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siRNA沉默Fas死亡结构域相关蛋白基因对乳腺癌MCF-7细胞增殖和迁移行为的影响研究
目的 探讨siRNA沉默Fas死亡结构域相关蛋白(DAXX)基因对乳腺癌MCF-7细胞增殖和迁移行为的影响,为临床诊断提供参考依据.方法 培养MCF-7细胞,观察组对细胞进行siRNA-DAXX转染,空白组不对细胞进行任何处理,对照组对细胞进行siRNA-NC转染,①使用RT-PCR和Western Blot法分别检测三组DAXX mRNA和蛋白表达水平,②使用MTT法检测三组细胞增殖能力,③使用Transwell小室实验检测三组细胞迁移能力.结果 ①观察组DAXX表达水平与空白组及对照组对比差异有统计学意义(P＜0.05),siRNA能够显著抑制DAXX基因表达和蛋白合成,②Western blot显示DAXX基因被沉默后,观察组细胞增殖率仅为空白组或对照组的62.93％,③RT-PCR显示DAXX基因被沉默后,观察组细胞增殖率仅为空白组或对照组的77.24％;④Transwell小室实验结果显示,与空白组及对照组相比,观察组细胞穿过小室的几率显著降低,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 siRNA沉默DAXX基因表达后,乳腺癌MCF-7细胞的增殖能力和迁移能力显著减低,DAXX是一种肿瘤促进基因.
关键词： siRNA Fas死亡结构域相关蛋白 乳腺癌 细胞增殖 细胞迁移 -
大鼠局灶性脑缺血再灌注后FADD mRNA及其蛋白的表达变化
目的 观察大鼠脑缺血再灌注后缺血半暗带皮质内Fas死亡结构域相关蛋白(FADD)mRNA及蛋白的表达变化.方法 用半定量的逆转录PCR(RT-PCR)法检测缺血2h再灌注不同时间点缺血半暗带皮质内FADD mRNA的表达,Western blot检测FADD蛋白表达的变化.结果 缺血半暗带脑皮质内FADD mRNA及其蛋白的表达于缺血灌注后3h明显升高,再灌注后12h达高峰(P＜0.01),至再灌注后24h明显下降.结论 脑缺血再灌注后缺血半暗带皮质内FADD mRNA及蛋白表达均明显增加,提示FADD可能在脑缺血再灌注损伤中发挥重要作用.
关键词： 脑缺血 Fas死亡结构域相关蛋白 -
RIP3－DAXX在全脑缺血诱导神经元死亡中的作用及机制
目的：探讨受体相互作用蛋白3（RIP3）、Fas死亡结构域相关蛋白（DAXX）在SD大鼠全脑缺血再灌注后海马CA1区锥体细胞死亡中的作用及机制。方法采用四动脉结扎法建立SD大鼠全脑缺血模型，缺血15 min后分别灌注6 h、5天。大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组、给药组（ Necrostatin－1，Nec－1组）和溶媒（ DMSO）对照组。免疫组织化学法检测RIP3、DAXX蛋白的表达变化情况，焦油紫染色法检测神经元细胞死亡的形态学变化。结果大鼠脑缺血再灌注6 h，大鼠海马神经元中RIP3、DAXX的表达明显增高，与假手术组比较差异有统计学意义（P＜0．01）。 NEC－1组RIP3、DAXX的表达明显降低，与缺血再灌注组比较差异有统计学意义（P＜0．01）。大鼠脑缺血再灌注5天后，缺血再灌注组大鼠海马CA1区存活的锥体细胞数目明显减少，与假手术组比较差异有统计学意义（P＜0．01）；NEC－1组大鼠海马CA1区存活的锥体细胞数目明显增多，与缺血再灌注组比较差异有统计学意义（P＜0．01）。结论 RIP3、DAXX参与了脑缺血再灌注后诱导神经元死亡的调控。
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Daxx在细胞凋亡中的研究进展
Fas死亡结构域相关蛋白(Fas death domain-associated protein,Daxx)是一种高度保守核蛋白,能与Fas死亡结构域结合,激活Jun氨基端激酶通路促细胞凋亡,在某些情况下Daxx也具有抗凋亡作用.Daxx在细胞凋亡中起着重要的作用,这将为某些疾病的发病机制研究提供一定的理论与实践基础.
关键词： Fas死亡结构域相关蛋白 促凋亡 抗凋亡 -
Daxx分子特性与应激
Fas死亡结构域相关蛋白(Fas death domain-associated protein, Daxx)是一种高度保守核蛋白,具有4个不同结构域,在细胞凋亡和转录调控中发挥重要作用.Daxx存在两个与其生物学功能密切相关的核定位信号,为Daxx与多种蛋白相互作用所必需.Daxx与氧化应激、心肌缺血等病理生理过程密切相关,提示Daxx在心血管系统中的起重要作用.
关键词： Fas死亡结构域相关蛋白 亚细胞定位 泛素化作用基序 核定位信号 应激 -
Daxx与雄激素受体结合的功能片段筛选
目的 体外筛选出能与雄激素受体具有相互作用的Daxx结构域.方法 应用聚合酶链反应扩增Daxx四个不同功能结构域,分别连接到带有GST标记的原核表达质粒pGEX-6p-1中,构建Daxx四个功能结构域的原核表达载体.经测序鉴定转化E Coli.BL21DE3菌株,经氨苄青霉素筛选并扩增阳性克隆,用IPTG诱导蛋白表达后纯化蛋白,采用GST pull-down体外筛选出与雄激素受体具有相互作用的Daxx功能结构域.结果 Daxx不同功能结构域的四个原核表达载体pGEX-6p-1/Daxx/DM1-240、pGEX-6p-1/Daxx/DM241-501、pGEX-6p-1/Daxx/DM502-625和pGEX-6p-1/Daxx/DM626-740经琼脂糖凝胶电泳和DNA测序分析,证实插入质粒的片段大小正确,无读码框移位和突变.IPTG诱导后蛋白表达具有明显差异性,表达蛋白与预期表达蛋白质分子量大小相当.纯化蛋白进行GST pull-down实验结果显示Daxx与雄激素受体具有相互作用.结论 Daxx通过第626-740位氨基酸序列与雄激素受体相互结合.
