心力衰竭患者血浆可溶性晚期糖基化终末产物受体（sRAGE）变化与心功能的关系

目的：探讨心力衰竭患者血浆可溶性晚期糖基化终末产物受体(soluble receptor for advanced glycation endproducts, RAGE)浓度变化,分析 sRAGE 与心功能的关系。方法选择首都医科大学附属北京同仁医院就诊的心力衰竭患者,纽约心脏学会(New York Heart Association,NYHA)心功能分级为Ⅱ~Ⅳ级,同期住院非心力衰竭患者为对照组,用酶联免疫吸附测定法方法定量检测血浆 sRAGE 浓度,对比分析各组间血浆 sRAGE 浓度的差异。结果血浆 sRAGE 浓度在对照组为(0.562±0.473)ng/mL,心力衰竭组为(0.844±0.705)ng/ mL,2组间比较差异有统计学意义(P<0.01)。血浆 sRAGE 浓度在 NYHAⅡ级组为(0.680±0.506)ng/ mL、NYHAⅢ级组(0.844±0.646)ng/ mL、NYHAⅣ级组(91.077±0.910)ng/ mL。各组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论心力衰竭患者血浆 sRAGE 水平升高,且与心力衰竭的严重程度相关。

儿童系统性红斑狼疮血清抗C1q抗体的检测及意义

目的：探讨抗 C1q 抗体与儿童系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)的相关性及临床意义,为儿童 SLE 的早期诊断提供经验。方法选择包头医学院第一附属医院2009年6月至2013年12月间初诊住院 SLE 患儿40例,同期健康儿童20例。记录患儿和健康儿童抗 C1q 抗体、抗 dsDNA 抗体、抗 SM 抗体、抗 U1RNP 抗体、抗 SSA 抗体、抗 SSB 抗体、补体 C3、C4等相关免疫检验指标并分析其与抗 C1q 抗体的相关性。结果1)SLE 患儿与健康儿童平均年龄相比,差异无统计学意义(P>0.05)；2)40例 SLE 儿童抗 C1q 抗体阳性率为37.5%,而健康儿童组抗 C1q 抗体均为阴性,两组阳性率比较差异有统计学意义(字2=8.1,P<0.01),抗 C1q 抗体对儿童 SLE 的诊断敏感度为37.5%,特异度为100%；抗 dsDNA 抗体对儿童 SLE 诊断的敏感度为62.5%,特异度为95%；抗 SM 抗体对儿童 SLE 诊断的敏感度为22.5%,特异度为90%。3)抗 C1q 抗体阳性组的抗 SM 抗体、抗 RNP 抗体、抗 SSA 抗体、抗 SSB 抗体、补体 C3、C4与抗 C1q 抗体阴性组比较,差异无统计学意义(P>0.05)；两组抗 dsDNA 抗体相比,差异有统计学意义(字2=5.98,P=0.02)；4)抗 dsDNA 抗体与抗 C1q 抗体正相关(r=0.51,P<0.01)。结论抗 C1q 抗体对儿童 SLE 的诊断具有较高的特异性,有助于抗 dsDNA 抗体阴性的儿童 SLE 的诊断。

45例老年的全血细胞减少症的临床分析

目的：探讨老年全血细胞减少症的病因分析。方法选取2009年1月至2013年1月在江苏省常州市第七人民医院治疗的45例老年全血细胞减少症患者作为研究对象，回顾性分析老年全血细胞减少症患者的的临床资料。结果45例老年全血细胞减少症患者中，非血液系统疾病31例，血液系统疾病12例，不明原因2例。非血液系统疾病白细胞减少和贫血多表现为轻、中度，血液系统疾病的白细胞和红细胞减少多为中、重度，血小板减少为极重度，三系血细胞减少程度差异有统计学意义(P<0.05)。结论应重视老年全血细胞减少的原因，除造血系统疾病的原因以外，非造血系统疾病占相当比例，分析其病因，以便减少其误诊率和漏诊率，进一步提高诊断准确率。

启动子甲基化调节在低表达环氧合酶-2的食管鳞癌移植模型中的作用

目的：环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)参与食管鳞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)的发生发展过程,但在部分 ESCC 细胞株中 COX-2呈低表达。选择低表达 COX-2基因的 ESCC 进行裸鼠移植。探讨 COX-2基因甲基化与基因表达的关系,观察联合 COX-2选择性抑制剂和去甲基化药物干预对移植瘤生长的影响。方法选择 KYSE 150细胞进行裸鼠移植,采用数字表法随机分为4组：0.9%(质量分数)氯化钠注射液对照检查组7只。分别给予①尼美舒利(nimesulide,NIM)+5-氮杂脱氧胞苷(5-Aza-deoxycytidine,5-Aza)干预②尼美舒利干预③5-Aza 干预。5周后处死动物,比较各组移植瘤的直径,计算移植瘤体积,绘制生长曲线。反转录-聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)测定组织中 COX-2 mRNA 表达；免疫组织化学方法测定 COX-2蛋白的表达；亚硫酸氢盐测序方法测定移植瘤中 COX-2启动子的甲基化状态。酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法检测各组移植瘤中前列腺素 E2(prostaglandin E2,PGE2)的浓度。结果各组动物体质量增长差异无统计学意义,组间具有可比性。联合干预组移植瘤明显小于其他各组,差异具有统计学意义(P<0.01)。 COX-2 mRNA 和蛋白表达结果一致,均表现为联合干预组低,5-Aza 干预组高。甲基化测序结果10个 CpG 位点中联合干预组和5-Aza 干预组的甲基化率低于尼美舒利组和对照组(30% vs 58.3%)。 PGE2的浓度分析显示联合干预组明显低于对照组和单独尼美舒利干预组, PGE2比值在联合干预组、尼美舒利干预组分别为0.37、0.91,联合干预组的比值与对照组比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论低表达 COX-2的 ESCC 移植模型中 COX-2启动子甲基化是调节该基因表达的重要机制之一。联合选择性 COX-2抑制剂尼美舒利和去甲基化药物5-氮杂脱氧胞苷对低表达 COX-2的 ESCC 移植瘤的生长有协同抑制作用。

不同年龄段人群蛋白质 N-糖基的结构谱型研究

目的：分析比较不同年龄人群的血浆 N-糖基的结构谱型。方法采用整群抽样，以2009年4至7月在首都医科大学宣武医院进行健康体检的212名居民为研究对象，基于高效液相色谱法进行血浆糖基组检测。将年龄以中位数35为切点分组，不同年龄组的糖基含量比较采用两独立样本 t 检验或非参数检验。结果212名研究对象的平均年龄为(37.78±17.89)岁，性别比为0.88。无论男性女性，半乳糖基化水平，≥35岁组二半乳糖聚糖含量较高、双触角非半乳糖聚糖含量较低；在两分支糖基的唾液酸化水平，<35岁组二唾液酸化双触角聚糖含量较高；在唾液酸化水平，≥35岁组单唾液酸含量高、三唾液酸较低；岩藻糖基化位置，≥35岁组核心岩藻糖化聚糖含量高；在分支水平，≥35岁组双触角聚糖含量较高，三触角聚糖和四触角聚糖含量较低(P≤0.03)。结论血浆 N-糖基结构可能与年龄有关。

眼附属器淋巴造血组织增生性疾病临床病理分析

目的：探讨眼附属器淋巴造血组织增生性疾病的临床病理学特征。方法回顾性分析210例首都医科大学附属北京同仁医院眼附属器淋巴造血组织增生性疾病患者的临床资料和临床病理资料。结果①该组眼附属器淋巴造血组织增生性疾病中常见的是非霍奇金淋巴瘤(100例,47.6%),其次为炎性假瘤(45例,21.4%)和良性淋巴上皮病变(Mikuliczs 病,41例,19.5%)。②该组病变部分类型在发病年龄和性别上有特点,组织病理学上的表现有交叉。③该部位非霍奇金淋巴瘤中常见的为结外黏膜相关组织边缘区 B 细胞淋巴瘤(74例),眼附属器的结外黏膜相关组织边缘区 B 细胞淋巴瘤有其不同于其他解剖部位的该肿瘤的特点。④免疫组织化学染色在该部位淋巴造血组织增生性疾病的诊断和鉴别诊断中有非常重要的作用。⑤眼附属器的 IgG4相关性疾病(10例)的诊断和临床病理表现有其独有的特征。结论眼附属器淋巴造血组织增生性疾病是一类比较常见的疾病,其在发病年龄、性别等临床表现和组织学类型上都具有明显的临床病理学特征,掌握这些对临床病理诊断将提供较大的帮助。

仅采用 PCR 进行分子克隆的方法探索

目的：针对目前各种费时且易失败的克隆方法和价格昂贵的试剂盒等问题,对一种仅采用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)分子克隆方法进行了探索。方法利用高保真的 DNA 聚合酶具有3'-核酸外切酶活性的特点,采用 PCR 把载体和插入片段扩增出来,二者的扩增产物先加限制性内切酶 DpnI 后再按一定比例混合来消化甲基化的 DNA 模板,后把DpnI 消化产物直接转化到感受态细胞来得到克隆基因。结果是一种简单、高效、可靠、且仅采用 PCR 的分子克隆方法,并利用此方法成功地把构建在载体 pET 上的α-突触核蛋白全长基因和构建在 pCDNA3.1上的乙酰胆碱受体亚基的全长基因分别重新构建在载体 pGEX-4T-1和 pGEMHE 上。结论在 PCR 扩增时能够通过引物设计来确定克隆位点,所以该方法可以把任何 DNA片段插入到质粒载体内的任何位置,而不需要考虑载体多克隆位点限制的问题。此外,该方法省去了传统的酶切消化、纯化回收和连接过程。

社区高胆固醇血症患者的膳食评价

目的：应用中国膳食平衡指数(diet quality index-07,DBI-07)综合评价社区高胆固醇血症人群的膳食质量,了解该人群的膳食质量,为社区膳食干预、提高治疗效果及预防提供科学依据。方法抽取北京市3个社区的150名高胆固醇血症患者进行基本资料及膳食频率的调查,采用 DBI-07的评分及评价方法评价调查对象的膳食质量。结果社区高胆固醇血症患者的膳食总能量摄入量为(1973.86±602.93) kcal/ d,蛋白质摄入量为(64.40±23.99) g/ d,食用油及食用盐的摄入分别为(35.57±13.90)g/ d 和(8.82±2.93)g/ d。结论与中国居民膳食指南相比,社区高胆固醇血症患者的膳食结构有待改善,以利于血脂的膳食控制。

T 管至胆管支架移位一例并文献复习

随着内镜逆行性胰胆管造影术( endoscopic retrograde cholangio-pancreatography,ERCP)技术的发展,胰胆管支架被逐步应用于胰胆管疾病的治疗。其中极少部分会出现支架移位,但一旦发生处理比较麻烦。首都医科大学附属北京友谊医院收治1例胆囊切除及胆总管切开取石 T 管引流术后胆管狭窄患者,先后3次入本院,现结合文献分析报告如下。

阿尔茨海默病研究路上的斗士记首都医科大学宣武医院盛树力教授

在我国阿尔茨海默病的研究领域中，有一位赫赫有名的研究者，他治学严谨、精益求精，是同行们眼里德高望重的科学家；他教书育人、言传身教，是年轻人心中和蔼可亲的老前辈，他就是年近八旬高龄的盛树力教授。

两种碘化丙啶染色 DNA 定量方法检测 HL-60细胞凋亡结果的比较

碘化丙啶(propidium iodide,PI)是插入性核酸染料,直接插入双链核酸的2个碱基对之间,每5个碱基插入1个荧光分子,与核酸的结合均匀、稳定。细胞经过 RNA 酶处理后,PI 可以与细胞内 DNA 特异性结合,在流式细胞仪上经488 nm 激光激发,发出峰值610~620 nm 的荧光,可以准确的反映细胞群体中DNA 含量的分布情况,适用于 DNA 定量检测。根据细胞周期中不同时项 DNA 的变化来检测细胞周期中DNA 合成前期( G0/ G1期)、 DNA 合成期( S 期)与DNA 合成后期(G2期)各时项的细胞比例。因为 PI是适用于所有流式细胞仪的染料,这一染色技术在临床肿瘤诊断和医学科研中被普遍的采用,常规使用的染色方法是包括固定、RNA 酶处理、PI 饱和染色3个关键步骤的3步法 PI 染色技术[1]。在一些研究中,当细胞在生理或病理条件下发生了凋亡,DNA 损伤,细胞内 DNA 降低,也可以采用3步法 PI 染色检测亚 G1峰(也称作凋亡峰),用于凋亡细胞比例和特征的分析[2]。但是在实际应用中,由于凋亡时相的不同,当凋亡细胞中 DNA 损伤部分没有完全脱出细胞时,往往检测不到明确可辨的亚 G1峰,敏感度较低。作为细胞凋亡检测的经典方法之一的彗星检测[3],以细胞在电泳移动中 DNA 的迁移形态作为凋亡的特征指标,此技术中比较关键的一步即采用碱性高渗试剂使凋亡细胞中断裂的 DNA 碎片脱出细胞,从而在电泳迁移中呈现出彗星尾样的拖痕,本课题组利用类似方法,用高渗缓冲液作用于固定后的悬浮细胞,使凋亡细胞内断裂 DNA 较彻底的脱出细胞外,再进行 DNA定量检测,提高对细胞凋亡的识别度和敏感性[4]。

首都医科大学胸外科学系简介

首都医科大学胸外科学系建立于2013年12月，学系以首都医科大学附属北京胸科医院为挂靠单位，整合宣武医院、附属北京朝阳医院、附属北京安贞医院、附属北京儿童医院、附属北京友谊医院、附属北京同仁医院、附属北京天坛医院、附属北京中医医院、附属北京世纪坛医院、电力教学医院、丰台教学医院、潞河教学医院、密云教学医院、大兴教学医院、平谷教学医院、良乡教学医院、怀柔教学医院、北京海淀医院的丰富资源组成。第一届系务委员共21人，主任委员许绍发，副主任委员支修益、李辉、区颂雷、曾骐、刘志东。第一届学术委员会委员共19人，主任委员为赫捷院士。

登革病毒和登革热

登革热(Dengue fever,DF)是由登革病毒(Dengue virus,DV)引起的一种虫媒传染病,主要在热带亚热带地区流行,全世界将近一半的人口有罹患 DF 的风险。 DF 在临床上分为 DF 和重症登革( severe Dengue),后者包括登革出血热( Dengue hemorrhagic fever,DHF)和登革休克综合征(Dengue shock syndrome,DSS)。每年重症登革病例达500000例,其中大多数患者为儿童。2014年 DF 在我国的南方地区出现历史上严重的疫情,对人类健康和社会经济造成了严重损失。为此,本文对 DV 和DF 的概况作一综述,供广大同行参考。

siRNA 干扰 TRIM29基因对人肺癌 NCI-H520细胞株增生及迁移能力的影响

目的：探讨 TRIM29基因沉默对肺癌细胞株 NCI-H520增生和迁移能力的影响。方法将针对 TRIM29的 siRNA 导入NCI-H520细胞,用 real time PCR 和 Western blotting 法分析 TRIM29基因及蛋白表达情况,MTT 法和 Transwell 小室法检测其增生、迁移能力。结果 NCI-H520细胞转染48 h 后,与空白组及对照组相比,TRIM29 siRNA 转染组 TRIM29 mRNA 和蛋白表达均明显下调,细胞生长明显减慢,细胞迁移能力下降。结论 siRNA 干扰下调 TRIM29基因表达能抑制肺癌细胞 NCI-H520的增生和迁移能力。

术前血清癌胚抗原质量浓度对非小细胞肺癌患者预后作用的 Meta 分析

目的：分析术前血清癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)质量浓度对非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)的预后价值。方法检索截至2014年6月1日数据库相关研究文献,针对术前血清 CEA 质量浓度与 NSCLC 患者生存关系进行定量评估并符合条件的文献行 meta 分析,汇总生存数据并行定量分析。结果共有16个研究(n =4296)评估 NSCLC患者中术前 CEA 质量浓度与患者的生存。组合风险比(hazard ratio,HR)提示 NSCLC 患者中,术前血清 CEA 过表达与总生存期不良预后相关(HR=2.28,95% CI：2.2~2.31)。同时对于病理分期为Ⅰ期的 NSCLC 患者,风险比是1.98(95% CI：1.73~2.15)。患者资料进行分层分析后结果显示亚洲和非亚洲患者中显著风险相关。然而,在所有研究中发现存在显著的异质性。结论术前血清 CEA 的高表达提示 NSCLC 患者预后不良。

白细胞介素-8-251T/A基因多态性和肺癌易感性的 Meta 分析

目的：本研究对白细胞介素-8-251 T/ A(interleukin-8-251 T/ A,IL-8-251 T/ A)(rs4073)与肺癌发生风险相关性文献进行Meta 分析来评价两者相关性特征。方法检索2013年12月1日之前 PubMed 中白细胞介素-8-251 T/ A(interleukin-8-251 T/ A, IL-8-251T/ A)(rs4073)基因多态性与肺癌发生风险相关性病例对照研究的文献。应用 Stata11.0软件合并计算 A/ A 纯合子和携带 A 等位基因( T/ A + A/ A)杂合子与野生型 T/ T 纯合子肺癌发生的比值比( odds ratios,OR)及95%置信区间( confidence intervals,CI),并按照亚裔与非亚裔人群进行亚组分析,评价 IL-8-251T/ A(rs4073)不同基因亚型与肺癌发生的相关性及与不同种族肺癌发生的相关性。结果共有6篇文献符合纳入标准。合并计算所有纳入文献中的 IL-8-251T/ A(rs4073)A/ A 纯合子和携带 A 等位基因(T/ A+A/ A)杂合子与野生型 T/ T 纯合子肺癌发生的 OR 值,肺癌组3265例 OR =1.03(95% CI =0.92~1.14,异质性 P=0.235),对照组3607例 OR=1.07(95% CI=0.96~1.19,异质性 P=0.245),IL-8-251T/ A(rs4073)基因多态性与肺癌发生无相关性。当按亚裔与非亚裔人群进行亚组分析后,发现亚裔人群中携带 A 等位基因(T/ A+A/ A)杂合子(OR =1.48,95%CI=1.04~2.11,异质性 P=0.030)和 A/ A 纯合子(OR=1.35,95% CI=1.02~1.92,异质性 P=0.090)与 T/ T 纯合子肺癌发生风险有着显著的相关性。结论 IL-8-251T/ A(rs4073)基因多态性在全部人群中与肺癌发生风险无相关性,但是在亚裔人群中 A 等位基因的存在与肺癌发生显著相关。

漏斗胸术前 CT 肺容量测算结果与肺功能检查结果的相关性分析

目的：通过对比 CT 的肺容量测算结果与常规肺功能检查结果之间的相关性,评估 CT 测量肺容量法的可靠性和临床意义。方法选取首都医科大学附属北京儿童医院胸外科入院治疗的共计49例漏斗胸患者,术前行肺功能检查和 CT 检查。应用手绘-分层测量求和法测量患者肺容量并计算其与预计值之间比例。将结果与患者常规肺功能结果进行对比。结果基于CT 肺容量结果平均值低于肺功能检查结果,但与常规肺功能结果的相关性具有统计学意义：大肺活量(maximal ventilatory capacity, VCmax)(P<0.001)、用力肺活量(forced vital capacity,FVC)(P<0.001)、肺总量(total lung capacity,TLC)(P<0.001)；基于 CT 的肺容量实测值/预计值比例与肺功能结果相关性均有统计学意义： VCmax%(P<0.001)、FVC%(P<0.001)、TLC%(P<0.001)。结论 CT 测算的肺容积结果与常规肺功能结果高度相关,CT 肺容积测算法可作为临床评估漏斗胸患者肺脏容积的一种有效方法。

亚肺叶切除治疗早期非小细胞肺癌

亚肺叶切除包括肺段切除和楔形切除，可用于部分高度选择的早期非小细胞肺癌。亚肺叶切除可以保存更多的肺功能，提高手术后生活质量。但存在肿瘤切除不彻底，增加手术后局部复发的风险。越来越多的证据显示，对于满足以下条件的非小细胞肺癌：IA 期未发生淋巴结转移；肿瘤大径≤2 cm；位于肺外周；尤其是没有实性成分的毛玻璃样结节，亚肺叶切除取得了和肺叶切除类似的治疗效果。目前的证据多来自回顾性临床研究，大规模的临床研究正在进行，已明确亚肺叶切除的确切疗效，在高等级的证据出现之前，肺叶切除术仍被认为是早期非小细胞肺癌的标准术式。

紫杉醇-顺铂联合药物控释系统对肺腺癌细胞系 A549细胞生长的抑制作用

目的：观察以聚碳酸亚丙酯乳液作为纺丝液，采用静电纺丝技术，负载紫杉醇和顺铂制备的载药纤维控释系统对体外培养的肺腺癌细胞系 A549的抑制率，为进一步的动物实验奠定基础，并探讨用于肺癌治疗的可行性。方法体外培养肺腺癌细胞系 A549。分别比较紫杉醇、顺铂和两药联合纤维载药控释系统与其相应的裸药对照组对 A549的抑制率。肿瘤细胞生长抑制率测定采用酶标仪测定吸光度(490 nm 波长)。药物对肿瘤细胞抑制率=(对照组吸光度-实验组吸光度值)/对照组吸光度。结果紫杉醇单药、顺铂单药和两药联合的载药纤维控释系统对肺癌细胞 A549的生长的抑制率均强于相应的裸药组。顺铂单药和两药联合的载药纤维控释系统的肿瘤细胞抑制率随药物浓度的增加而呈明显的上升趋势。结论聚碳酸亚丙酯负载紫杉醇和/或顺铂静电纺丝制备控释给药系统可显著抑制体外培养的肺腺癌细胞系 A549的生长。该给药系统有望实现抗癌药物解剖靶向控释给药。

肺移植冷缺血时间与支气管吻合口狭窄的相关性研究

目的：肺移植供体冷缺血时间与术后支气管吻合口狭窄的相关性有待进一步研究,回顾总结肺移植供体冷缺血时间对术后支气管吻合口狭窄发生率的影响,改善手术效果及患者预后。方法回顾分析2009年至2012年首都医科大学附属北京朝阳医院22例患者生存期>1年的肺移植手术供体冷缺血时间和受者术后支气管镜检查报告,根据供肺冷缺血时间所有受者分为冷缺血时间<6 h 组和>6 h 组。进一步分析冷缺血时间>6 h 对术后支气管吻合口狭窄发生率的影响。结果22例肺移植患者中,供肺冷缺血时间>6 h 组支气管吻合口狭窄发生率要高于<6 h 组(P=0.003),2组其他各指标比较,差异均无统计学意义。结论提示严格控制供肺冷缺血时间可以有效防止移植术后支气管吻合口狭窄的发生,从而提高肺移植成功率,改善患者生存情况。

不同剂量 MOG35-55对 EAE 小鼠 p-JAK1、BDNF 表达的影响

目的：比较不同剂量髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55(myelin oligodendrocyte glycoprotein 35-55,MOG35-55)多肽片段免疫诱导 C57BL/6小鼠实验性变态反应性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)其磷酸化酪氨酸蛋白激酶1(phospho-Janus kinase 1,p-JAK1),脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)表达的变化。方法将 C57BL/6小鼠采用数字表法随机分为对照组、MOG35-5550μg(MOG-50)组和 MOG35-55200μg(MOG-200)组。 EAE 小鼠分别以每只动物50μg 或200μg MOG35-55的抗原皮下多点注射诱导造模,对照组乳剂中不含 MOG35-55。观察各组小鼠的发病率、病死率、体质量、神经功能评分的变化。并用 Western blotting 法检测酪氨酸蛋白激酶1(Janus kinase 1,JAK1)及 p-JAK1在皮质中的表达情况；免疫组织化学染色的方法检测 BDNF 在皮质中的表达情况。结果 MOG35-5550μg 和200μg 均能成功诱导 EAE 模型,并增强 p-JAK1的表达,减少 BDNF 的表达。其中 MOG-200组在体质量减轻、神经功能评分及 p-JAK1表达方面较 MOG-50组作用明显,且与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论 MOG-200组 p-JAK1、BDNF 变化明显,可以作为研究药物干预作用的理想模型。

二苯乙烯苷对 PD 模型小鼠干预作用的观察及机制初探

目的：观察二苯乙烯苷(tetrahydroxystilbene glucoside,TSG)对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine,MPTP)拟帕金森病(Parkinson's disease,PD)模型小鼠行为学及多巴胺能神经元的影响。方法 C57BL小鼠按数字表法随机分为对照组、模型组、TSG 小剂量组(TSG 60 mg/ kg)和 TSG 大剂量组(TSG 120 mg/ kg)。 MPTP 30 mg/ kg 腹腔注射5 d 建立拟 PD 小鼠模型。采用爬杆实验、转棒实验和自主活动实验测试小鼠行为学变化。免疫组织化学法检测各组小鼠黑质处酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)阳性细胞的表达情况。高效液相色谱电化学检测法测定小鼠纹状体内多巴胺及其代谢产物的含量。结果与对照组相比,MPTP 模型组小鼠爬杆时间显著延长,在转棒上的停留时间明显缩短,自主活动数减少,脑黑质处 TH 阳性细胞数量显著减少,纹状体内多巴胺及其代谢产物含量显著降低。与模型组小鼠相比,TSG 用药组小鼠运动协调性显著增强,脑黑质处 TH 阳性细胞数量增加,纹状体内多巴胺含量升高。结论 TSG 可改善 MPTP 模型小鼠的行为学,保护黑质多巴胺能神经元。 TSG 可能具有潜在的防治 PD 的作用。

大鼠慢性脑缺血认知、情绪及小胶质细胞的变化

目的：利用大鼠双侧颈总动脉永久性结扎(permanent,bilateral common carotid artery occlusion,BCCA)方法制作慢性脑缺血模型,观察42 d 与56 d 两时间点在认知、情绪、组织状态的差异及小胶质细胞状态改变,在模型制作时间上为慢性脑缺血实验研究提供依据。方法雄性 SD 大鼠采用抽签法随机分为42 d-假手术组(42 d-Sham)、42 d-模型组(42 d-Model)、56 d-假手术组(56 d-Sham)及56 d-模型组(56 d-Model)。采用 Morris 水迷宫、新旧物体识别和旷场试验3种方法评价大鼠认知能力和情绪, HE 染色观察大鼠海马组织状态改变,用脑组织冰冻切片 Iba1免疫荧光染色观察各组海马及皮质小胶质细胞的活化状态。结果Morris 水迷宫试验结果显示,与 Sham 组相比,Model 组大鼠出现认知障碍,56 d 较42 d 下降更为显著,表现为逃避潜伏期延长,穿越平台次数减少。新旧物体识别试验结果表明,Model 组大鼠认知能力下降,表现为新旧物体分辨指数下降,新物体探索时间减少,但42 d 与56 d 手术组及 Sham 组之间差异无统计学意义。旷场试验结果提示,Model 组大鼠出现焦虑样行为,表现为直立次数和穿格次数明显增多。 HE 染色结果提示 BCCA 模型42 d 及56 d 在双侧海马均未出现明显的组织状态改变。免疫荧光结果显示,Iba1的表达在 Model 组与 Sham 组差异有统计学意义,Model 组海马与皮质中小胶质细胞数量均较多,染色加深,胞体增大,突起增多、变短,呈“阿米巴样”。结论 BCCA 法制作的大鼠慢性脑缺血模型42 d 即出现认知能力下降,小胶质细胞出现活化改变,提示42 d 即可作为慢性脑缺血动物实验模型制作的备选时间点。56 d 较42 d 认知能力下降更为显著,提示随时间延长,改变更为显著。但42 d 及56 d 均未出现 HE 染色可观察到的组织状态学改变。

热量限制对 C57小鼠学习记忆能力及胰岛素信号通路相关蛋白的影响

目的：探讨热量限制(caloric restriction,CR)对 C57小鼠学习、记忆能力及胰岛素信号通路相关蛋白的影响。方法雄性 C57小鼠30只,采用数字表法随机分为3组：正常对照组(n=10)、高能量组(n=10)、低能量组(n=10)。6个月后通过 Morris水迷宫检测各组小鼠的学习、记忆能力,每组各抽取5只应用免疫组织化学染色的方法,测定小鼠脑内胰岛素信号转导通路相关蛋白：依赖于烟酰胺腺嘌呤二核苷酸的组蛋白脱乙酰酶(silent mating type information regulation 2 homolog-1,SIRT1)、胰岛素样生长因子-1(insulin-like growth factor 1,IGF-1)、胰岛素受体(insulin receptor,IR)、胰岛素受体底物-1(insulin receptor substrate-1,IRS-1)、磷脂肌醇3激酶( phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)、蛋白激酶 B( protein kinase B,Akt/ PKB)、磷酸化应答原件结合蛋白(cAMP-response element binding protein,p-CREB)的表达。结果低能组小鼠的逃避潜伏期缩短,表明学习和记忆能力较前增高, SIRT1、IGF-1、IR、IRS-1、PI3K、Akt/ PKB、p-CREB 表达均明显降低(P<0.01)。结论热量饮食提高 C57小鼠的学习记忆能力,可能与降低小鼠脑内胰岛素信号通路相关蛋白的表达有关。

局部血管内低剂量促红细胞生成素和联合 tPA 注射对大鼠脑缺血的影响

目的：探讨局部血管内低剂量促红细胞生成素( erythropoietin,EPO)联合组织纤溶酶原激活剂( tissue plasminogen activator,tPA)注射是否可以降低 tPA 单独应用时的不良反应及机制。方法成年雄性 Sprague-Dawley 大鼠进行大脑中动脉闭塞手术,将健康雄性 SD 大鼠按数字表法随机分为5组,每组10只,分别缺血2 h 和4 h,再灌注30 min 后通过大脑中动脉单独注射 tPA,或联合注射 EPO(800 IU/ kg)及 tPA。结果局部血管内低剂量 EPO 联合 tPA 注射可以减小大鼠脑缺血再灌注24 h 后的病死率、改善神经功能、减少脑水肿和脑出血,并且没有产生血液学不良反应。局部血管内低剂量 EPO 联合 tPA 注射组与0.9%(质量分数)氯化钠注射液联合 tPA 注射组比较,p-AKT 和 p-ERK 的表达水平明显升高。结论大鼠脑缺血后,局部血管内低剂量 EPO 和 tPA 联合使用,可减少 tPA 单独使用时的不良反应,并发挥 EPO 的神经保护作用,可能与 AKT 和 ERK 通路激活有关。

阿尔茨海默病发生机制的研究进展

阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD),又称老年性痴呆,是一种神经系统退行性疾病,是痴呆中常见的类型,在老年人中发病率越来越高,临床上主要表现为渐进性记忆减退、认知功能障碍以及其他神经精神症状和行为障碍。阿尔茨海默病的病因尚未明确,发病机制十分复杂,本文就阿尔茨海默病发生机制的研究进展作一简要综述。

胃肠动力药西沙比利对表达于 HEK293细胞的人 ether-a-go-go相关基因2通道的影响

目的：研究胃肠动力药西沙比利对于在 HEK293细胞异源性表达的人 ether-a-go-go 相关基因2(human ether-a-go-go related gene 2,hERG2)通道性质的影响。方法用 Lipofectamine 2000将 hERG2(AF311913)瞬时转染至 HEK293细胞,使其表达hERG2通道,利用全细胞膜片钳技术记录 hERG2电流。加入西沙比利(终浓度分别为0.001,0.01,0.1,1.0,10.0μmol/ L),分别记录加药前和加药后2~8 min 的 hERG2电流,分析西沙比利浓度和作用时间对此通道电流的影响。结果西沙比利各浓度实验组中,hERG2时间依赖性电流和尾电流幅度均下降。在去极化电压为+20 mV 时,随西沙比利浓度升高,电流抑制率逐渐增加。西沙比利的抑制作用随时间延长逐渐增强,西沙比利浓度为1μmol/ L 时,电流在8 min 内完全消失。结论西沙比利对HEK293细胞表达的 hERG2通道的时间依赖性电流和尾电流均有抑制作用,该抑制作用具有浓度依赖性和时间依赖性,即浓度越高,时间越长,抑制效果越明显,直至电流降低至稳态或消失。

一例 Kallmann 综合征患者双基因突变分析

目的：分析 Kallmann 综合征( Kallmann syndrome, KS)患者 KS1( Kallmann syndrome 1, KAL1),前动力蛋白2(prokineticin 2,PROK2)和前动力蛋白受体2(prokineticin receptor 2,PROKR2)3个基因的突变情况。方法①采用放射免疫分析法检测激素水平,超声扫描评估腹部结构,脑部磁共振成像(magnetic resonance imaging,MRI)检测嗅球、脑沟和内耳的结构。②运用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR),结合 PCR 产物直接测序技术分析 KAL1、PROK2和 PROKR23个基因外显子突变。③分别利用 SIFT、Polyphen 和 Mutation Taster 3种生物信息学平台进行了错义位点和多态性位点的功能分析。结果①患者青春期发育不良,嗅觉减退,其父母无症状。②在患者基因组中找到2个 KAL1杂合突变位点(Ile 565 Thr 和 Ser 570 Thr),5个 KAL1基因单核苷酸多态性位点(single nucleotide polymorphism,SNP)：Val 534 Ile、Val 560 Phe、Gly 567 Ser、Lys 666 Met和 Agr 668 His,以及一个 PROKR2纯合突变位点(Tyr 113 His)。同时也在患者父母基因组中检测到 PROKR2杂合突变位点(Y113H)。③生物信息学分析结果显示 I565T、S570T 和 Y113H(PROKR2)3个位点可能是该患者的致病基因位点。结论这2个新的突变位点还未在中国人群中报道过,这也是国内报道的第1例同时带有2个 KAL1突变和一个 PROKR2突变的 KS 患者,表明该患者可能是一个双基因遗传的 KS 患者。

ACE2/Ang-（1-7）改善肝细胞糖代谢

目的：肾素-血管紧张素系统(rennin-angiotensin system,RAS)参与糖代谢。血管紧张素转换酶2( angiotensin converting enzyme 2,ACE2)-血管紧张素(1-7)﹝Ang-(1-7)﹞-Ang-(1-7)受体(MAS)是新发现的 RAS 调节轴,可拮抗经典轴的生物效应。本文研究 ACE2/ Ang-(1-7)在肝脏糖代谢中的作用。方法①利用 Ang-(1-7)及 MAS 拮抗剂(A779)干预 HepG2细胞,或 ACE2过表达载体转染人肝细胞株 HepG2；②实时荧光定量 PCR(real-time PCR,RT-PCR )检测糖代谢相关基因和氧化应激相关基因表达；③流式细胞仪检测活性氧( reactive oxygen species,ROS)浓度；④蛋白质印迹( Western blotting)法检测还原型辅酶 II (NADPH)相关亚基的表达。结果① ACE2过表达细胞中,糖异生相关基因磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(phosphoenolpyruvate carboxykinase,PEPCK)的表达水平显著降低,而葡萄糖-6-磷酸激酶(glucose-6-phosphatase,G6Pase)与对照组相比差异无统计学意义；②葡萄糖转运蛋白2(glucose transporter type 2,Glut2)、胰岛素受体底物2(insulin receptor substrate,IRS-2)和腺苷酸活化蛋白激酶α亚基2﹝adenosine 5'-monophosphate(AMP)-activated protein kinase,AMPKα2﹞的表达水平显著增高,而细胞因子信号抑制因子-3(suppressor of cytokine signaling-3,SOCS-3)与对照组相比,表达量显著降低；③ Ang-(1-7)降低 HepG2细胞内和细胞外ROS 的浓度；④ Ang-(1-7)降低 NADPH 亚基 p67和 p22的表达；ACE2过表达,也能显著降低 HepG2细胞中 p22和 p47的表达,同时,ACE2对氧化应激的保护作用能被 A779抑制。结论 ACE2改善肝脏糖代谢,其机制可能与 ACE2/ Ang-(1-7)对肝脏氧化应激的保护作用有关。

首都医科大学学报2014年第35卷总目次