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破骨细胞形成过程中唑来膦酸的作用途径及机制
背景:唑来膦酸可用来治疗骨吸收疾病,但其确切机制不明确.目的:探讨唑来膦酸对RANKL诱导的破骨细胞形成的影响和机制.方法:通过CCK8实验检测小鼠单核巨噬细胞系RAW264.7细胞的活力,分析大半数抑制浓度(IC50).体外用RANKL将RAW264.7细胞诱导为破骨细胞,鬼笔环肽和DAPI染色进行鉴定,并经抗酒石酸酸性磷酸酶染色来评估唑来膦酸在破骨细胞分化不同阶段对破骨细胞形成的影响,骨吸收实验检测破骨细胞骨吸收活性,后Western blot检测IκBα、P38、JNK及ERK蛋白的表达.结果与结论:①唑来膦酸作用48 h,对RAW264.7细胞的大半数抑制浓度(IC50)为33.9μmol/L,相比对照组,低于该浓度的唑来膦酸抑制破骨细胞分化;②唑来膦酸处理后骨吸收陷窝数目和面积明显减少(P<0.05);③蛋白表达水平上,唑来膦酸抑制RANKL诱导的IκBα磷酸化,其他蛋白磷酸化未见明显改变;④结果表明,唑来膦酸在体外可能通过调节NF-κB信号通路来抑制破骨细胞形成.
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槲皮苷抑制RANKL诱导的破骨细胞形成及骨吸收
[目的]探讨槲皮苷对核因子κB受体激动剂配体(receptor activator of nuclear factor kappa B ligand,RANKL)诱导的破骨细胞形成及骨吸收功能的影响.[方法]通过CCK-8法观察不同浓度槲皮苷(0～800μmol/L)干预不同时间(48 h、96 h)对RAW 264.7细胞的生存影响,确定合适的体外用药浓度;利用体外RANKL诱导RAW 264.7细胞形成破骨细胞体系,通过抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate resistant acid phosphatase,TRAP)染色计数评价槲皮苷(200、400 μmol/L)对破骨细胞形成和生存的影响;通过骨片吸收实验对骨凹陷和骨吸收面积统计分析评价槲皮苷(200、400 μmol/L)3 d内对成熟破骨细胞骨吸收功能的影响;采用实时定量(Real-Time) PCR技术,检测槲皮苷(200、400μmol/L)对RANKL诱导的破骨细胞特异性基因NFATc1、TRAP和c-fos表达水平的影响.[结果]细胞生存实验发现槲皮苷干预96 h后,槲皮苷(0～800 μmol/L)对RAW 264.7细胞4d内生存未发现显著影响;通过TRAP染色发现200、400.μmol/L槲皮苷能显著抑制体外RANKL诱导的破骨细胞形成;通过骨片吸收实验发现200、400 μmol/L槲皮苷3d内能显著降低骨吸收面积,提示其抑制成熟破骨细胞骨吸收功能;同时,槲皮苷能呈剂量依赖性抑制RANKL诱导活化T细胞核因子(nuclear factor of activated T cells,NFAT) c1、TRAP和c-fos基因表达.[结论]槲皮苷通过抑制NFATc1,TRAP和c-fos的表达,来抑制体外RANKL诱导的破骨细胞形成和骨吸收功能,是一种潜在治疗骨质疏松药物.
关键词： 槲皮苷 Raw 264.7细胞 破骨细胞形成 破骨细胞骨吸收 骨质疏松
