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嗜酸氧化亚铁硫杆菌硫氰酸酶的表达、纯化及其性质鉴定
目的:嗜酸氧化亚铁硫杆菌(Acidithiobacillus ferrooxidans)硫氰酸酶是硫代谢中极其重要的酶,其作用主要包括氰化物的解毒,铁-硫蛋白的合成,以及硫胺、硫尿苷或烟碱乙酸胆碱的生物合成,硫氰酸酶的研究对揭示生物冶金机理具有重要的推动作用.方法:以A.ferrooxidans ATCC23270基因组为模板设计引物,通过PCR扩增得到编码硫氰酸酶的基因,目的基因片段与原核表达载体PLM1构建重组体,然后转入大肠杆菌(Eschcrichia coli,E.coli)DH5a感受态中,基因测序正确后,重组质粒再转入E.coli BL21感受态中,加IPTG诱导蛋白表达,用一步亲和层析法纯化出浓度和纯度都较高的硫氰酸酶.结果:SDS-PAGE分析证实蛋白分子量为21kD,紫外可见光分析,确定硫氰酸酶中含有铁硫簇,酶活测定发现重组硫氰酸酶在体外不具有酶活性,可能与酶反应条件及信号肽的切断有关.结论:体外成功克隆.表达,纯化出重组体硫氰酸酶,其基本性质也得到阐述.
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铁硫簇的结构、功能及生物合成研究进展
铁硫簇是普遍存在于生物体中的古老的生命物质之一.铁硫簇基本结构单元有[2Fe-2S]、[3Fe-4S]、[4Fe-4S]及.[8Fe-7S]等几种形式,不同结构的铁硫簇具有不同的生物学功能,主要包括参与电子传递、底物的结合与激活、铁/硫的存储、基因表达的调控、酶活的调控等.铁硫簇既可在生物体内合成,也可在体外进行人工组装.铁硫簇的生物合成主要和NIF、ISC、SUF这三个系统有关.研究已确定了参与铁硫簇合成的关键蛋白,但对它们分子水平上的机制及如何进行相互作用在体内外合成铁硫簇的认识尚待进一步研究.
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肝再生增强因子在隐睾生精细胞中的表达及意义
目的:探讨肝再生增强因子(ALR)在隐睾生精细胞中的表达及其意义.方法:建立SD大鼠隐睾模型(n=20),设立正常(n=10)和手术对照(n=10).分别采用免疫组化法、免疫荧光法检测术后10、40 d(即PND30和PND60)大鼠睾丸组织生精细胞ALR和细胞色素C氧化酶亚单位Ⅱ(COXⅡ)表达情况;Perls染色法检测睾丸中三价铁含量.结果:正常和手术对照组精原细胞ALR呈强表达,隐睾组精原细胞ALR表达显著减弱;同年龄段各组间两两比较,COXⅡ表达水平差异无显著性;术后10 d(PND30)隐睾组三价铁含量较同年龄段正常对照组和手术对照组显著减少(P＜0.05).结论:ALR在生精细胞发育的早期起着重要作用,隐睾ALR缺陷所引起的代谢障碍可能是其精子发生障碍的重要机制之一.
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线粒体铁代谢与人类疾病的基础研究
铁是生命所必需的元素,而游离的铁又具有毒性.细胞内过多的铁可诱导产生大量的活性氧给细胞带来致命性损伤,所以铁在细胞内的代谢受到严格的调控.线粒体是细胞内大的铁代谢细胞器,主要负责血红素和铁硫簇的合成.血红素和铁硫簇是很重要的2种辅基,参与DNA的合成与修复,蛋白的合成与折叠,三羧酸循环,线粒体电子传递链的正常进行等重要代谢过程.线粒体内铁代谢的紊乱会严重地影响到整个细胞的铁代谢以及能量代谢,从而影响线粒体的功能,导致各种疾病的发生.文章就铁代谢和线粒体功能相关研究的工作特别是对近1年以内发表的文章相关内容作一总结和展望.
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低氧性肺动脉高压的研究进展
低氧性肺动脉高压(hypoxic pulmonary arterial hypertension,HPAH)是一种由缺氧引起的以肺血管重建与阻力增加为特征的血管性疾病.近期的研究发现金属铁硫簇、铁和锌代谢紊乱是肺血管疾病早期表现的重要组成部分,它们参与HPAH发生中经典的低氧诱导因子(HIF)和活性氧(ROS)途径.所以对低氧时机体内铁硫簇、铁和锌的代谢失调与HIF和ROS关系的理解,可以让我们对预防、抑制甚至逆转该疾病有更深入的了解.文中就铁硫簇、铁和锌的代谢与HIF和ROS的关系做以阐述,拟为HPAH的治疗提供一种新的思路.
