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无血清悬浮培养法文献资料
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鼻咽癌CNE2干样细胞具有干细胞特性及较高水平的自噬表达
背景:鼻咽癌是具有高侵袭转移潜能的头颈部恶性肿瘤,对鼻咽癌晚期患者尚未取得满意治疗效果.目前,已有一些自噬抑制剂与抗肿瘤药物同时应用于临床研究,但可能机制尚未明确.目的:探索鼻咽癌干样细胞是否存在较高水平自噬表达.方法:通过无血清悬浮培养法从人源化鼻咽癌CNE2细胞株中富集得到肿瘤干样细胞球.通过细胞分化实验、流式细胞术、透射电镜、Western blot及RT-PCR检测鼻咽癌CNE2亲本细胞和CNE2干样细胞的干细胞特性及细胞自噬水平.结果与结论:①通过无血清悬浮培养法能富集得到鼻咽癌CNE2干样细胞,在含血清培养基中培养能贴壁分化成鼻咽癌CNE2亲本细胞;②鼻咽癌CNE2干样细胞CD133阳性标记的细胞比例(9.6％)高于鼻咽癌CNE2亲本细胞(0.3％),差异有显著性意义(P<0.01);③与鼻咽癌CNE2亲本细胞相比,鼻咽癌CNE2干样细胞高表达干性相关基因(Bmi-1、Twist1)和自噬相关基因(Beclin1、LC3B),差异有显著性意义(P<0.01);④透射电镜观察鼻咽癌CNE2干样细胞自噬小体较鼻咽癌CNE2亲本细胞形成明显增多;⑤结果表明,通过无血清悬浮培养法可有效富集鼻咽癌CNE2干样细胞,鼻咽癌干样细胞具有干细胞生物学特性,并存在较高水平自噬表达.
