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阿特拉津致PC12细胞损伤机制的研究
目的 通过体外实验,探讨阿特拉津(atrazine,ATR)对多巴胺能神经元的的毒性作用及损伤的分子机制.方法 在体外培养PC12细胞,加入不同浓度ATR染毒,在12和24 h收获细胞和培养液,通过高效液相色谱荧光法(HPLC-FL)测定多巴胺(Dopamine,DA)浓度,通过逆转录聚合酶链反应(real-time PCR)和蛋白质印迹法(Western-blot)检测ATR对PC12细胞酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)、核受体相关因子1(nuclear receptor-related factor 1,Nurr1)、巴胺转运体(dopamine transporter,DAT)和囊泡单胺转运体2(vesicular monoaminetransporter 2,VMAT2)基因表达的影响与蛋白表达量的变化,并用SPSS17.0进行统计学分析.结果 HPLC-FL显示随着ATR染毒剂量的增加,细胞DA含量呈剂量依赖性降低(P＜0.05),并随时间增长减少.Real-time PCR结果显示,用100、200和400μmol/L浓度的ATR染毒12与24 h的PC12细胞,与对照组比较差异显著(P＜0.05),存在剂量-反应关系,呈负相关性.PC12细胞中Nurr1、DAT、VMAT2、TH蛋白显著降低(P＜0.05).结论 ATR通过影响巴胺代谢途径中的相关酶及其调控酶形成的基因致PC12细胞多巴胺能损伤.
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阿特拉津对小鼠免疫功能的影响
目的 初步探讨除草剂阿特拉津(ATZ)对雄性Balb/c小鼠免疫功能的影响.方法 SPF级雄性Balb/c小鼠100只,随机分为5组,每组20只,设置阴性对照组,低、中、高剂量组(43.75、87.5和175 mg/kg)和阳性对照组(环磷酰胺40 mg/kg).灌胃染毒28 d后,通过测定小鼠脾脏和胸腺的脏器系数、T淋巴细胞转化能力、迟发型变态反应和血清溶血素凝集程度来评价ATZ对免疫功能的影响.结果 ATZ各剂量组的胸腺脏器系数和T淋巴细胞转化能力均显著低于对照组(P＜0.01),高剂量ATZ组迟发型变态反应和血清溶血素凝集程度均低于对照组(P＜0.05).结论 阿特拉津对小鼠免疫系统功能有一定的毒性损伤作用.
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阿特拉津对小鼠淋巴细胞钙离子浓度和钙调蛋白表达的影响
目的 研究阿特拉津对小鼠脾脏淋巴细胞内钙离子浓度([Ca2+]i)及钙调蛋白(CaM)表达水平的影响.方法 选用BALB/c小鼠分别以100、200和400mg/kg剂量的阿特拉津灌胃染毒,3周后处死,采用原子吸收光谱法测定血清中[Ca2+]i;脾淋巴细胞与荧光探针Fura-2/AM孵育后,用荧光分光光度法检测细胞内[Ca2+]i,蛋白印迹法观察细胞内CaM表达水平.结果 各剂量组血清中[Ca2+]i无显著变化;中、高荆量纽淋巴细胞内游离钙离子浓度显著高于阴性对照组(P＜0.01);中、高剂量组细胞内CaM的表达均显著低于阴性对照组(P＜0.01).结论 阿特拉津可致小鼠淋巴细胞内钙离子浓度升高,抑制其CaM的表达.
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羧基化半抗原直接包被酶联免疫吸附实验法测定水中残留阿特拉津
目的 探讨新型羧基化半抗原直接包被酶联免疫吸附实验(ELISA)法测定水中残留阿特拉津的可行性.方法 使用烷基化试剂3-氨基丙基三乙氧基甲硅烷(APTES)在聚苯乙烯表面构建活性的伯胺基,羧基化阿特拉津经活化后进攻伯胺基形成稳定的酰胺键从而完成羧基化半抗原直接偶联.羧基化半抗原直接包被ELISA法测定水中阿特拉津残留.结果 该方法检出限为0.68 ng/mL.该抗体与西玛津交叉反应率为24％,其他类似物交叉反应率均小于0.1％,特异性较高.在实际样本分析中具有较高的准确度(添加回收率94.0％ ～ 112.0％)和稳定性(相对标准偏差2.72％～3.53％).结论 该方法用于检测水中残留阿特拉津,方法简便,结果可靠.
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阿特拉津对大鼠支持细胞凋亡的影响
目的 探讨阿特拉津对雄性SD大鼠睾丸支持细胞凋亡的影响及其作用机制.方法 选用18 ～21日龄雄性SD大鼠,建立支持细胞原代培养模型.设溶剂对照组和阿特拉津10、50、100和200 μmol/L 4个染毒剂量组,对支持细胞染毒24 h后,采用MTT法检测细胞活性,免疫荧光法观察波形蛋白的表达,流式细胞术测定细胞凋亡率,Real time-PCR与ELISA分别检测FasL、caspase-3与caspase-8的mRNA表达及蛋白含量.结果 阿特拉津50、100和200 μmol/L染毒组细胞活力分别为82.47％、75.23％和53.76％,与溶剂对照组比较分别降低17.53％ (P ＜0.05)、24.77％ (P ＜0.05)、46.24％ (P ＜0.01).波形蛋白表达受抑制.阿特拉津50、100和200 μmol/L染毒组细胞凋亡率分别为8.53％、13.07％和14.45％,与溶剂对照组比较分别升高86.86％ (P ＜0.01)、186.13％ (P ＜0.01)、216.06％ (P ＜0.01).FasL、caspase-3、caspase-8的mRNA表达及蛋白含量上调(P＜0.05或P＜0.01).结论 阿特拉津可影响大鼠支持细胞活性,可通过FasL途径诱导支持细胞凋亡.
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阿特拉津对小鼠腹腔巨噬细胞功能影响的体外研究
目的 探讨阿特拉津(ATZ)体外染毒对小鼠腹腔巨噬细胞功能的影响,为其免疫毒性评价积累资料.方法 分离培养小鼠腹腔巨噬细胞,经不同浓度(0～1000μmol/L)阿特拉津处理后,MTT比色法测定细胞活力,中性红(NR)法测定其吞噬功能,硝酸还原酶法测定NO含量,ELISA法测定TNF-α释放能力,DCFH-DA荧光标记流式细胞术测定活性氧含量.结果 MTT法测得ATZ对小鼠腹腔巨噬细胞的24、48、72 h染毒的IC50分别为(887.4±1.11)、(360.2±1.13)、(270.6±1.20)μmol/L.NR吸收法所测得各时间点IC50分别为(214.2±1.14)、(120.0±1.10)、(42.60±1.12) μmol/L.24 h及72 h染毒后,低浓度ATZ剂量组NO含量较对照组增加,高浓度剂量组NO含量较对照组出现下降趋势.72h染毒后,低浓度ATZ剂量组(0.01、0.1μmol/L)TNF-α的含量高于对照组(P＜0.05),但在1μmol/L及以上的ATZ染毒组TNF-α含量较对照组降低(P＜0.05).小鼠腹腔巨噬细胞在ATZ低剂量组(0.01、1μmol/L)染毒24 h和72 h时均能促使ROS的产生(P＜0.05),但在100μmol/L剂量组里ROS释放量却降低.结论 阿特拉津染毒可影响小鼠腹腔巨噬细胞的活性和吞噬功能,并可干扰其细胞因子/活性氧/活性氮的释放.
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阿特拉津及其主要代谢物在大鼠体内的组织分布
目的:建立HPLC测定大鼠血浆和组织中阿特拉津(ATR)及其主要代谢物脱乙基脱异丙基阿特拉津(DEDIA)的浓度,研究ATR及DEDIA在大鼠组织的分布特征.方法:大鼠单剂量灌胃ATR,分别在给药后0.5,2,6和12 h取血和组织样本,以乙腈沉淀蛋白,0.5%冰醋酸甲醇液-0.5%冰醋酸水溶液梯度洗脱,HPLC测定样品浓度.结果:ATR在体内被快速且大量的代谢为DEDIA,血浆和组织中均能检测到ATR和DEDIA,尤以DEDIA为主;DEDIA在各组织中广泛分布,但消除速率不一,以肝、肾消除速度慢.结论:ATR及DEDIA在大鼠各组织中的分布及消除规律,可为临床毒代动力学提供参考.
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哺乳期暴露阿特拉津对仔鼠精原细胞凋亡的影响
为研究哺乳期暴露阿特拉津对仔鼠精原细胞凋亡的影响,将16窝健康清洁级昆明小鼠[16只母鼠及出生后7d雄性仔鼠(每窝2～5只)]随机分为4组,分别为对照(植物油)组和低(50 mg/kg)、中(100 mg/kg)、高(200 mg/kg)剂量阿特拉津染毒组,每组4窝.对母鼠进行灌胃染毒,染毒剂量为10 ml/kg,每天1次,连续进行8d.仔鼠于生后7～15d通过母乳染毒阿特拉津.染毒结束后,测定仔鼠睾丸生精管中精原细胞的凋亡情况.结果显示,与对照组比较,各剂量阿特拉津染毒组仔鼠精原细胞凋亡率增高,差异均有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01)；且随着阿特拉津染毒剂量的升高,仔鼠精原细胞凋亡率呈上升趋势.表明阿特拉津可以通过母鼠乳汁增高仔鼠精原细胞的凋亡率,影响精子的发生.
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土壤中阿特拉津和甲萘威的高效液相色谱测定法
探讨土壤中阿特拉津和甲萘威含量的高效液相色谱测定方法.用乙腈对土壤中的阿特拉津和甲萘威进行超声萃取,采用高效液相色谱反相C18色谱柱,以光谱和荧光检测器定性,二极管阵列检测器定量.该方法线性范围为0.1～2.0mg/L；标准曲线相关系数(r)大于0.999；阿特拉津和甲萘威的检出限分别为0.7和0.6 μg/L.该方法可以快捷、迅速地检测土壤中阿特拉津和甲萘威,适用于土壤中两种污染物的检测.
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阿特拉津抗体芯片制作条件的优化
目的 探讨制备阿特拉津抗体蛋白芯片的影响因素,优化制备的实验条件,为采用蛋白芯片技术检测阿特拉津打下基础.方法 固定在醛基化玻片的兔抗阿特拉津单克隆抗体质量浓度分别为1.27、0.635、0.254、0.0127 mg·mL-1,封闭液选择多种不同浓度的卵清蛋白和胎牛血清,缓冲液选择不同pH值的PBS,温度始终选择37℃,抗原抗体反应时间为15、30、60、120 min,采用竞争法进行阿特拉津样品检测,GenePixTm4000B扫描仪进行扫描,分析荧光信号强度.结果 荧光信号强度随阿特拉津抗体浓度的增加、反应时间的延长而增强.选择2%OVA封闭、pH 7.2稀释样品溶液时背景值低.结论 当阿特拉津抗体质量浓度为1.27 mg·mL-1、2%OVA封闭、pH值7.2～9.0,抗原抗体反应时间60～120 min时,可以得到较理想的检测结果.
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阿特拉津对斑马鱼影响的研究
目的 研究农药阿特拉津是否具有雌激素效应.方法 选择斑马鱼为受试动物,随机分为对照组和阿特拉津暴露组.观察不同浓度的阿特拉津(0.1、0.5、1.0,5.0、10.0 mg/L)对斑马鱼的生长、体内卵黄蛋白原(Vtg)含量及肝脏7-乙氧基-3-异吩噁唑酮-脱乙基酶(EROD)酶活力的影响.结果 经14d暴露后,阿特拉津浓度低于1.0 ms/kg时雄性斑马鱼体重增长分别为对照组的1.57、1.81和2.07倍;当阿特拉津浓度高于1.0 mg/kg时,实验组斑马鱼体重出现负增长现象.当阿特拉津浓度为1.0、5.0和10.0 mg/kg时,实验组雌性斑马鱼体重分别为对照组的-0.42、-2.18和-1.32倍.阿特拉津可诱导雄性斑马鱼体内Vtg表达,具有雌激素效应并抑制肝脏中EROD酶活力,与对照组相比,差异均有统计学意义(P＜0.01).结论 阿特拉津对水生动物有明确的生长和生殖毒性.
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阿特拉津高灵敏酶联免疫吸附检测法的建立
目的:建立高灵敏度的阿特拉津酶联免疫吸附检测法.方法:将间接竞争ELISA进行条件优化以提高检测灵敏度,包括包被抗原与一抗的佳工作浓度筛选、选择一抗的佳稀释度对包被抗原进行细化筛选、不同有机溶剂对竞争结合反应的影响、酶标二抗稀释度筛选等.用建立的酶联免疫检测法检测实际样品,再与高效液相色谱法(HrLC)检测进行比较.结果:利用优化后条件建立了阿特拉津间接竞争ELISA检测曲线,标准曲线的相关系数R2=0.9958,相关性较好.另由此标准曲线可得LOD(低检出限)为1.972 ng/ml.用于检测实际样品,回收率在80％-120％之间.当添加样品浓度为(0～6)ng/ml时,该法的检测灵敏度高于HPLC.结论:新建立的阿特拉津ELISA特异性好、精密度高,可代替大型仪器用于阿特拉津实际样品检测.
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绿麦隆与阿特拉津对小鼠毒性作用
农药长期、大量的使用在保证农业高产稳产的同时也带来了许多环境问题.实际农业生产中多种农药被同时使用以控制农业杂草和害虫,多种农药进入环境,构成复合污染.本文观察了麦田、玉米田的除草剂绿麦隆和阿特拉津单独与两药联合使用对小鼠的毒性作用,为科学评价农药的安全性提供资料[1].
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除草剂阿特拉津对不同动物模型生殖毒性的研究进展
阿特拉津是一种广泛应用的除草剂,许多国家和地区的地表水和地下水中都检出了阿特拉津的残留物.阿特拉津对动物生殖功能的影响,已经引起广泛关注.本文以阿特拉津对鱼类、两栖类、鸟类、哺乳类等四类动物模型的生殖毒性进行了综述,为预防和减轻阿特拉津对人类的不良影响提供理论依据.
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除草剂阿特拉津的免疫毒性及其对大鼠免疫功能的影响
目的:检测除草剂阿特拉津(ATR)对大鼠免疫功能的影响,阐明ATR的免疫毒性.方法:32只Wistar大鼠随机分为对照组和低、中、高剂量ATR组(n=8),分别给予0、5、25和125 mg·kg-1 ATR连续灌胃28 d.检测各组大鼠体质量和脾指数;HE染色观察各组大鼠脾脏组织的病理形态表现;采用淋巴细胞转化实验测定各组大鼠脾淋巴细胞转化率;检测各组大鼠NK细胞杀伤活性,流式细胞术检测各组大鼠脾细胞中CD3+和CD8+T细胞百分比,ELISA实验检测各组大鼠血清中白细胞介素1(IL-1)和白细胞介素6(IL-6)水平.结果:与对照组比较,各剂量ATR组大鼠体质量差异无统计学意义(P>0.05);与对照组比较,低和中剂量ATR组大鼠脾指数差异无统计学意义(P>0.05),高剂量ATR组大鼠脾指数降低(P<0.05).HE染色检测,与对照组比较,低剂量ATR组大鼠脾组织无明显变化;中剂量ATR组大鼠脾组织生发中心略减少,高剂量ATR组大鼠脾组织呈现明显退行性变,生发中心消失,白髓减少,红髓充血.NK细胞杀伤活性检测,与对照组比较,各剂量ATR组大鼠NK细胞杀伤活性差异无统计学意义.脾淋巴细胞转化实验,与对照组比较,低和中剂量ATR组大鼠淋巴细胞转化率差异无统计学意义(P>0.05),高剂量ATR组大鼠脾淋巴细胞转化率降低(P<0.05).流式细胞术检测,与对照组比较,低和中剂量ATR组大鼠脾细胞中CD3+和CD8+细胞百分比差异无统计学意义(P>0.05),高剂量ATR组大鼠脾细胞中CD3+、CD8+T细胞百分比降低(P<0.05).细胞因子检测,与对照组比较,低和中剂量ATR组大鼠血清中IL-1和IL-6水平差异无统计学意义(P>0.05),高剂量ATR组大鼠血清中IL-1和IL-6水平升高(P<0.05).结论:高剂量ATR可产生明显的免疫毒性效应.
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除草剂阿特拉津对健康雌性小鼠血清性激素水平的影响及其意义
目的:观察阿特拉津(ATR)处理后小鼠血清中性激素水平的变化,探讨ATR对性激素相关疾病的可能影响.方法:将32只健康雌性C57小鼠随机分为对照组和5、25和125 mg·kg-1 ATR组,每组各8只,对照组小鼠给予橄榄油溶剂灌胃,其他组小鼠分别灌胃给予5、25和125 mg· kg-1 ATR,每日1次,共28 d,收集小鼠血清.放射免疫法检测各组小鼠血清中性激素水平;HE染色观察各组小鼠卵巢组织形态学.结果:与对照组比较,25和125 mg· kg-1 ATR组小鼠血清中雌二醇(E2)、睾酮(T)水平明显增高(P＜0.05),且随ATR剂量升高,E2和T水平逐渐增高;与对照组比较,25和125 mg· kg-1 ATR组小鼠血清中促黄体生成激素(LH)和促卵泡生成激素(FSH)水平显著降低(P＜0.05或P＜0.01),且以125 mg·kg-1剂量组降低为明显(P＜0.01);各组小鼠血清中孕酮(P)和垂体泌乳素(PRL)水平的差异无统计学意义(P＞0.05);与对照组比较,25和125 mg· kg-1 ATR组小鼠卵巢中发育卵泡比例减少,大型闭锁卵泡比例增多,尤以125 mg·kg-1 ATR组小鼠卵巢组织为明显.结论:ATR可能通过增加血清中E2和T水平,下调LH和FSH分泌,从而干扰卵巢中卵泡的成熟.
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除草剂阿特拉津体内生物学毒性的研究进展
在神经系统,阿特拉津(ATR)可干扰大脑发育和分化,诱导小鼠行为反射的发育模式发生改变；抑制多巴胺的摄取和储存,导致细胞内多巴胺增加,进一步导致氧化损伤.在免疫系统,ATR可减少免疫系统构成细胞并影响淋巴细胞分布,影响树突状细胞,(DC)细胞成熟,干扰体液和细胞介导的免疫反应.在生殖系统,ATR可诱导小鼠睾丸发生变性,抑制黄体生成素从而抑制排卵并诱发流产.在内分泌系统,ATR可作为内分泌干扰物损伤线粒体功能引起胰岛素抵抗,抑制雌激素引起的黄体生成素和催乳素高峰.此外,ATR还具有遗传学毒性并可引起氧化应激损伤.
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阿特拉津对大鼠肝肾功能及DNA氧化损伤作用的实验研究
目的:探讨阿特拉津对大鼠肝肾功能的影响及亚慢性阿特拉津暴露对大鼠DNA损伤的影响.方法:Wistar大鼠按体重随机分为阿特拉津高剂量组(97.8mg/kg·d)、低剂量组(35.6mg/kg·d)和阴性对照组,采用喂饲法连续染毒.染毒4、8和12w时分别处死一批动物,采用试剂盒测定血清中生化指标和8-羟基脱氧鸟苷的浓度.结果:在不同时间点,染毒组大鼠血清中谷丙转氨酶、谷草转氨酶、总蛋白、尿素氮含量与对照组相比显著升高(P<0.05).染毒12w高剂量组与对照组相比大鼠血清中8-羟基脱氧鸟苷浓度显著增高(P<0.05).结论:阿特拉津亚慢性经口染毒能引起大鼠肝肾功能的损伤和DNA氧化损伤.
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气相色谱法同时测定菜用大豆中阿特拉津和乙草胺
目的 建立抗阿特拉津大豆中阿特拉津、乙草胺的气相色谱一质谱法检测方法.方法 样品经乙酸乙酯提取,Florisil固相萃取小柱净化,气相色谱一质谱法进行检测.结果 阿特拉津回收率为76.92 %～96.24 %,乙草胺回收率为79.95 %～90.06 %,阿特拉津和乙草胺测定结果的相对标准偏差分别为6.54 %和3.91 % (n=6).结论 阿特拉津和乙草胺在0.02～1.0 mg/L范围内有良好的线性关系,检测限达0.010 mg/kg.
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微波提取-高效液相色谱法测定土壤中痕量阿特拉津
目的:采用微波提取,高效液相色谱-紫外检测法测定土壤中阿特拉津.方法:分别考察了萃取溶剂种类、用量、温度、时间等因素对萃取率的影响.结果:考察了洗脱条件、柱流速及柱温对阿特拉津分离的影响;方法低检测限为1.00 ng/kg,相对标准偏差小于1.00%,回收率为71.3%～91.9%.结论:结果表明该方法能够满足土壤样品中阿特拉津的检测要求.
