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HPLC-ELSD法分析测定阿胶与黄明胶中4种主要未衍生化氨基酸的含量
目的:建立了一种高效液相色谱-蒸发光散射检测法(HPLC-ELSD)同时测定阿胶和黄明胶中4种主要未衍生化氨基酸(L-甘氨酸、L-羟脯氨酸、L-丙氨酸、L-脯氨酸)含量的方法,从而对阿胶进行质量控制.方法:采用Thermo hypercarb色谱柱(150 mm ×4.6 mm,5μm)进行分析,流动相A为0.08％三氟乙酸甲醇、乙腈(90∶10),B为2mmol/L全氟戊酸水,梯度洗脱,流速为0.8 mL/min,载气流速为1.5 L/min,漂移管温度为55℃.结果:L-甘氨酸、L-羟脯氨酸、L-丙氨酸、L-脯氨酸的质量浓度与峰面积呈良好的线性关系(r＞0.9993),阿胶与黄明胶的加样回收率分别为98.12％～102.14％、97.23％～102.03％,RSD均＜2.53％(n=6).结论:此方法简单快速、重复性较好,适用于快速准确地测定阿胶和黄明胶中L-甘氨酸、L-羟脯氨酸、L-丙氨酸、L-脯氨酸含量,为其质量控制提供参考.
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非衍生化串联质谱法检测酰基肉碱方法的应用
目的 建立非衍生化串联质谱检测酰基肉碱的方法,以便用于有机酸和脂肪酸代谢病的检测和筛查.方法 使用含13种稳定同位素标记的酰基肉碱内标准品的溶剂萃取滤纸干血片中的游离肉碱和酰基肉碱,串联质谱仪直接进样,检测游离肉碱(CO)、乙酰基肉碱(C2)、丙酰基肉碱(C3)、丁酰基肉碱(C4)、异戊酰基肉碱(CS)、戊二酰基肉碱(C5DC)、己酰基肉碱(C6)、辛酰基肉碱(C8)、葵酰基肉碱(C10)、十二烷酰基肉碱(C12)、十四烷酰基肉碱(C14)、十六烷酰基肉碱(C16)和十八烷酰基肉碱(C18)的浓度.分析该方法的精确性、准确性及稀释回收率.结果 低浓度酰基肉碱的批内变异系数(CV)为6.61%～10.97%之间,批间CV为13.31%～18.98%;高浓度酰基肉碱的批内CV为5.74%～12.13%,批间CV为12.70%～18.88%.除C5DC外,其余酰基肉碱的偏倚为-15%～20%;酰基肉碱不同稀释浓度的回收率在90%～115%之间,实测值与预测值的相关系数(r)为0.97～0.99.结论 非衍生化串联质谱检测酰基肉碱有较高的精确性和准确度,有临床应用价值.此技术可以作为新生儿遗传代谢病筛查的常规技术.
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非衍生化串联质谱技术筛查上海部分地区新生儿遗传代谢病的回顾性分析
目的 回顾性分析用串联质谱技术筛查新生儿遗传代谢病的可行性和新生儿遗传代谢病的发病率.方法 用非衍生化串联质谱技术检测2010年至2016年上海部分地区126 579例新生儿滤纸干血片上11种氨基酸、游离肉碱和30种酰基肉碱,对新生儿进行氨基酸代谢异常、有机酸代谢异常和脂肪酸氧化代谢异常三大类疾病筛查.结果 126 579例新生儿中确诊遗传代谢病26例,包括氨基酸代谢异常13例、有机酸代谢异常7例和脂肪酸氧化代谢异常6例,总发病率为1∶4 869;另确诊2例母源性原发性肉碱缺乏症和1例母源性3-甲基巴豆酰辅酶A羧化酶缺乏症.结论 非衍生化串联质谱技术可有效用于新生儿遗传代谢病的筛查和诊断,还可对无症状母亲作出诊断.
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非衍生化-气相色谱法测定人血清游离脂肪酸谱
目的:建立非衍生化-气相色谱法(GC)测定人血清游离脂肪酸(FFA)谱的方法. 方法:采用GC法测定血清FFA.色谱柱为化学键合相FFAP毛细管柱(30 m×0.32 mm I.D, 涂层厚 0.25 μm),火焰离子化检测器.血清样品前处理方法为:以庚酸(C7 ∶ 0)和正十七酸 (C17 ∶ 0)为内标,用正己烷-异丙醇(4 ∶ 1,v/v)提取血清中FFA后直接进样. 结果:除乙酸和丙酸外,其余脂肪酸的回收率在81.08 %～118.29%.日内变异系数均<8.95% ,日间变异系数均<8.47% ,用各FFA与内标色谱峰面积的比值对浓度做标准曲线,γ2在 0.992 5～0.999 8. 结论:该方法简便可靠,符合生物样品的分析要求,可用于生物样品中FFA的测定.
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两种新生儿筛查非衍生化试剂的比较研究
目的 了解两种新生儿筛查试剂(PerkinElmer试剂盒及英盛生物试剂盒)在同一台串联质谱仪上的检测结果是否具有可比性.方法 优化仪器设置,以PerkinElmer试剂为比较试剂,国产英盛生物试剂为试验试剂,对93例患儿标本进行检测,对其结果进行相关分析.然后用英盛生物试剂测定PerkinElmer试剂的质控品,与靶值进行比较.结果 对两种试剂93例患儿的氨基酸及肉碱检测结果具有高度相关性(P＜0.01),英盛生物试剂所测得PerkinElmer试剂的质控品结果均在允许范围内.结论 英盛新生儿筛查试剂也可以应用于安捷伦Agilent 1600及6460Triple Quad LC/MS型串联质谱仪,选择不同试剂需要参考情况设定参考范围.
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氨基酸及肉碱非衍生化串联质谱法检测程序的测量不确定度评估
目的：对Waters公司ACQUITY TQD串联质谱仪及其配套试剂检测氨基酸、肉碱的程序进行测量不确定度评估，探讨评估的意义。方法按照《医学实验室———测量不确定度的评定与表达》提供的方法，用两种不同批号的试剂盒检测室内质控品各20个工作日，每个工作日在常规标本检测前、后各检测一次质控品，随机更换检测者，计算测量复现性引入的测量不确定度；统计原卫生部临床检验中心2014年和2015年进行的20次新生儿遗传代谢病串联质谱筛查中的氨基酸室间质评数据、16次酰基肉碱室间质评数据，计算偏倚引入的测量不确定度；根据测量复现性引入的测量不确定度和偏倚引入的测量不确定度计算相对合成标准不确定度和相对扩展不确定度。以原卫生部临床检验中心新生儿遗传代谢病串联质谱筛查中的氨基酸和酰基肉碱室间质评的允许总误差指标作为目标扩展不确定度。结果瓜氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、丙酰肉碱、辛酰肉碱、十二碳酰肉碱、十六碳酰肉碱、十八碳酰肉碱的相对合成扩展不确定度为19．1％～26．1％（k＝2），小于目标不确定度；亮氨酸、酪氨酸、缬氨酸、游离肉碱的相对合成扩展不确定度为31．0％～43．3％（k＝2），大于目标不确定度；异戊酰肉碱的不确定度需另行评估。结论通过氨基酸及肉碱非衍生化串联质谱法配套检测程序的测量不确定度的评估，不仅可以为持续改进检测质量提供机会，而且有助于实验技术人员正确解读检测数据及临床医师正确使用检验报告。
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串联质谱法快速检测干血滤纸片酰基肉碱含量
目的 建立一种串联质谱法对干血滤纸片中的酰基肉碱进行快速分析,以用于脂肪酸代谢障碍性疾病和有机酸血症诊断及治疗效果的监测.方法 取8种不同浓度的酰基肉碱的干血滤纸片(直径5 mm),用甲醇(含已知浓度的相应酰基肉碱同位素内标)对其进行萃取,不进行衍生化,萃取物过滤后直接进入ESI+-MS/MS上机分析测定;采用多反应监测模式(MRM),以标准品制作标准曲线,同位素内标法定量建立分析方法,进行回收试验、精密度试验、干扰试验及准确度试验.结果 各标准曲线相关系数r2>0.994.低浓度各种酰基肉碱回收率为85 %～103.5%,准确度在91.8%～110.0%;中浓度各种酰基肉碱回收率为85%～96%,准确度在87.6%～110.1%;高浓度酰基肉碱回收率为94%～100.1%,准确度在95.7%～110.1%.实测值与加入浓度之间的相关系数(r)为:0.997～1.000.各种酰基肉碱批内变异系数(CV)1%～10%和批间变异系数(CV)5%～13%.内标液保存1～21天的检测均值均在CDC提供的参考范围内,而批内CV%均＜10%.263例0～6岁健康儿童血滤纸片中酰基肉碱浓度因受年龄因素影响,按不同年龄组划分各种肉碱参考范围.结论 非衍生化串联质谱法分析干血滤纸片中的酰基肉碱含量,样本前处理简单,能够达到较高的精确度和准确度,无常规串联质谱中的衍生化、氮吹和复溶等步骤,大大节省了的标本处理时间,是一项简便、快捷、准确的检测方法,可以用于脂肪酸代谢障碍性疾病和有机酸血症诊断及治疗效果监测.
