育相关基因的表达模式,增强卵巢细胞的生长活性及分泌功能,从而改善了POR患者超促排治疗的卵巢反应性.
