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四种牙周致病菌侵入血管内皮细胞能力的体外研究
目的 研究和比较4种常见牙周致病菌Pg33277、Pi25611、Aa29522和Fn10953黏附和侵入人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)的能力,为深入探讨牙周致病菌感染HUVEC在促进动脉粥样硬化发生、发展中的作用奠定初步基础.方法 建立牙周致病菌感染HUVEC的体外模型,采用扫描电镜、抗生素保护-菌落计数法观察以上牙周致病菌黏附和侵入HUVEC的能力.结果扫描电镜结果表明Pg33277、Pi25611、Aa29522和Fn10953均可黏附于HUVEC;抗生素保护法结果发现Pg33277、Pi25611、Aa29522和Fn10953均可侵入HUVEC,细菌侵入量分别为(0.8±0.1)×10~8、(4.1±0.5)×10~6、(1.6±0.3)×10~6、(5.0±0.4)×10~6CFU/L,侵入率分别为(0.400±0.050)%、(0.021±0.003)%、(0.008±0.002)%和(0.025±0.002)%,Pg33277侵入能力远较其他3种牙周致病菌强(P＜0.001),其余3种牙周致病菌间的侵入能力差异无统计学意义(P＞0.05).结论 4种常见牙周致病菌Pg33277、Pi25611、Aa29522和Fn10953均可黏附和侵入HUVEC,Pg33277侵入能力强,这可能为其进一步发挥相关的生物学作用奠定基础.
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滋养层细胞侵入调控研究常用的细胞株与模型
滋养层细胞对子宫壁组织的侵入是受到严格调控的过程.虽然迄今对该现象已经研究几十年,但对其调控机制仍然了解不多.为了更好地推动这方面研究的开展,对近年来常用于研究滋养层细胞侵入调节的细胞株及体外研究模型进行简要综述.
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金黄色葡萄球菌对成骨细胞的侵入
目的明确金黄色葡萄球菌能否侵入体外培养的人成骨细胞,并比较三个不同菌株在侵入能力上的差异.方法采用三个不同的金黄色葡萄球菌菌株(6571、8325-4和WA250),取半对数生长期细菌用于实验.成骨细胞培养自健康成人拔下颌阻生齿手术中之去骨块.侵入实验的细菌与细胞比例为30:1,侵入发生时间为2小时,细胞外细菌为庆大霉素杀灭.部分被感染的成骨细胞溶解后用于细菌培养,计算菌落数;部分送电镜观察.结果 6571 菌株对成骨细胞每孔的平均侵入菌落数为1976±269;8325-4为2856±493;WA250为5638±3 81.电镜观察显示,三株均有侵入成骨细胞现象,以WA250侵入多,其次分别为8325-4和6 571.结论金黄色葡萄球菌能侵入成骨细胞内,其侵入能力与菌株本身特点有关.金黄色葡萄球菌侵入成骨细胞后能逃避庆大霉素的杀菌作用,这可能与临床上骨髓炎不易为抗生素治愈有关.
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凤城蟑螂、臭虫的发生与防制
目的:提高人们的卫生意识,了解、认识有害昆虫的发生与防制以及相关知识的掌握,保障人民健康;方法:根据群众反映、现场踏查及药激等方法进行综合调查;结果:我市城区内首次出现了德国小蠊和温带臭虫侵入;结论:及时对其孳生环境进行了药物杀灭,防制效果及佳.
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口腔细菌对铜绿假单胞菌黏附及侵入肺上皮细胞能力的影响
目的 通过比较铜绿假单胞菌和口腔细菌单独或共同作用于肺上皮细胞时,细菌黏附和侵入细胞的能力,探讨细菌间相互作用在呼吸道感染的初阶段的作用机制.方法 应用培养法和抗生素保护法检测铜绿假单胞菌和口腔细菌单独或共同作用于肺上皮细胞时,细菌黏附和侵入肺上皮细胞的能力.结果 铜绿假单胞菌与口腔细菌共同作用于肺上皮细胞,牙龈卟啉单胞菌和伴放线放线杆菌降低了铜绿假单胞菌的黏附能力,却增强了其侵入能力；而铜绿假单胞菌能够影响口腔细菌对肺上皮细胞的黏附,同时增强口腔细菌侵入肺上皮细胞的能力.结论 口腔细菌,尤其是牙周可疑致病菌主要通过增强铜绿假单胞菌对肺上皮细胞的侵入而影响呼吸道感染过程.
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嗜肺军团菌的研究进展(二)
(续前)3嗜肺军团菌的敏感药物与抑制剂的研究进展3.1临床治疗方面到目前为止,临床上对嗜肺军团菌的治疗仍然以红霉素为主.嗜肺军团菌对其他类型的抗生素多不敏感.1996年John研究了嗜肺军团菌对3种大环内酯类药物(erythromycin,甲基红霉素clarithromycin和阿齐红霉素azithromycin)的敏感性,他们试验了5种嗜肺军团菌菌株,发现3种受试药物都能有效抑制这几种嗜肺军团菌菌株在细胞内的生长.1999年Paul报告了Sch27899、erythromycin和ofloxacin(氧氟沙星)对细胞内受试军团菌菌株的MICs分别是0.25、0.5、0.06 mg/ml.
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嗜肺军团菌的研究进展(一)
军团菌(Legionella)是引起军团病(legionnaires disease,LD)的病原菌,是兼性胞内寄生菌,系革兰氏阴性杆菌,是由于1976年在美国费城退伍军人年会中首次发现的急性发热性肺部疾病而被命名的.广泛存在于自然界,在土壤和水中可以长期存活,自来水中可以存活1年以上.军团菌主要寄生在水中的原生动物体内,尤其是30℃～40℃热水系统为军团菌提供了一个非常良好的孳生环境,对人体健康造成很大的威胁.在建筑给水系统中,特别是封闭的公共卫生场所检出率高.国内自1983年康晓明首次报道该病以来,有关的研究报告不断增加,特别是近几年,全国十几个省市都有病例报告.目前已知军团菌有45种64个血清型[1],能引起人类疾病的约有20种,常见的有嗜肺军团菌(legionella pneumophila,LP)、麦氏军团菌、长滩军团菌、博氏军团菌、菲氏军团菌、杜氏军团菌等,其中嗜肺军团菌是引起流行性、散发性社区获得性肺炎和医院内获得性肺炎的重要病原菌[2].嗜肺军团菌有15个血清型,都有致病性.其中1型在人军团菌肺炎中常见,估计70%～90%的军团菌病是由1型嗜肺军团菌引起的.
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鼠伤寒沙门菌SL1344株cya基因缺失株生物学特性的检测
目的：探索鼠伤寒沙门菌cya（ adenylate cyclase，cya）基因的功能及其缺失株减毒的初步机制。方法：对鼠伤寒沙门菌SL1344株cya基因缺失株的耐酸碱能力、耐盐性、运动性、生物被膜成分、对上皮细胞黏附、侵袭以及细胞毒性等生物学特性进行检测。结果：cya缺失株的耐酸碱性、耐盐性以及运动能力较亲本菌株有明显降低；生物被膜成分测定结果显示cya缺失株不表达纤维素和菌毛；同时与亲本菌株相比cya缺失株对上皮细胞的黏附和侵袭能力发生了显著的降低，且对细胞毒性的影响弱于亲本菌株。结论：上述结果表明cya基因功能与细菌的运动能力、细胞膜的渗透能力、生物被膜的形成及毒力密切相关，从而为鼠伤寒沙门菌cya基因功能及其缺失株减毒机制的进一步研究提供了理论参考，这也必将有助于研发以减毒鼠伤寒沙门菌为载体的口服疫苗。
关键词： SL1344cya缺失株 运动性 生物被膜 黏附 侵入 -
金黄色葡萄球菌对成年大鼠牙槽骨成骨细胞侵入的观察
目的 了解金黄色葡萄球菌(staphylococcus aureus,SA)能否侵入体外培养的成年大鼠牙槽骨成骨细胞及其侵入能力.方法 采用SA菌株ATCC 25923与体外培养的成年大鼠牙槽骨成骨细胞,按感染复数(multiplicity of infection, MOI)为100∶1的比例即100个细菌比1个细胞侵入15～60 min,通过透射电镜观察细胞内的菌落计数(colony forming unit,CFU),了解细菌侵入情况.结果 透射电镜观察显示,30、45、60 min组有侵入成骨细胞现象,以60 min侵入多,其次分别为45、30 min,SA ATCC 25923对成骨细胞的15、30、45、60 min侵入菌落数分别为(13±5)、(435±31)、(803±95)和(1 800±175) CFU/孔.结论 SA能侵入成骨细胞内,其侵入数量随时间延长而增多.
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金欣口服液阻断呼吸道合胞病毒入侵的实验研究
目的 研究金欣口服液含药血清时呼吸道合胞病毒入侵宿主细胞环节的影响.方法 在病毒和细胞接触期间采用转换温度方法观察金欣口服液含药血清对 RSV 黏附、侵入的影响.观察药物作用前后宿主细胞表面F蛋白的表达.结果 温度转换前(黏附阶段)加入金欣口服液含药血清,实验组和对照组OD值无差异;温度转换后(侵入阶段)加入金欣口服液含药血清组OD值明显升高,与对照组比有显著性差异.荧光标记的F蛋白位于感染细胞表面,RSV 感染后,细胞发生融合的部位荧光明显增强,金欣口服液含药血清作用后荧光减少.结论 金欣口服液拮抗呼吸道合胞病毒的机制之一是抑制病毒的膜融合,作用位点是病毒的F蛋白或其受体.
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HIV粘附和侵入新进展
HIV基因组要进入靶细胞,病毒首先必须与靶细胞间形成膜融合.形成膜融合的过程是一个多阶段的过程,包括包膜蛋白基因(Env)编码的糖蛋白和细胞表面受体间的一系列相互作用.Env糖蛋白与受体的结合触发Env糖蛋白内部一系列构象改变,终导致膜融合.对病毒侵入路径的了解,引人了一套全新的抗病毒机制,即阻断病毒粘附和侵入路径的各阶段.
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弓形虫入侵的宿主细胞骨架重塑触发线粒体重新分布
目的 探讨宿主细胞骨架重塑在弓形虫侵入HFF细胞以及触发细胞线粒体重新分布中的作用.方法 体外培养HFF细胞,预先用1μg/mL细胞松驰素D(CD)处理30 min,接种弓形虫速殖子分别培养1h和20 h,Western blotting检测弓形虫表面抗原(surface antigen,SAG)1蛋白表达.同时用MitoTracker(R) Red CMXRos荧光探针标记细胞线粒体,激光共聚焦显微镜下观察HFF细胞线粒体在弓形虫侵入前后和CD处理前后聚集和分布情况.结果 感染后1h,CD处理组HFF细胞内虫体量与CD未处理组差异不大,20h时CD未处理组细胞内虫体量显著多于CD处理组.此时可见HFF细胞线粒体明显聚集成明亮点状且分布于纳虫泡周围,而未感染组细胞线粒体未见明显聚集分布.CD可以显著抑制弓形虫侵入HFF细胞后引起的线粒体聚集.结论 触发宿主细胞骨架重塑是弓形虫侵入宿主细胞并引起细胞线粒体向纳虫泡聚集所必须的.
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Tsp10多肽免疫血清在体外对旋毛虫侵入肠上皮细胞及幼虫发育的影响
目的 观察Tsp10多肽免疫血清在体外对旋毛虫侵入肠上皮细胞及幼虫发育的影响.方法 将不同免疫血清与含有旋毛虫肠道感染性幼虫的半固体培养基混合后,接种至正常小鼠肠上皮细胞(intestinal epithelial cells,IEC)单层上,37℃5％CO2培养2h、36 h时分别观察幼虫侵入率、细胞单层受损面积及发育至Ⅱ～Ⅳ期幼虫的百分比；免疫荧光试验检测受损肠上皮细胞中的旋毛虫抗原.结果 幼虫在半固体培养基培养2h时,Tsp10多肽免疫血清组的幼虫侵入率与细胞单层受损面积(46.3％,24.3 mm2)均明显低于T7噬菌体免疫血清组(94.1％,65.3 mm2)及正常小鼠血清组(92.5％,65.7 mm2)(P＜0.01)；培养36 h时,Tsp10多肽免疫血清组Ⅱ～Ⅳ期幼虫的百分比(16％)亦明显低于T7噬菌体免疫血清组(37％)及正常小鼠血清组(38％)(P＜0.01).Tsp10多肽及ES抗原免疫血清的免疫荧光试验结果显示,受损的IEC呈亮绿色荧光,而应用T7噬菌体免疫血清及正常小鼠血清时则为阴性.结论 Tsp10多肽免疫血清可阻止部分旋毛虫幼虫对肠上皮细胞的侵入与发育,Tsp10可能是旋毛虫的主要侵入蛋白之一.
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尖吻蝮蛇蛇毒对刚地弓形虫侵入宿主细胞的作用研究
目的观察细胞培养系统中宿主细胞在不同剂量源自皖南地区的尖吻蝮蛇(Agkistrodon acutus)蛇毒的作用下感染刚地弓形虫速殖子百分率的差异;探讨运用蝮蛇蛇毒作为辅助因子提高细胞培养用于弓形虫病病原学诊断的敏感性.方法以尖吻蝮蛇蛇毒加入分孔培养的Hela细胞和THP-1细胞中,分别用IFA和流式细胞仪进行检测,观察尖吻蝮蛇蛇毒对弓形虫速殖子侵入细胞的影响.结果在相同的时间内,在尖吻蝮蛇蛇毒的作用下,Hela细胞和THP-1细胞感染弓形虫速殖子的百分率在不同的时段均明显的提高.结论尖吻蝮蛇蛇毒可以促进弓形虫速殖子侵入宿主细胞,在实际应中,可以作为一种辅助因子在检测标本时提高速殖子检出率,有利于缩短弓形虫的检出时间.
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金欣口服液含药血清对呼吸道合胞病毒黏附、膜融合影响的实验研究
目的:研究金欣口服液舍筠血清对呼吸道合胞病毒(RSV)黏附、膜融合的影响.方法:在病毒和细胞接触期间采用转换温度方法观察金欣口服液含药血清对RSV黏附、侵入的影响.结果:温度转换前(黏附阶段)加入金欣口服液合药血清,实验组和对照组OD值无差异;温度转换后(侵入阶段)加入全欣口服液含药血清组OD值明显升高,与时照组比有显著性差异.结论:金欣口服液含药血清的抗病毒作用在呼吸道合胞病毒黏附后的膜融合及侵入阶段.
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内毒素调节细胞滋养细胞侵入能力的机制
目的:探讨内毒素(lipopolysacchraride,LPS)对细胞滋养细胞侵入能力的影响.方法:留取正常早孕绒毛,分离细胞滋养细胞,用无血清培养基培养.对照组:培养基中不添加内毒素.实验组:培养基中加入不同浓度的内毒素,其终浓度分别为25、50、100、200ng/ml.Transwell小室检测细胞滋养细胞的侵入能力;采用激光共聚焦-免疫荧光技术检测基质金属蛋白酶-2、9(MMP-2、9)蛋白的表达;RT-PCR检测MMP-2、MMP-9 mRNA表达水平.结果:内毒素降低细胞滋养细胞侵入Transwell小室的能力,在浓度为0、25、50、100、200ng/ml的LPS作用24h后,细胞滋养细胞侵至滤膜下表面的细胞为145.6±20.7、139.6±18.8、123.1±17、76.5±18、47.9±16,差异有统计学意义(P＜0.01);内毒素显著抑制细胞滋养细胞MMP-2、MMP-9蛋白和mRNA的表达.结论:内毒素能够抑制细胞滋养细胞的侵入能力,可能是通过抑制基质金属蛋白酶表达来实现.
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金黄色葡萄球菌感染侵入人成骨细胞的体外实验
目的 体外实验检测金黄色葡萄球菌感染侵入人的成骨细胞情况以及观察不同细菌感染剂量、时间与侵入细胞内细菌数量变化.方法 采用透射电镜方法观察金黄色葡萄球菌感染人的成骨细胞,CFSE荧光标记细菌,流式细胞仪检测细菌感染剂量、时间与侵入细胞内的细菌数量关系.结果 体外金黄色葡萄球菌能够感染侵入到人的成骨细胞内,随着细菌感染剂量增加,侵入细胞内的平均细菌数量和侵入率同步增加;感染时间到4 h时细菌的侵入率大,侵入细胞内的平均细菌数量在30 min～2 h呈现无统计学差异,但到4 h或8 h时呈现明显差异.结论 体外金黄色葡萄球菌能够感染侵入到人的成骨细胞内,侵入细菌的数量与不同感染剂量及时间相关.
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米诺环素对成年大鼠下颌骨成骨细胞内外金黄色葡萄球菌的作用
目的:探讨米诺环素对金黄色葡萄球菌感染的成年大鼠下颌骨成骨细胞的抗菌作用.方法:采用金黄色葡萄球菌ATCC 25923感染体外培养的成年大鼠下颌骨成骨细胞,被感染的成骨细胞部分经庆大霉素处理后加入米诺环素,另一部分直接加入米诺环素,溶解细胞后计算细胞内外的菌落数.结果:经庆大霉素杀灭细胞外细菌后,细胞内细菌在米诺环素的作用下,随着时间的延长细菌数量减少,24 h后基本抑制细胞内菌；随着米诺环素直接作用感染细胞的时间延长细胞内外的细菌均减少,3h细胞外细菌基本抑制,24 h后细胞内的细菌也基本完全抑制.结论:米诺环素能够抑制成骨细胞内外的金黄色葡萄球菌,具有时间依赖性,为种植体给药系统的临床应用奠定实验基础.
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军团菌入胞影响因素及过程
军团菌(Legionella)属于胞内寄生菌,其粘附、侵入细胞是军团致病的第一步,也是关键步骤,多种因素影响这一过程,如Lcl、Flagellin、Pilin、MOMP、MIP、Hsp60、Hsp70等蛋白、rtxA和enhC基因、棘阿米巴和金属离子Zn+等.本文旨在对影响军团菌入胞的因素及方式做简要概述,帮助初步探索军团菌的研究者提供系统的认识,以及通过对入胞机制的认识,利于军团菌病的预防和治疗.
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非小细胞肺癌组织中αVβ3的表达情况及敲低αVβ3对肺癌细胞株A549恶性生物学行为的影响
目的:研究非小细胞肺癌组织中αVβ3的表达情况及敲低αVβ3对肺癌细胞株A549恶性生物学行为的影响.方法:收集100例非小细胞肺癌患者的肺癌组织和癌旁正常组织,检测αVβ3的表达情况;培养肺癌细胞株A549,采用siRNA转染的方式敲低αVβ3的表达,而后检测促增殖和抗凋亡基因、侵入和血管新生基因的表达情况.结果:(1)肺癌组织中αVβ3的mRNA和蛋白含量均高于癌旁正常组织,差异有统计学意义(P＜0.05);(2)促增殖和抗凋亡基因:处理组细胞Bcl 2、Notch1、Cyclin E的mRNA和蛋白含量均低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);(3)侵入和血管新生基因:处理组细胞VEGF、ICAM-1、VCAM-1的mRNA和蛋白含量均低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:非小细胞肺癌组织中αVβ3表达量升高;siRNA敲低αVβ3表达后,可以抑制肺癌细胞株A549中促增殖和抗凋亡基因、侵入和血管新生基因的表达.
