但凡做一些与基因有关的实验，肯定离不了PCR，说到PCR，我们不得不提Primer——引物。你一定会想，找公司设计啊，多省事!

　　我只能说：你太单纯了，你是不知道公司设计的引物有多随意，哼哧哼哧做了大半年，后才发现溶解曲线是双峰!

　　好了，话不多说，今天教大家如何利用PubMed简单地设计普通引物。

　　一、设计Primer

       首先，我们打开新版Pubmed界面。

　　往下拉，选择Gene。

　　接着在检索框输入基因名称。

　　在检索出的条目里点击进入，注意物种。

　　点击进去后往下拉，拉到mRNA and Protein，点击红框部分进去

　　再点击右侧的Pick Primers

　　进入后将PCR product size将70 100两个参数修改为100 200

　　如图所示

　　同时，引物选择跨过内含子，防止DNA污染

　　点击Get Primers这里需要耐心等待，然后会出现好几对Primers，如下图所示

　　如果出现多对引物，那如何进行选择?接下来，我们再继续用Pubmed进行验证选择

　　二、验证PrimerPubmed

       首页往下拉，选择BLAST

　　进入界面后，再选择Nucleotide BLAST

　　将引物序列输入对话框，再选择种属，后进行BLAST

　　这里结果需要耐心等待一会，结果出来后，第二条就是我们所设计的引物，此外重叠片段越少，引物则越优。