作用醉酒、酗酒两会引起身体的小适,大量酒精摄人会造成人体多种器官损害,其中对肝脏的损害尤其严重。随着人民生活水平的提高,酒精性肝病(Alcohol Liver Disease)已经成为继病毒性肝炎后的另外一种多发的肝损伤疾病 。但目前为止尚没有一种高效的方法可以减轻酒后『互应及饮洒带来的肝损伤。白藜芦醇(resveratrol,Res)是一种广泛存在于自然界多种植物中的多酚类化合物,具有抗氧化、降低血液粘倒度、预防癌症的发生、抗过敏、抗突变、抗验证、调节免疫等药理活性,被广泛应用于医药、保健品、化妆品和食品添加剂等领域。近年研究表明,Res对过氧化氖、四氯化碳、酒精等所致肝损伤具有抑制作用,且对肝纤维化和肝癌的治疗有重要的潜在意义 。本研究拟通过小鼠酒精性肝损伤模型,研究Res防止洒精性肝损伤的作心机理,为开发利用其类似物提供试验资料和 论依据。
 
  1 材料与方法
 
  1.1 材料
 
  1.1.1 动物。SPF级昆明种雄性小白鼠(北京中国医学科学院实验动物研究所,许可证号:SCKX(京)20040001),6~8周龄,体质量18~22 g。常规颗粒饲料喂养,自由饮水,室温22-25℃,相对湿度40% ~70% 。
 
  1.1.2 药品与试剂。白藜芦醇(购白巾同药品生物制品检定所,批号:110742200517,纯度99.9%);超氧化物歧化酶SOD测定试剂(南京建成生物工程研究所,批号:20100503),丙二醛MDA测定试剂(南京建成生物工程研究所,批号:20100503),考马斯亮兰蛋白测定试剂(南京建成生物工程研究所,批号:
 
  20100515),ALT试剂盒(广州标佳科技公司生产,批号:021129),AST试剂盒(广州标佳科技公司生产,批号:020926);10%的甲醛由PBS液稀释得到,其它试剂均为分析纯。
 
  1.1.3 仪器。X一22R低温离心机(德同BECKMAN公司),MH2000电子水浴恒温槽(北京医疗设备总厂),酶标仪(BIORAD),玻璃研磨器(田产);CO 培养箱(型号2123TC);旋转蒸发仪(上海 荣生化仪器厂);电子天平(上海菁海仪器有限公司,型号A2104N);CX9仝自动生化分析仪(BECKMAN公司生产);微量移液器eppendorf(Made in USA)。
 
  1.2 方法
 
  1.2.1 小鼠肝损伤模型制备级分组给药。实验小鼠适应性饲养1周,随机分成5组,每组l2只:①正常组:每火上午、下午分别按照10mL/kg灌胃0.9%生理盐水;②模型组:每人上午按照10mL/kg灌胃0.9%生理盐水,下午灌胃0mL/kg,50% 的乙醇;③ 低剂量白藜芦醇给药组:每天上午按照10mL/kg灌胃0.02g/kg白藜芦醇.下午灌胃10mL/kg,50% 的乙醇; ④中剂量白藜芦醇给药组:每天上午按照10mL/kg灌胃0.04g/kg白藜芦醇,下午灌胃10mL/kg,50% 的乙醇;⑤ 高剂量白藜芦醇给药组:每天上午按照10mL/kg灌胃0.08g/kg白藜芦醇,下午灌胃10mL/kg,50%的乙醇。各组均连续灌胃10天。
 
  1.2.2 指标检测。上述各组小鼠灌胃期间每天观察精神活动、毛色、饮食、体质量等一般状态;末次给予乙醇后禁食不禁水12h,称重,采用摘眼球取血,3000 r/min离心,取血清按试剂盒说明书测定血清谷雨转氩酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)活性;取血后颈椎脱臼处死小鼠,迅速取出肝脏称重(计算肝指数=肝重/体质量X 100%),左叶用冷生理盐水制备成100g/i 肝匀浆,测定肝匀浆上清液SOD活力及MDA含量,取肝组织匀浆用考马斯亮兰蛋白测定法测定蛋白含量;取肝右叶用10%}f]醛固定,石蜡包埋切片,进行HE染色,观察其病理变化。
 
  1.2.3 统计学处理。实验数据用计算机instate件处理,所有数据以均数加减标准差(x±s)表示,采用× 分析方法,P<0.05表明有 著性差异。
 
  2 结果
 
  2.1 小鼠一股状态除正常对照组外,各组小鼠自灌胃乙醇第3天出现易激惹、反抗性增强或减弱、聚堆,部分小鼠出现腹部胀大,进食及饮水量减少,毛色无润泽,稍竖立,随着灌胃时间的延长上述现象加重。与模型组比较,不同剂量白藜芦醇给药组小鼠一般状态有改善,高剂量组更明显。
 
  2.2 白藜芦醇对小鼠体重、肝指数的影响见表1。由表1可以看出灌胃乙醇可使小鼠体质量和肝指数降低,与模型组比较,白藜芦醇各给药组体质量和肝指数有所增加,且有剂量依赖性。
 
  2.3 白藜芦醇对小鼠血清中谷丙转氨酶和谷草转氨酶的影响见表2。表2结果显示,模型组小鼠血清A 和AST明 高于正常组,高自藜芦醇各剂量组血清ALT活力和AST活力显著低于模型组(P <0.05,P<0.01),高剂量组作用更明显。
 
  2.4 白藜芦醇对小鼠肝组织MDA、SOD的影响见表3。由表3可见,模型组高肝组织SOD的活性明显降低,而MDA含量明显升高;与模型组比较,白藜芦醇可以显著提高肝组织SOD的活性和降低MDA的含量,呈明显剂量效应关系。
 
  2.5 白藜芦醇对小鼠肝组织外观及病理改变的影响 正常对照组肝脏外观呈红褐色,质地软而富有弹性;模型组则肝脏表砸呈黄褐色,有些呈灰白色,弹性差;白藜芦醇符给药组多数外观介于对照组与模型绀之间。HE染色光镜下见:正常组肝小叶结构清晰,肝细胞索排列规则,以中央静脉为中心,呈放射状排列,肝细胞未见异常改变;模型组小鼠肝细胞索排列紊乱,细胞可见大小不等、分布不均的脂滴,有空泡样病变,部分肝细胞溶解坏死或细胞核溶解,大量炎细胞浸润;白藜芦醇各给药组肝组织病理改变有所减轻,部分肝细胞出现水肿与脂肪变性,可见点状坏死,高剂量组有少数肝细胞水肿,轻度脂肪变性及坏死。
 
  3 讨论肝脏足酒精的代谢器官,肝细胞对酒精及其衍生物乙醛的影响极为敏感,过量饮酒可造成肝脏不同程度的损伤。据统计,重度饮酒精者巾90%~100% 有一定程度的脂肪肝,lO%~35% 可发展成酒精性肝炎,8 ~20%将发展为肝硬化。
 
  酒精在肝细胞内会产生过多的氧应激产物,如OH一、O,H0等自由基。这些自由基可激活磷脂酶及脂质过氧化反应,降低膜磷脂,改变其通透性和流动性,从而改变与膜结合的酶、受体和离子通道的微环境,影响其功能。因此,血清转氨酶活性升高是肝细胞受损的敏感性指标 。实验结果显示,模型绀小鼠血清ALT~AST活性与正常对照组相比明最升高,白藜芦醇可呈剂量依赖性明显降低血清ALT、AST活性,说明白藜芦醇对乙醇诱导的小鼠急性肝损伤具有一定的保护作用。
 
  MDA作为过氧化脂质代谢产物,是细胞氧化损伤的一一个重要检测指标。MDA可与磷脂酰乙醇胺和蛋白质交联,生成无活性脂褐质,沉积于组织细胞,破坏细胞膜结构,最终导致细胞无法维持正常代谢而死亡 。本实验的结果表明,与模型组比较,白藜芦醇符剂量组血清与肝脏组织中MDA含量均明减少,而且高剂量白藜芦醇组效果更佳,说明白藜芦醇可使酒精所致急性肝损伤模型小鼠的MDA含量升高。并呈明显量效关系。
 
  SOD是机体内清除自由基的重要抗氧化酶之一,酒精的摄入使其活性减弱,引起不饱和脂肪酸氧化生成过氧化物,形成脂褐质以及使DNA、蛋白质和酶等改变、破坏,从而加速肝脏损伤。本实验结果表明,与模型组比较,白藜芦醇符剂量组小鼠血清与肝脏组织巾SOD活性均明 增强。由此可推断白藜芦醇可以抑制酒精所致急性肝损伤模型小鼠SOD活性的降低,并呈明 量效关系。产生上述实验结果可能是由于白藜芦醇能清楚氧自由基,减轻炎性反应,抗脂质过氧化伤,从而起到保护酒精性肝损伤的作用。
 
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