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β1,4-半乳糖基转移酶-I在强直性脊柱炎患者髋关节滑膜组织中的研究
目的:探讨β1,4-半乳糖基转移酶-I(β1,4-GalTI)在强直性脊柱炎(AS)髋关节滑膜组织中的表达情况.方法:选取医院收治的AS病人30例作为AS组,选取股骨颈骨折后行髋关节置换术病人25例作为对照组,Real-time PCR和western blot检测滑膜组织中β1,4-GalTI表达情况,Lectin biot检测显示β1,4-GalTI合成的Galβ1,4 GlcNA糖链表达情况,组织免疫荧光双标分析β1,4-GalTI及其合成的Galβ1,4 GlcNA糖链与主要炎症细胞共定位情况.结果:AS组β1,4-GalTI mRNA、β1,4-GalTI/GAPDH、Galβ1,4 GlcNA糖链表达高于对照组,AS患者活动期高于稳定期,差异有统计学意义(P<0.05);β1,4-GalTI及其合成的Galβ1,4 GlcNA糖链和中性粒细胞标记物MPO、巨噬细胞标记物ED-1、成纤维细胞标记物THY 1和体细胞标记物CD3共定位.结论:AS病人滑膜组织中β1,4-GalTI呈高表达,且与滑膜组织中的主要炎性细胞存在共定位.
关键词： 强直性脊柱炎 滑膜组织 β1 4-半乳糖基转移酶-I -
细胞表面β-1,4-半乳糖基转移酶-I在免疫突触形成中的作用
目的:研究细胞表面β-1,4-半乳糖基转移酶-I(β-1,4-galactosyltransferase I,β-1,4-GalT-I)在免疫突触形成中的作用.方法:以抗CD3、CD28单克隆抗体活化Jurkat 细胞,应用实时荧光定量PCR及流式细胞术检测分析β-1,4-GalT-I的表达变化,激光共聚焦显微镜观察β-1,4-GalT-I在Jurkat细胞活化前后的表达与定位;将Jurkat细胞与SEB负载的Raji细胞共培养以构建Jurkat-Raji细胞免疫突触,观察β-1,4-GalT-I在免疫突触中的定位.结果:β-1,4-GalT-I mRNA表达水平随着Jurkat 细胞的活化逐渐增高,在细胞活化后36小时达到高峰;活化后细胞表面β-1,4-GalT-I分子的表达较静止状态高;共聚焦显微镜显示在活化的Jurkat细胞表面及Jurkat-Raji细胞免疫突触部位β-1,4-GalT-I表达信号增强且其分布发生重排和簇集,且与CD3分子共定位,与CD28分子部分共定位.结论:Jurkat细胞表面的β-1,4-GalT-I分子参与了免疫突触的形成.
关键词： β-1 4-半乳糖基转移酶-I Jurkat细胞 免疫突触 -
β1,4-半乳糖基转移酶-Ⅰ表达质粒在许旺细胞中的转染与鉴定
目的构建β1,4-半乳糖基转移酶-I(β1,4-galactosyltransferase I, β-1,4-GalT-I)表达质粒,并将其转染到许旺细胞中,为探讨周围神经许旺细胞表达β-1,4-GalT-I的生物学意义提供研究基础.方法构建β-1,4-GalT-I表达质粒,并将其转染到分离培养的许旺细胞中;用特异识别β1,4-半乳糖苷键的蓖麻凝集素-I(Ricinus Communis Agglutinin-I, RCA-I)免疫组织化学方法和Northern Blot鉴定转染情况.结果通过酶切鉴定和测序分析,实验成功构建β-1,4-GalT-I表达质粒.将构建的表达质粒转染到许旺细胞中,经鉴定表明,转染的表达质粒在许旺细胞中能表达β-1,4-GalT-I,并随转染浓度增高而表达增加.结论β-1,4-GalT-I在许旺细胞中的转染和表达,对分析许旺细胞表达β-1,4-GalT-I的意义如对其自身增殖的影响和对神经元生长作用,提供了研究基础.
关键词： β1 4-半乳糖基转移酶-I 表达质粒 许旺细胞 大鼠
