北京大学学报（医学版）杂志
Journal of Peking University(Health Sciences) 북경대학학보（의학판）
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抗胃癌鼠单抗3H11 scFv的包含体表达及柱上在位复性
目的:在大肠杆菌高效表达抗胃癌单抗3H0011的scFv.方法:利用PCR技术将3H11 scFv基因从分泌型表达载体转移至高效表达载体,获得3H11 scFv包含体的表达,经超声裂解、洗涤、变性后,尝试透析复性和凝胶过滤色谱柱上在位复性,结果:透析复性未能得到有活性的3H11 scFv,而柱上在位复性效果良好,获得有功能性的3H11 scFv.结论:成功进行了3H11 scFv的柱上复性,不同scFv在表达和复性中显示出明显差异,在基因工程抗体研制中值得注意.
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中国人正常合牙齿位置和形态
目的:为适用于中国人的直丝弓矫治器提供基础数据.方法:用三维测量仪及其计算机辅助系统,对67名正常中国人的牙齿进行了三维精密测量.结果:与白种人相比,中国人上切牙和上、下尖牙转矩角较大,上、下切牙和上、下尖牙轴倾角较小,上中侧切牙间冠凸距相差较小,上、下尖牙及上下第一磨牙与其近中邻牙之间的冠凸距相差较大,下第一磨牙补偿角为负值.结论:正常牙齿位置与形态具有种族特征,在我国正畸临床中,应发展适于中国人的直丝弓矫治器.
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改良腹腔内静脉转流管用于驮式肝移植的实验研究
目的:研究自制转流管在动物背驮式肝移植中的转流效果.方法:16只狗中8只为供体,另8只行原位背驮式肝移植,用涂有聚氨酯的乳胶管实现门静脉及下腔静脉血的转流,监测循环及肠管瘀血情况,取出转流管后观察有无凝血块.结果:手术均能完成,历时3～5 h.插管过程无出血,肠管无瘀血.无转流管原因引起的循环不稳.涂层内侧无凝血块.转流管接口及尖端涂层有破裂,与乳胶管之间有少量血凝块.结论:自制转流管抗凝效果良好,满足动物实验的转流要求.但涂层与乳胶管粘和不牢,破裂后血液进入形成凝块.
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卵巢癌抗独特型单链抗体诱导特异性体液免疫应答的动物实验研究
目的:用卵巢癌抗独特型单链抗体6B11 scFv代替肿瘤抗原免疫动物,观察是否诱导动物产生特异性体液免疫反应.方法:将6B11 scFv交联钥孔虫戚虫血蓝素,辅以弗氏佐剂反复免疫BALB/c小鼠,制备抗血清.采用间接法ELISA,竞争抑制ELISA及免疫流式细胞法分析抗血清特性.结果:经ELISA检测显示,由6B11 scFv刺激产生的抗-抗独特型单链抗体(Ab3)能与6B11 scFv和卵巢癌组织抗原OC166-9特异性结合.竞争抑制ELISA表明,Ab3能有效抑制卵巢癌单抗COC166-9(Ab1)与OC166-9的特异性结合.免疫流式分析结果可见, Ab3能与表达卵巢癌抗原的人卵巢癌细胞系OV1细胞表面结合而不能与无卵巢癌抗原表达的人宫颈癌细胞系HeLa细胞表面结合.从以上结果可以证明Ab3与Ab1的抗原结合特性相同.结论:6B11 scFv能代替卵巢癌抗原诱导动物产生特异性体液免疫反应,具有模拟抗原的作用,为6B11 scFv作为卵巢癌抗独特型单链抗体疫苗的实际应用提供依据.
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抗血管内皮细胞生长因子受体单抗的制备及鉴定
目的:制备血管内皮细胞生长因子受体(kinase insert domain containing receptor, KDR)的单克隆抗体并鉴定其特异性.方法:在大肠杆菌中表达重组KDR融合蛋白.融合蛋白经凝胶分离纯化后免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞,用传统杂交瘤技术与小鼠骨髓瘤细胞融合及次黄嘌呤、氨基喋呤与胸苷选择性培养.单克隆杂交瘤上清经ELISA双筛和S-P免疫组化筛选并鉴定其亚类.结果:经ELISA双筛和组化筛选获得了一株能稳定分泌人KDR单克隆抗体的杂交瘤细胞株(命名为SSW2),其分泌抗体亚类为IgG1,产生的腹水效价可达1×10-6.结论:SSW2同血管内皮细胞尤其是肿瘤组织的血管内皮细胞有较强的阳性反应.
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抗人卵巢癌单域噬菌体抗体的表达
目的:制备抗人卵巢癌单克隆抗体COC183-B2单域(重链可变区,VH)抗体,以用于卵巢癌放射免疫显像和导向治疗.方法:将已分离的VH基因克隆入噬菌粒表达载体pFUW80中,将重组子转化琥珀突变抑制菌株XL1-BLue,经辅助噬菌体M13 K07援救后包装成噬菌体颗粒,表达产物通过ELISA测定活性.结果:VH基因克隆入噬菌粒pFUW80,双酶切鉴定见预期大小片段,表明克隆成功.表达产物经ELISA测定,待测值高出阴性对照2.5倍.结论:该抗人卵巢癌小分子单域抗体具有与相应卵巢癌抗原发生特异结合的能力,有望用于卵巢癌放射免疫显像和导向治疗.
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邻苯二甲酸酐哮喘大鼠模型制备及其肺组织中细胞间粘附分子-1 mRNA的表达
目的:制备邻苯二甲酸酐(phthalic anhydride, PA)大鼠哮喘模型,探讨细胞间粘附分子-1(intercellular adhesion molecule-1, ICAM-1)与PA哮喘气道炎症的关系.方法:用PA免疫大鼠制备哮喘模型,观察哮喘大鼠支气管肺泡灌洗液中炎性细胞的变化及支气管肺组织的病理改变;用Northern杂交方法检测哮喘大鼠肺组织ICAM-1 mRNA的表达.结果:哮喘大鼠支气管肺泡灌洗液中炎性细胞数较对照组显著增加,支气管肺组织炎性细胞浸润程度较对照组增加,支气管粘膜皱缩加重;哮喘大鼠肺组织ICAM-1 mRNA 比对照组表达增高,表达量与炎性细胞的改变呈显著正相关.结论:哮喘大鼠肺组织ICAM-1 mRNA表达量的增高不仅与哮喘气道炎症的发生有关,还与哮喘气道炎性细胞浸润的严重程度有密切关系.
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氧流量对异氟烷的消耗与摄取的影响
目的:探讨不同氧流量对异氟烷的消耗量和体内摄取的影响.方法:24例异氟烷全身麻醉的病人,按新鲜氧流量不同随机分为3组.氧流量分别为2.0、1.0和0.3 L*min-1.以微量泵向呼吸环路吸入远端输入异氟烷,调节输入速度使肺泡异氟烷浓度维持在低肺泡有效浓度的1.1倍.监测异氟烷吸入及呼出体积分数,以吸-呼体积分数差作为摄取指标,观察异氟烷的消耗量及体内摄取量的变化.结果:异氟烷的消耗量随氧流量的增大而明显增加;体内摄取量各组间差异无显著性.结论:在维持相同低肺泡有效浓度时,异氟烷的消耗量随着新鲜氧流量的增加而增加;体内对异氟烷的摄取量与新鲜氧流量的大小无关.
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光敏树脂比色板的色度学研究
目的:评价附属比色板与实际光敏树脂材料色度的吻合程度.方法:收集了4种光敏树脂,将其制成圆形试件和比色板,分别测取圆形试件、自制比色板与附属比色板的色度值,计算三者间的色度差异.结果:附属比色板与相应的材料间存在明显的色度差异,远远超过肉眼的识别阈.结论:使用附属比色板可能导致临床比色失误,用同批号树脂自制比色板是解决问题的有效方法;Z100附属比色板与树脂色度吻合良好.
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掌叶大黄发根及愈伤组织、悬浮细胞中蒽醌类成分的比较研究
目的:比较Ri质粒转化的掌叶大黄发根与愈伤组织、悬浮细胞以及掌叶大黄生药中游离蒽醌成分的含量.方法:用发根农杆菌Agrobacterium rhizogenes 9402 野生型菌株感染掌叶大黄外植体以诱导发根,建立发根离体培养系,用Southern blot鉴定发根;分别诱导掌叶大黄愈伤组织和悬浮细胞;用高效液相色谱法测定发根、愈伤组织、悬浮培养细胞以及掌叶大黄生药中芦荟大黄素等游离蒽醌化合物的质量含量.结果:从子叶柄上诱导出了发根,并建立了培养体系;Southern杂交结果证明Ri质粒T-DNA转移并整合到植物细胞基因组中;用叶片作外植体诱导出了愈伤组织;悬浮培养细胞用叶片、叶柄外植体诱导的愈伤经液体培养获得;掌叶大黄发根中各种游离蒽醌化合物含量普遍高于愈伤组织,但低于生药和悬浮培养细胞.结论:用掌叶大黄发根培养物生产蒽醌化合物是一条值得探索的新途径.
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腺病毒和腺伴随病毒基因元件提高白细胞介素-6在真核细胞中的表达效率
目的:构建高效真核表达载体以提高细胞因子在真核细胞中的表达效率.方法:利用基因克隆技术构建了两个新的白细胞介素-6(IL-6)真核表达载体pAdCIIL-6和P335ciil-6.将它们瞬时转染COS-7细胞后,利用IL-6依赖株7TD1对上清中的IL-6进行检测.结果:两种新建载体分别能提高IL-6在真核细胞中的表达效率5.5和3.4倍.结论:腺病毒的病毒相关Ⅰ和ⅡRNA(virus-associated Ⅰand ⅡRNA, VAⅠand VAⅡ)和腺伴随病毒(adeno associated virus, AAV) 的倒转末端重复序列(inverted terminal repeat, ITR)能提高细胞因子在真核细胞中的表达.
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胎膜早破时粒细胞集落刺激因子测定的临床意义
目的:了解胎膜早破时测定粒细胞集落刺激因子(granulocyte colony-stimulating factor, G-CSF)的临床意义.方法:测定64例胎膜早破产妇在分娩时母血清及脐血清的G-CSF和C-反应蛋白(c-reacting protein, CRP)水平,同时以64例正常产妇做对照.结果:观察组母及脐血清G-CSF阳性分别为10和12例,较对照组4和5例增高,P＜0.05;血清G-CSF和CRP都异常或脐血清任何一项测定异常时,75%～100%新生儿发病;观察组与对照组分别有26与16例新生儿发病,P＜0.05.结论:胎膜早破时测定G-CSF对预测新生儿的发病有一定的临床价值.
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Tet-On基因表达系统定量调节荧光素酶基因在CHO细胞中的表达
目的:应用Tet-On基因表达系统建立CHO-Tet-On细胞株,通过强力霉素(Dox)调节荧光素酶基因的表达.方法:pTet-On质粒转染CHO细胞株,经 G418筛选,得到稳定表达株CHO-Tet-On.pTRE-Luc质粒瞬时转染CHO-Tet-On 克隆1至30,培养基中加入2 mg*L-1 Dox或不加Dox,培养72 h后检测荧光素酶活性.结果:克隆18、28、29当培养基中加入Dox(即"On"状态)时荧光素酶活性高,当培养基中不加Dox(即"Off"状态)时荧光素酶活性低,故选择克隆18、28、29作为高表达、低背景的CHO-Tet-On细胞株.结论:CHO-Tet-On细胞株的建立,可利用四环素及其衍生物调节多种外源基因的表达,有效调控基因表达的时间和水平,定量诱导毒性蛋白的表达,增加治疗的疗效和安全性,有望为基因治疗提供一条可控的安全途径.
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bcl-2 mRNA在正常和增生前列腺组织中的表达及意义
目的:探讨bcl-2 mRNA在良性前列腺增生发病过程中所起的作用.方法:采用斑点杂交技术研究正常和增生前列腺组织中bcl-2 mRNA表达情况,并加以比较,同时采用原位杂交技术了解bcl-2 mRNA在增生前列腺中表达.结果:bcl-2 mRNA在增生前列腺组织中表达明显高于在正常前列腺组织中的表达,增生组织中平均表达值是正常组织的(1.71±0.72)倍;原位杂交显示:bcl-2 mRNA主要在前列腺上皮组织中表达,并呈现由基底细胞向表层上皮细胞表达逐渐减弱趋势.结论:bcl-2 mRNA 在增生组织中高表达表明增生前列腺上皮细胞抗凋亡作用强于正常组织,提示bcl-2参与前列腺细胞增殖与凋亡过程,增生前列腺中bcl-2高表达可能是诱发良性前列腺增生的重要病因.
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内毒素对体外培养人角膜基质细胞表达核转录因子NF-κB的影响
目的:探讨角膜基质细胞在内毒素作用下表达核转录因子NF-κB的情况.方法:取体外培养的2～3代人角膜基质细胞,分别加入0.2、1.0、5.0、25 mg*L-1内毒素培养6 h;1.0 mg*L-1内毒素培养1.5、3、6、12、24 h,采用免疫荧光抗体染色,流式细胞仪计数的检测方法,观察NF-κB的表达水平.细胞爬片经免疫荧光染色后摄像.结果:角膜基质细胞NF-κB的基础表达率为9.4%.内毒素作用后,随时间和浓度递增,于6 h和药物质量浓度为5 mg*L-1时高,阳性率分别为21.7%和48.0%,其后下降.用药前,核转录因子分布于细胞浆内.内毒素作用后,细胞浆内NF-κB增多,核内也出现阳性表达.结论:核转录因子NF-κB存在于体外培养的人角膜基质细胞中,能够被内毒素激活,可能是角膜炎症过程中的一种重要调控因素.
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角化脱屑型手足癣的诊断和治疗
目的:寻找更好的方法诊断和治疗角化脱屑型手足癣.方法:对174例临床拟诊为角化脱屑型手足癣的患者采用改良KONCPA法进行真菌学检查,并与KOH法、真菌培养法进行对照.受试患者随机予以伊曲康唑0.2 g,2/d,用7 d(Ⅰ组);0.2 g,2/d,用14 d(Ⅱ组);特比萘芬0.25 g,1/d,用14 d(Ⅲ组);质量分数为0.01的萘替芬霜外用30 d(Ⅳ组)及0.01(质量分数)特比萘芬霜外用30 d(Ⅴ组)进行治疗.结果:KOH法检查真菌阳性率为62.4%,真菌培养法为86.78%,改良KONCPA法为100%(P<0.001).Ⅰ组治愈8例(8/30),有效13例(13/30);Ⅱ组治愈31例(31/51),有效42例(42/51);Ⅲ组治愈22例(22/33),有效32例(32/33);Ⅳ组治愈22例(22/36),有效35例(35/36);Ⅴ组治愈17例(17/24),有效24例(24/24).结论:(1)改良KONCPA法明显优于KOH法与真菌培养法;(2)萘替芬霜或特比萘芬霜可作为首选药;(3)伊曲康唑0.2 g,2/d,14 d疗法明显优于7 d疗法;(4)特比萘芬治疗角化脱屑型手足癣临床疗效优于伊曲康唑.
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国产自体-2000型血液回收机的临床应用
目的:观察自体-2000型血液回收机临床应用效果.方法:用自体-2000型血液回收机对128例患者行外科手术中自体血液回输.并对患者术前血、术中回收血、术后静脉血进行血常规化验及血液生化检验,对回收血做形态观察.结果:128例患者平均每例回收原血1 850 ml,经血液回收机处理后获得浓缩血615 ml,均回输给病人.术后血常规、多项生化检查及血浆电解质检查结果均达到正常水平.除3例因室颤、严重心功能不全死亡(与血液回收机无关)外,其余病人术后恢复顺利,结论:自体-2000型血液回收机能有效减少术中血液的丢失,减少输血后并发症.
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叔丁基羟基茴香醚对双香豆素加强阿霉素毒性的保护作用及其机制
目的:探讨叔丁基羟基茴香醚(BHA)对双香豆素加强阿霉素毒性的保护作用及其抗氧化机制.方法:小鼠随机分为以下各组:正常对照组,双香豆素组,阿霉素组,双香豆素+阿霉素组和BHA+双香豆素+阿霉素组,每组6只.血清醌还原酶(QR)、ALT、LDH和CK催化活性用酶动力学方法测定,肝丙二醛(MDA)含量按硫代巴比妥酸方法测定.结果:经双香豆素处理组血清QR催化活性显著降低.与单给阿霉素组比较,双香豆素能显著增强阿霉素所致的血清ALT、LDH、CK催化活性升高,肝MDA含量也增高 .BHA具有对抗双香豆素所引起的QR催化活性降低的作用,并具有显著降低双香豆素+阿霉素所导致的ALT、LDH、CK及肝MDA含量增高的作用.结论:双香豆素具有加强阿霉素对小鼠毒性的作用,而BHA对双香豆素加强阿霉素毒性则显示出明显保护作用,其机制与BHA增强QR催化活性及抗脂质过氧化作用有关.
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骨髓增生异常综合征112例临床分析
目的:临床研究和分析骨髓增生异常综合征(MDS)112例.方法:总结自1982年10月至1997年10月期间MDS 112例的一般情况、临床和实验室检查特点及治疗.结果:55例(49%)在40岁以下,111例(99.1%)和95例(84%)分别有贫血和全血细胞减少,全部病例骨髓红系有巨幼样变,粒系病态造血达92%,骨髓活检发现不成熟前体细胞异常定位(ALIP)者为39%(14/36),难治性贫血(RA)和难治性贫血伴环状铁粒幼细胞(RAS)型病人用雄性激素治疗后78%(66/85)血红蛋白有提高,而血小板无明显变化,原始细胞增多型难治性贫血、转化中的原始细胞增多型难治性贫血和慢性粒单细胞白血病型病人主要死于急性白血病.结论:骨髓病态造血和ALIP对诊断有重要价值,雄性激素可改善RA和RAS型病人的贫血,但如何防止MDS转化成急性白血病仍需研究.
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肺癌MDM2蛋白表达与p53基因突变的关系
目的:研究肺癌MDM2蛋白表达与p53突变之间的关系.方法:用免疫组化检测125例肺癌p53和MDM2蛋白表达,以聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)方法检测p53基因第5～8外显子的突变.结果:PCR-SSCP检测阳性的52例肺癌MDM2阳性率为19.2%;而阴性的73例肺癌MDM2蛋白阳性率为35.6%.统计学检验显示肺癌MDM2蛋白表达与p53突变之间呈负相关(χ2=3.98,P<0.05);MDM2蛋白阳性与肺癌患者的年龄、性别、肿瘤大小、组织学类型、分化程度、临床分期和p53蛋白表达无显著相关性.结论:MDM2过度表达可能在p53基因没有突变肺癌的发生过程中起重要作用.
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非创伤性修复治疗技术和两种玻璃离子水门汀充填恒磨牙浅龋的评估
目的:观察非创伤性修复治疗(ART)技术和两种玻璃离子水门汀充填恒磨牙浅龋的临床效果.方法:68例患者,152个恒磨牙Ⅰ类洞,9个Ⅱ类洞,用Fuji ⅨGP、Ketac-Molar两种玻璃离子水门汀和GK银汞合金充填龋洞,半年后对3种材料的固位、表面磨耗、边缘折裂、充填体颜色变化以及与自然牙颜色匹配等进行复查和对比评估.结果:两种玻璃离子水门汀充填龋洞后半年未见继发龋和边缘折裂现象;材料颜色变暗,与自然牙颜色匹配性趋向协调,但表面磨耗较银汞合金明显.结论:ART技术和两种玻璃离子水门汀充填恒磨牙浅龋具有较好的临床实用性,但尚需长期观察.
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塑料、烤瓷、类瓷、铸瓷修复体的临床比较研究
目的:探讨目前常用的美学修复材料各自的特点和适应证.方法:对139例患者分别进行的塑料、烤瓷、类瓷和铸瓷的修复各65件,共260件,进行了1年的临床观察和问卷式调查,用卡方数据进行比较处理.结果:塑料修复体在颜色、边缘密合度和基牙牙龈状态方面均逊色于烤瓷、类瓷和铸瓷修复体,差异有极显著性,而烤瓷和类瓷与铸瓷修复体在形态、边缘密合度和基牙牙龈状态方面效果相似,差异均无显著性,但铸瓷修复体的折断率明显高于烤瓷和类瓷者,烤瓷与铸瓷在颜色方面有显著性差异.结论:塑料只能作为暂时固定修复材料,烤瓷、类瓷与铸瓷各有其相应的临床适应证,均有较高的临床修复价值.
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豚鼠内淋巴囊粘膜下层结构研究
目的:了解豚鼠内淋巴囊表面的脉管及其粘膜下层结构对内耳功能的影响.方法:用碳素墨水加0.1 mol*L-1甲醛进行左心室灌注,将豚鼠的颞骨标本用冬青油透明并进行显微检查及透射电镜检查.结果:内淋巴囊表面有非常丰富的血管网,而且与乙状窦有很密切的联系.内淋巴囊周围被毛细血管、微静脉、静脉和个别微动脉形成的一个细密的环状血管网所包绕.毛细血管周围有丰富的淋巴窦.毛细血管与淋巴窦构成一个完整、细密的网状结构.结论:内淋巴囊不仅是代谢非常活跃的器官,而且粘膜下丰富的淋巴窦与血管网可缓解压力变化对内淋巴造成的影响,借此来维持内淋巴的内环境稳定.提示梅尼埃病可能就是各种原因引起内淋巴囊血液循环障碍,使内淋巴囊的物质交换功能障碍,从而产生内淋巴积水.
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乙酰胆碱受体γ亚基基因-204/-50片段与鸡发育阶段骨骼肌核因子的相互作用
目的:分析鸡乙酰胆碱受体(acetylcholine receptors, AChR) γ亚基基因与不同发育阶段鸡骨骼肌核因子的相互作用.方法:以AChR γ基因-204/-50片段为探针,与孵化9～18 d的鸡胚和出生后1 d、2周雏鸡骨骼肌核抽提物进行凝胶阻滞和Southwestern印迹分析.结果:凝胶阻滞实验显示,9 d、13 d鸡胚骨骼肌核抽提物与γ基因-204/-50片段结合反应可形成明显的阻滞条带,18 d后阻滞条带明显减弱.Southwestern印迹分析显示,9～18 d肌核抽提物中有2种核因子可识别、结合γ基因-204/-50片段,相对分子质量分别为30 000和53 000.采用2种实验方法在出生后的核抽提物中未检出DNA结合活性.结论:AChR γ基因-204/-50片段可被30 000和53 000两种核因子识别,两因子在鸡胚发育的9～18 d表达,出生后消失.它们可能对鸡AChR γ基因的转录激活起作用.
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粒单核细胞和粒细胞集落刺激因子在人胎盘滋养层细胞的定位
目的:确定脐血中高水平的造血因子的来源.方法:应用抗粒单核细胞集落刺激因子(GM-CSF)和抗粒细胞集落刺激因子(G-CSF)的单克隆抗体对19例健康产妇足月分娩的胎盘组织的冰冻切片进行免疫组织化学染色.以耳鼻咽喉科摘取的鼻息肉组织做对照.结果:胎盘郎汉斯细胞及合体细胞呈现阳性反应,而阴性对照无反应.结论:胎盘滋养层细胞可能是产生脐血中GM-CSF和G-CSF的主要细胞.
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广谱抗病毒药17997治疗实验性单纯疱疹性角膜炎的疗效观察
目的:评价17997(20 mg*L-1)滴眼治疗实验性单纯疱疹性角膜炎(herpes simplex keratitis, HSK)的疗效及滴眼剂的刺激性.方法:建立兔眼HSK动物模型,以1 g*L-1无环鸟苷滴眼剂作为阳性对照,以0.15 mol*L-1生理盐水作为阴性对照,采用裂隙灯观察角膜病变情况并评分、病毒分离检测及透射电镜观察评价17997疗效.采用Draize眼刺激实验评价药物毒性.结果:17997(20 mg*L-1)可有效地治疗HSK,减轻角膜病变程度,缩短平均治愈时间,疗效与无环鸟苷相似.17997滴眼剂(20 mg*L-1)及其赋形剂的Draize评分结果表明,17997滴眼剂无眼刺激性.结论:广谱抗病毒药17997治疗实验性单纯疱疹性角膜炎获得了与无环鸟苷相似的疗效,且无临床毒性.
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内皮素-1基因在重度妊娠高血压综合征患者胎盘绒毛组织中的表达
目的:研究重度妊娠高血压综合征(妊高征)患者胎盘绒毛组织中内皮素-1(ET-1)mRNA的表达,探讨ET-1与妊高征的关系.方法:用地高辛标记的内皮素-1 cDNA探针对重度妊高征患者及正常对照组产妇胎盘绒毛组织总RNA行斑点印迹杂交.利用Leica QWIN图像处理及分析系统测量每个杂交点的平均光密度值.结果:妊高征组患者胎盘绒毛组织ET-1 mRNA的表达较正常妊娠组明显增高.结论:重度妊高征患者胎盘绒毛组织ET-1表达增强可能引起全身血管痉挛,导致妊高征,同时也可能与妊高征易并发胎儿宫内发育迟缓有关.
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大黄素对血管平滑肌细胞增生抑制作用的机制
目的:观察大黄素对动脉损伤后离体培养的平滑肌细胞增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen, PCNA)和细胞周期时相的影响,了解大黄素抑制离体培养的平滑肌细胞增殖的作用机制.方法:指数增长期的平滑肌细胞同步化于G0期后,加入20 mg*L-1大黄素于含胎牛血清10%(体积分数)的细胞培养液中,24 h后分别用流式细胞仪进行细胞周期时相测定和抗PCNA蛋白单克隆抗体染色.结果:与对照组比较,用了大黄素以后,G0/G1期细胞百分比升高,S期细胞百分比下降,下降率为75.5%,平滑肌细胞抗PCNA单克隆抗体染色呈阴性.表明PCNA蛋白的表达受到抑制,细胞受阻于G0期.结论:抑制PCNA蛋白表达、阻滞细胞周期的移行是大黄素抑制平滑肌细胞增殖的重要机制之一.
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正常及妊娠高血压综合征时胎盘、脐带一氧化氮合酶的计量研究
目的:研究一氧化氮合酶(nitric oxide synthase, NOS)在正常足月妊娠和妊娠高血压时胎盘、脐带中的表达.方法:组织形态学观察,还原型辅酶Ⅱ酶组织化学和内皮型NOS(eNOS)免疫组织化学及图像分析定量研究.结果:妊娠高血压者胎盘、脐带有纤维素样坏死等病理性改变,还原型辅酶Ⅱ酶组化及eNOS免疫组化示NOS表达明显减弱,且分布异常.结论:妊娠高血压者胎盘及脐带中eNOS表达减弱,导致NO产生减少,胎盘循环缺血,可能是妊高征发病的重要机制之一.
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血清CA15-3检测在乳癌根治术后转移诊断的应用
1 材料与方法研究对象:健康对照组214例,均为女性,年龄21～68岁,平均47岁.共分为5个年龄组,21～30岁(44例)、31～40岁(70例)、41～50岁(31例)、51～60岁(35例)、61～68岁(34例).乳癌根治术前组共56例,年龄32～89岁,平均48岁,按UICC分期,Ⅰ期20例,Ⅱ期26例,Ⅲ期7例,Ⅳ期3例,均为首发病例.乳癌根治术后组,为1995年7月至1997年6月检测的369例乳癌根治术后的患者,共629例血清标本.年龄34～90岁,平均50岁,随诊时间1～24个月,平均10.2个月.其中无复发转移346例,确诊为局部复发2例,有远处转移者21例.
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酶免疫法量化分析乙型肝炎病毒核酸扩增产物
有关聚合酶链反应(polymerase chain reaction, PCR)技术应用研究的重点,是利用其能够短时间内在体外扩增出数百万个特异性靶DNA序列拷贝的特点,对感染者体内含量极低的病原体核酸模板(如乙型肝炎病毒HBV、丙型肝炎病毒HCV等)进行量化测定,从而为病毒、支原体、细菌等人类致病因子相关性疾病的诊断和治疗提供准确有力的实验室依据.本文建立了一种利用核酸固相杂交及酶免疫技术(EIA)量化测定HBV-DNA的PCR扩增产物的新方法,该方法具有灵敏、特异、准确、快速、简便,并可量化反映病毒模板量等优点,可广泛应用于HBV感染相关疾病的诊断和治疗监测,现报告如下.
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束缚应激免疫抑制蛋白单克隆抗体的研制
我室以前的研究发现,在束缚应激大鼠和小鼠血清中能产生1种抑制正常淋巴细胞转化的大分子蛋白质,相对分子质量为1.55×105和3.70×105,并且证明该蛋白的生成受中枢神经系统的调控[1].随后又发现应激大鼠外周淋巴组织(脾和淋巴结)匀浆提取物亦可抑制淋巴细胞转化,进一步的研究表明这种抑制物的生化特性和相对分子质量与血清中的应激免疫抑制蛋白相类似,并证明血中应激免疫抑制蛋白来源于外周淋巴组织[2].上述结果是我室首先发现并已在国内外报道.本文利用部分纯化的应激免疫抑制蛋白作抗原,制备出抗应激免疫抑制蛋白的单克隆抗体,并利用此单抗从另一侧面证实血清中应激免疫抑制蛋白与淋巴组织产生的抑制蛋白是同一物质.
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直肠癌的局部切除治疗
1 资料与方法1985年至1996年在北京医科大学第一医院外科诊断为原发性直肠癌并接受局部切除治疗的患者共17例,随访16例,其中男5例,女11例.中位年龄59岁(35～69岁).随访中位时间61个月(12～138个月).
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cyclin D在小儿急性淋巴细胞白血病中的表达及意义
cyclin D是细胞周期G1期的主要正性调节因子,已被证实其过度表达与多种恶性肿瘤有关,但其与急性白血病的相关性研究国内外还很少报道.我们对30例小儿急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia, ALL)患儿骨髓涂片利用免疫组化方法检测cyclin D的3种亚型(cyclin D1、D2和D3)的表达情况.10例非白血病儿童骨髓标本作为正常对照.
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β-内酰胺酶基因的克隆及其逆转录病毒重组体的构建
β-内酰胺酶是细菌中存在的,能水解具有β-内酰胺环的物质(如头孢菌素类)并使其失活的一类酶.以前的研究证明,一些抗癌剂(如阿霉素、丝裂霉素、卡铂、氮芥、紫杉醇等)与头孢菌素连接后,其毒性很小或无毒性,而且在β-内酰胺酶作用下可释放具有活性的抗癌剂,所以可作为前药应用.如果利用β-内酰胺酶基因的逆转录病毒载体进行肿瘤局部注射,使肿瘤内表达β-内酰胺酶,联合静脉注射无毒的前药C-DOX(阿霉素和头孢菌素的偶联物),在β-内酰胺酶作用下前药在肿瘤内释放出杀瘤药阿霉素,便可进行肿瘤的基因治疗.
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尿中骨桥蛋白的初步分离与鉴定
骨桥蛋白(osteopontin,OPN)是一种富含唾液酸的磷酸化糖蛋白, 近来的研究发现,在体外OPN具有抑制草酸钙晶体生长的活性.
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标本保存条件对尿微量白蛋白测定的影响
微量白蛋白尿筛查的可靠性受检测方法本身及标本保存条件的影响.
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RAD18基因在多种细胞及大鼠多种组织中的表达
RAD18基因是人类基因组计划研究的重要模式生物--啤酒酵母的复制后修复上位显性组的重要成员,其编码的产物RAD18蛋白与RAD6蛋白在体内形成紧密的复合物.鉴于DNA修复基因在进化上具有很强的保守性,为探讨RAD18基因在高等动物细胞中存在的意义,我们以全长的RAD18基因为探针,应用染色体原位杂交技术及RNA印迹技术对多种细胞如KGY444(裂殖酵母)、S2(果蝇)、NIH3T3(小鼠)、A10(大鼠)、COS-7(猴)、293(人)等及Wistar大鼠多种组织进行了研究.染色体原位杂交结果显示,上述各种细胞均有很强的RAD18基因杂交信号,而质粒载体片段杂交对照则无信号.RNA印迹杂交结果表明,上述各种细胞及Wistar大鼠心、肝、脾、肺、肾、脑等组织均有RAD18基因表达.这说明RAD18基因无论是在生物进化上,还是在维持细胞的正常功能方面均具有重要意义.本工作为今后克隆哺乳动物及人类该基因同源基因提供了理论依据.
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人心肌钾离子通道α1亚单位的分子克隆
钙离子通道是一个大分子的跨膜蛋白质,在心肌细胞的静息电位和动作电位的形成中起着非常重要的作用.不同来源的组织中均存在着钾离子通道,它们之间除了结构上的不同外,也存在着功能上的差异.不同进化程度、不同种系动物的电压依赖性钾离子通道在结构上也有很大的不同.因此,研究人心肌和其它组织的钾离子通道,对于进一步研究钾离子通道在不同组织中的作用以及钾离子通道开放剂和阻断剂的作用机制是至关重要的.
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微囊藻毒素、佛波酯和苯巴比妥钠对细胞间隙通讯和细胞内Ca2+浓度的影响
目的:探讨细胞间隙通讯和细胞钙离子信号传导系统在非遗传毒性致癌物的遗传外致癌过程中的作用.方法:应用划痕染料示踪技术(SLDT)和fluo-3荧光标记法,测定微囊藻毒素、佛波酯(TPA)、苯巴比妥钠3种非遗传毒性致癌物对BALB/c 3T3细胞间隙通讯功能和细胞内游离Ca2+离子浓度的影响.结果:3种非遗传毒性致癌物均可不同程度抑制细胞间隙通讯功能,并呈良好的剂量效应关系.TPA和微囊藻毒素可明显诱导细胞内游离钙离子浓度升高,但在试验剂量下苯巴比妥钠未见引起细胞内Ca2+离子浓度的明显改变.结论:细胞间隙通讯系统可能是3种非遗传毒性致癌物的共同作用位点,对细胞Ca2+系统的影响以TPA类非遗传毒性致癌物为主.
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