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  营养免疫是当今热门的研究课题之一。人体许多种疾病都涉及免疫系统,免疫系统有防御、监视、耐受和调节功能。各种营养素,是人体依存最为重要的环境因素,也是维持人体正常免疫功能和健康的物质基础。各种维生素虽然人体每日需要量很少,它们常以辅酶或辅基的形式参与酶的功能,尤其是B族的维生素,因此它们在调节人体物质代谢过程中起着关键的作用。研究各种维生素对人体免疫系统的作用是营养免疫的重要任务。
  Mosmon (1983年)[1]报道噻唑蓝(MTT)比色法测定细胞活性。MTT可被各种类型的活性细胞(RBC除外)摄取,活性强的细胞摄取较多的MTT,在线粒体内被脱氢酶还原为甲簪颗粒(Formazan),颜色由黄变深紫,加入SDS使细胞完全裂解释放出甲簪,在波长570nm下酶标仪测量OD值,
  OD值越高,其甲簪浓度越高,反应活的细胞活性越强[2,3]。因此,MTT法可定量检测各种细胞的活性。我们曾经报道  几种水溶性维生素对小鼠淋巴细胞活性的作用[4]。本报道VitB1、VitB6、VitB12 和VitC对小鼠腹腔巨噬细胞活性的作用,它们在一定浓度下对小鼠腹腔巨噬细胞活性有增强作用,VitB12 尤为显着。VitB1、VitB6、VitB12 均涉及体内细胞正常生理生化功能,因此,它们当然参与小鼠腹腔巨噬细胞的生化反应,完成正常生理功能。VitC经临床实验证实[5],它具有抗氧化作用,增强巨噬细胞的吞噬杀菌功能,并有增强淋巴细胞功能(曾已报道)的VitC还参与免疫球蛋白的二硫键的形成,从而促进免疫球蛋白的合成。有增加补体C1和干扰素的产生,以及增强NK细胞的活性,因此增强人体抗肿瘤的作用[6,7]。
  1  材料与方法
  1.1  实验动物和主要试剂及实验仪器
  ICR小鼠体重(20±2)g,雄性,由首都医科大学实验动物部提供。RPMI1640培养液为Hyclmone公司产品。噻唑蓝(MTT)为Sigma公司产品,10%十二烷基磺酸钠(SDS)为BRL公司产品,淋巴细胞分离液为TBD生物技术发展中心产品,液体石蜡油为北京旭东化工厂产品, VitB1 (5mg/ ml)、VitB6 (5mg/ ml)、VitB12 (0.5mg/ ml)均为天津金耀氨基酸有限公司产品, VitC(400mg/ ml)为北京双鹤药业有限公司产品,酶标仪为SLT公司产品(型号为A-5082)。
  1.2  方法
  (1)对小鼠腹腔注射(VitB1 、VitB6 、VitB12 和VitC,无菌液体石蜡油),取ICR小鼠40只分成4组,每组10只,分别为1组、2组、3组和4组。1组为VitB1实验组,第1天对其中5只小鼠腹腔注射无菌生理盐水 0.2ml/只,作为对照,另外5只小鼠腹腔注射VitB1  0.05ml/只作为实验组。2组为VitB6 实验组,第1天对其中5只小鼠腹腔注射无菌生理盐水 0.2ml/只,作为对照,另外5只小鼠腹腔注射VitB6 0.2ml/只作为实验组。3组为VitB12 实验组,第1天对其中5只小鼠腹腔注射无菌生理盐水 0.2ml/只,作为对照,另外5只小鼠腹腔注射VitB120.2ml  /只作为实验组。4组为VitC 实验组,第1天对其中5只小鼠腹腔注射无菌生理盐水 0.2ml  /只,作为对照,另外5只小鼠腹腔注射VitC 0.2ml/只作为实验组。以上4组小白鼠经腹腔注射生理盐水和维生素,均于48h后再经腹腔注射无菌液体石蜡油0.1ml /只。48h后行颈椎脱臼处死。
  (2)巨噬细胞的制备:将处死的小白鼠行腹部皮肤消毒后,持镊提起腹中部皮肤并剪开,暴露腹膜,避开血管剪开腹膜一小口。用毛细吸管取出腹腔液,并收集于试管中。作好标记后离心,弃上清,洗3次,立即进行台盼蓝染色,计算活细胞数。细胞数108/ ml。
  (3)噻唑蓝比色法,将制备的小鼠巨噬细胞按组分管,每组实验管(孔)3管(孔)对照管(孔)3管(孔)。37℃温育2h后,每管加10%SDS(溶于双蒸水),轻轻震荡,待甲簪颗粒完全释放后,再用酶标仪测OD570值。
  2  结果
  VitB1对小鼠腹腔巨噬细胞活性的作用  VitB1对小鼠腹腔巨噬细胞活性的作用,VitB150μl(0.0025μg)对小鼠腹腔巨噬细胞活性有增  强作用,P<0.01,见图1。VitB6对小鼠腹腔巨噬细胞活性的作用, VitB6200μl(0.002μg)对小鼠腹腔巨噬细胞活性有增强作用,P<0.01,见图2。VitB12对小鼠腹腔巨噬细胞活性的作用,200μl(0.002μg)对小鼠腹腔巨噬细胞活性有增强作用,P<0.001,见图3。 VitC对小鼠腹腔巨噬细胞活性的作用,200μl(0.08μg)对小鼠腹腔巨噬细胞活性有增强作用,P<0.01,见图4。
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