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刺五加有效组分对帕金森病模型细胞中相关微小RNA表达的干预作用
目的 研究刺五加有效组分对帕金森病模型PC12细胞(MPP+所诱导的)损伤是否具有保护作用,并且观察其对微小RNA表达的影响.方法 采用MPP+作用于PC12细胞的方法来构建帕金森病(PD)的细胞模型,以刺五加有效组分对模型进行药物干预;采用MTT法检测细胞存活率;运用RT-PCR法检测miRNA-205、miRNA-433以及miRNA-153 mRNA的表达水平.结果 与空白组比较,模型组PC12细胞的OD值存活率减少(P<0.05);与模型组比较,给药组细胞OD值存活率增加(P<0.05),miRNA-205、miRNA-433以及miRNA-153 mRNA的表达水平上升,差异有统计学意义(P<0.05).结论 刺五加有效组分对PC12细胞(由MPP+诱导的)的损伤具有一定的保护作用,其作用机制可能是通过影响相关微小RNA:miRNA-205、miRNA-433以及miRNA-153 mRNA的表达,从而影响帕金森病的出现与发展.
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miRNA-205过表达载体的构建及其对猪诱导性多能干细胞建系的作用
目的:构建miRNA-205过表达载体并研究miRNA-205对猪诱导多能干细胞系建立的影响.方法:对本实验室已建系的猪primed胚胎干细胞、猪内细胞团细胞及猪胎儿成纤维细胞三者之间进行miRNA表达谱的分析比较,利用PCR扩增miRNA-205前体序列,并将其克隆于基础表达载体pCAGDNA3-hFat1,构建过表达载体pCAG-miR205.使用脂质体转染技术将该载体转染到已转基因修饰的猪胎儿成纤维细胞(含有鼠源干细胞多能性转录因子Oct4、Sox2、Klf4和c-Myc).利用干细胞培养液诱导培养建立猪诱导性多能干细胞系.通过实时荧光定量PCR检测转染前后细胞内miRNA-205的表达情况,比较分析miRNA-205对猪诱导性多能干细胞的建系效率的影响.结果:成功构建了pCAG-miR205过表达载体;相较于未转染细胞,转染该载体细胞的miR-NA-205表达量显著升高(P＜0.01);利用于细胞培养液诱导后培养转染组的诱导性多能干细胞克隆长出率高于未转染细胞组.结论:研究结果表明在细胞水平上过表达microRNA-205,可提高猪诱导性多能干细胞建系效率;已构建的miRNA-205过表达载体将有助于在后续研究中建立稳定表达miRNA-205的细胞系,为进一步深入研究miRNA-205在干细胞重编程和多能性维持中的作用机制打下基础.
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敲减microRNA-205靶向PTEN抑制食管癌细胞TE1的增殖并促进细胞凋亡
目的:探讨miRNA-205对食管癌细胞株TE1增殖和凋亡能力的影响及其作用机制.方法:实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)和Western印迹检测正常食管黏膜细胞Het-1A和不同食管癌细胞株(KYSE70,TE12,TE1)中miRNA-205的mRNA及蛋白表达水平.转染miRNA-205抑制剂下调TE1细胞中miRNA-205的表达,采用CCK-8法和流式细胞术检测细胞增殖能力、细胞周期和细胞凋亡情况;Western印迹检测细胞增殖和细胞凋亡相关CDK2,cyclin D1,P21,Bcl-2,cleavedcaspase-3,caspase-3,p-Rb,Rb,p-Akt和Akt的蛋白表达水平.双荧光素酶报告基因分析法预测及验证其可能的靶基因.结果:MiRNA-205在各型食管癌细胞中高表达.沉默miRNA-205后,TE1细胞的增殖能力降低并表现为细胞周期阻滞,而细胞凋亡率显著升高(p＜0.05).同时细胞中cyclin D1,CDK2,bcl-2,p-Rb及p-Akt的蛋白表达水平均显著降低,p21及cleaved-caspase-3的蛋白表达水平显著升高.双荧光素酶报告基因分析显示PTEN是miRNA-205的可能作用靶点,TE1中共转染miRNA-205抑制剂和PTEN siRNA可部分逆转miRNA-205介导细胞增殖抑制及凋亡诱导作用.结论:沉默miRNA-205可靶向PTEN抑制食管癌细胞株TE1的增殖,并促进其凋亡,提示miRNA-205可作为食管癌诊疗的一个潜在作用靶点.
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唾液miRNA-205检测在喉鳞状细胞癌中的诊断价值
目的 初步探讨唾液miRN A-205检测在喉鳞状细胞癌中的诊断价值.方法 收集了于该院就诊的15例喉鳞状细胞癌患者、10例喉息肉患者、10例健康者的唾液标本,使用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)定量检测并比较唾液miRN A-205的相对表达情况.结果 喉鳞状细胞癌患者的唾液中miRN A-205的表达水平较健康对照者显著上调(P=0.036).受试者工作特征(ROC)曲线分析miRNA-205对喉鳞状细胞癌的诊断价值发现,唾液中miRNA-205的ROC曲线下面积为0.7530(95％CI:0.5460～0.9610,P=0.036).结论 喉鳞状细胞癌患者唾液中的miRNA-205存在高表达,有望作为早期诊断喉鳞状细胞癌的指标.检测miRNA-205在唾液中的表达,将来有望开启喉鳞状细胞癌早期诊断的无创时代.
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miRNA-205在食管鳞状细胞癌患者组织中的表达及临床意义
目的 探讨miRNA-205在食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)患者组织中的表达情况.方法 收集56例经病理确诊的ESCC患者的手术切除组织(癌组织及其癌旁组织),采用实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测miRNA-205的表达,并分析miRNA-205在不同临床病理资料之间的差异.结果 ESCC患者组织中miRNA-205相对表达量为1.475(0.444～5.478),显著高于癌旁组织(Z=-3.067,P=0.002);miRNA-205在不同TNM分期ESCC患者组织中存在差异,TNM分期越高,miRNA-205表达量越高,差异具有统计学意义(F=36.335,P＜0.001);miRNA-205在淋巴结转移阴性/阳性组织中存在差异,淋巴结转移阳性组miRNA-205表达量显著高于淋巴结转移阴性组(Z=-3.353,P=0.001).结论 miRNA-205在ESCC患者癌组织中表达升高,并可能参与ESCC的发生与发展.
