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  • 质粒载体介导的短发夹RNA对RPE细胞转染效率及毒性研究

    作者:蔡春梅;范思均;梁歌;姜严明;冯婧

    目的 连接针对人血管内皮生长因子(VEGF)设计的短发夹RNA与质粒载体,并转染视网膜色素上皮(RPE)细胞,观察其转染效率及对细胞的毒性.方法 设计针对人VEGF的短发夹RNA (shRNAs,V1,V2),V3为阴性对照即不含特异性shRNA,其表达载体为pGCSilencerTM /U6/Neo/GFP/VEGF RNAi.用LipofectamineTM 2000转染RPE细胞,用倒置荧光显微镜及流式细胞仪观察其转染效率;用MTT法观察其对细胞的毒性.结果 质粒载体介导的GFP在细胞中的表达呈黄绿色,弥漫于整个胞浆和胞核,转染后24h GFP开始表达,转染后48h表达明显增强.流式细胞仪检测质粒pGCSilencerTM /U6/Neo/GFP/VEGF RNAi对体外培养的RPE细胞转染效率为43.9%,质粒转染后MTT法测定细胞活性的OD值与对照组相比明显降低(P=O.004).结论 质粒pGCSilencerTM /U6/Neo/GFP/VEGF RNAi可以有效地转染体外培养的RPE细胞,但质粒转染对细胞有明显的毒性.

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