首页 > 文献资料
-
Arkadia上调转化生长因子-B信号促进卵蛋白致敏大鼠气道重塑形成
支气管哮喘(简称哮喘)所致气道重塑的发生与转化生长因子(TGF)-β信号通路的活化密切关联.TGF-β生物学效应的发挥在很大程度上依赖于泛素蛋白酶体通路对TGF -β/Smad通路中基本信号分子的降解而得以实现.在上述过程中,E3泛素连接酶Arkadia和Smurf2能够诱导Smad7、SnoN和Ski的泛素化降解.本研究为明确卵蛋白致敏大鼠气道重塑发生过程中Arkadia和Smurf2对TGF-β信号通路的调控作用,采用卵蛋白致敏、激发方法建立慢性气道重塑大鼠模型;体外培养正常人支气管上皮细胞( NHBEC),用TGF-β1对NHBEC进行刺激,在此过程中分别用Arkadia-siRNA、Smurf2 -siRNA及蛋白酶抑制剂(lactacystin)对NHBEC进行预处理.
-
Smurf2对增生性瘢痕TGF-β1信号通路负向调节因子Smad7的影响及调控机制
目的 探讨Smurf2对增生性瘢痕成纤维细胞TGF-β1/Smad信号转导通路负向调节因子Smad7的影响及调控机制.方法 标本来自暨南大学附属广州市红十字会医院2014年1月至10月收治的8例需要手术的增生性瘢痕患者,年龄1岁8个月至7岁,瘢痕增生的时间在2～12个月,以同一患者术中剩余正常皮肤作为对照.采用组织块培养法分离后传代培养人增生性瘢痕成纤维细胞和正常皮肤成纤维细胞,取第3～5代细胞进行实验.①采用蛋白质印记法检测2组细胞中Smad7的蛋白表达水平;②加入外源性TGF-β1(10 ng/ml)作用0 min、5 min、15 min、30 min、1 h、2 h、12 h后,采用RT-PCR和蛋白质印记法分别检测2组细胞中Smad7的mRNA和蛋白表达水平;③收集增生性瘢痕成纤维细胞和正常皮肤成纤维细胞的细胞裂解液,分别加入泛素化混合物于37℃孵育1 h、2 h、6 h,采用蛋白质印记法检测2组细胞中Smad7的体外降解水平;④收集增生性瘢痕成纤维细胞的细胞裂解液,同时加入泛素化混合物及蛋白酶体抑制剂MG132/MG115(50μmol/L:50μmol/L),研究其对Smad7体外降解的抑制作用;⑤利用免疫共沉淀技术,检测增生性瘢痕成纤维细胞中Smad7与E3泛素连接酶Smurf2是否存在相互作用;⑥采用siRNA干扰技术沉默增生性瘢痕成纤维细胞中Smurf2的基因表达,研究沉默Smurf2后,增生性瘢痕成纤维细胞中Smad7蛋白在TGF-β1刺激下的表达水平.实验数据采用两样本t检验、单因素方差分析进行统计分析,组内两两比较采用SNK法,以P<0.05认为差异有统计学意义.结果 在正常皮肤及增生性瘢痕成纤维细胞中,Smad7的蛋白表达水平无明显差异(t=0.763,P=0.46);②在外源性TGF-β1刺激下,正常皮肤成纤维细胞中Smad7 mRNA和蛋白表达水平均呈时间依赖性增高均P<0.05,增生性瘢痕成纤维细胞中Smad7 mRNA表达呈时间依赖性增加(除5 min时P>0.05,其余各时间点与未刺激细胞比较,P值均<0.05),蛋白水平无明显变化(P>0.05);③正常皮肤成纤维细胞中,Smad7的体外降解无明显变化(P=0.162),增生性瘢痕成纤维细胞中,Smad7的体外降解增强(各时间点Smad7蛋白表达水平与对照组及上一个时间点比较,除2 h与1 h比较时P值为0.012,其余P值均为0.000);④蛋白酶体抑制剂MG132/MG115可以阻断增生性瘢痕成纤维细胞中Smad7的体外降解;⑤在用Smurf2抗体免疫共沉淀下来的蛋白复合物中检测到Smad7,表明增生性瘢痕成纤维细胞中Smurf2与Smad7存在相互作用;⑥增生性瘢痕成纤维细胞中,加入TGF-β1刺激,Smad7的蛋白表达水平无明显变化;沉默Smurf2基因后,Smad7蛋白在TGF-β1刺激下表达增高.结论 在烧伤后儿童增生性瘢痕成纤维细胞中,Smurf2通过泛素化降解Smad7,削弱了Smad7对TGF-β1信号转导的抑制作用,从而增强了TGF-β1/Smad信号转导,可能参与了增生性瘢痕的形成.
-
泛素连接酶Smurf1促进Smurf2的Nedd化修饰
目的 探讨泛素连接酶Smad泛素化相关因子2(Smad ubiquitination-related factor 2,Smurf2)Nedd化修饰的机制.方法 梯度过表达Nedd8检测Smurf2的蛋白水平变化,免疫共沉淀(IP)和Western印迹分析Smurf2的Nedd化修饰,GST融合蛋白沉降技术(GST-pulldown)验证相互作用,分析Smurf1 C426A基因敲入(knock in)小鼠体内Smurf2在淋巴、脾、肝和肺组织的蛋白表达水平.结果 Smurf2可发生Nedd化修饰,过表达Nedd8可导致Smurf2蛋白水平下调,Smurf1和Smurf2能相互作用,且Smurf1可使Smurf2的Nedd化修饰增强.在Smurf1 C426A基因敲入小鼠的组织细胞中Smurf2蛋白水平上调.结论 Smurf1能促进Smurf2的Nedd化修饰.
-
Smurf2对肝纤维化中TGF-β/Smad通路的影响
转化生长因子β1( TGF-β1)在肝纤维化的发生、发展中起重要作用，它作为TGF-β1/Smad信号通路的起始因子激活下游信号，使处于非活性状态下的肝星状细胞分化为肌成纤维细胞，促进并维持了肝纤维化的发生。泛素化是体内蛋白质翻译后修饰并降解的重要途径之一，泛素-蛋白酶体途径中的泛素连接酶Smurf2通过多种途径抑制TGF-β1/Smad通路表达。 Smurf2作为一种抗肝纤维化发生的酶受到广泛关注，但机制并未深入系统地被阐述。
关键词： 肝纤维化 转化生长因子β1/smad 泛素 Smurf2 肝星形细胞 -
碳纳米管丙氨瑞林对人子宫内膜癌细胞裸鼠皮下移植瘤生长及对Smurf2表达的影响
目的：观察碳纳米管丙氨瑞林对人子宫内膜癌裸鼠皮下移植瘤组织中转化生长因子β1（TGF-β1）诱导的泛素化调节因子2（Smurf2）表达的影响，探讨其可能的作用机制。方法：以人子宫内膜癌Hec-1-B细胞株皮下移植瘤组织作为研究对象，分别给予生理盐水、碳纳米管、丙氨瑞林、碳纳米管丙氨瑞林，四种不同的干预方式，每6天1次，共5次。在干预过程中观察肿瘤生长情况，测量肿瘤体积，干预结束利用免疫组化法（PV）检测各肿瘤组织中Smurf2蛋白的表达。结果：碳纳米管丙氨瑞林组裸鼠精神饮食情况明显优于其他三组，体重明显轻于其他三组。取出移植瘤体后比较，碳纳米管丙氨瑞林组瘤体体积小，与其他三组比较差异均有统计学意义（P<0.05）。碳纳米管丙氨瑞林干预组瘤组织中Smurf2蛋白的表达较其他三组表达增多，差异均有统计学意义（P<0.05）。结论：丙氨瑞林可以抑制子宫内膜癌细胞裸鼠皮下移植瘤的生长，在相同药物剂量条件下，碳纳米管丙氨瑞林作为缓释剂可以更好地增加裸鼠体重和抑制移植瘤组织的生长，有利于减少药物毒副作用，其作用机制可能是通过上调移植瘤组织中Smurf2蛋白来抑制肿瘤生长的。
-
甘草酸二胺对输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的治疗作用及机制
目的:探讨甘草酸二胺对肾间质纤维化的作用及其机制.方法:以Wistar大鼠单侧输尿管梗阻(UUO)为模型,在不同的时间点(7 d、14 d、28 d)观察梗阻侧肾间质纤维化指数;致纤维化的转化生长因子β1(TGF-β1 )的表达情况;肾皮质中与肾脏纤维化相关的Smurf2、Smad7信号蛋白等的mRNA及蛋白表达.结果:(1)随着梗阻时间的延长,肾间质纤维化程度逐渐加重,Smurf2基因和蛋白质明显上调,呈时间依赖性(P＜0.01);Smad7蛋白呈时间依赖性下调(P＜0.01),Smad7基因在各个时间点无明显变化;TGF-β1基因在UUO后第7 d达高峰,此后逐渐下降,但仍然高于假手术组(P＜0.01).(2)甘草酸能改善UUO所致的肾间质纤维化程度(P＜0.01),下调肾脏组织TGF-β1基因的表达(P＜0.01);减少Smurf2基因和蛋白质的表达,同时上调TGF-β1信号传导中抑制性因子Smad7的表达(P＜0.01).结论:甘草酸二胺能保护UUO所致的肾间质纤维化损伤.其可能的作用机制为减少Smurf2核酸和蛋白质的表达,增加抗纤维化作用的Smad7蛋白表达;减少TGF-β1表达,阻止TGF-β信号传导,从而阻断肾间质的纤维化.
-
Smad泛素化调节因子2在转化生长因子β1诱导人肺成纤维细胞活化中的作用及其分子机制
目的:观察Smad泛素化调节因子2(Smurf2)在转化生长因子β1(TGF-β1)诱导人肺成纤维细胞活化中的作用,并探讨其可能的分子机制.方法:体外培养人胚肺成纤维细胞MRC-5,10 μg·L-1 TGF-β1作用1、2和6h(分别为TGF-β1 1 h组、TGF-β1 2 h组和TGF-β1 6 h组),并设对照组(不加TGF-β1),RT-PCR和Western blotting法分别检测各组细胞中Smurf1和Smurf2 mRNA和蛋白的表达水平.MRC-5细胞随机分为对照组(未加入TGF-β1或siRNA)、TGF-β1组(10 μg·L-1 TGF-β1)、Control siRNA转染组(10 μg·L-1 TGF-β1+Control siRNA)和Smurf2 siRNA转染组(10 μg·L-1 TGF-β1+ Smurf2 siRNA).Western blotting法检测各组细胞中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和Ⅰ型胶原a1 (COL1A1)的表达水平;RT-PCR和Western blotting法分别检测各组细胞中Smad7、核转录共抑制因子SnoN、TGF-β Ⅰ型受体(TβR Ⅰ)、Smad2和Smad3 mRNA和蛋白的表达水平.结果:与对照组比较,各TGF-β1组细胞中Smurf2 mRNA和蛋白表达水平均明显升高(P＜0.05),且随着TGF-β1作用时间的延长,其表达水平呈逐渐增加的趋势;与对照组比较,各TGF-β1组细胞中Smurf1表达水平无明显变化(P＞0.05).与TGF-β1组比较,Smurf2 siRNA组细胞中Smurf2蛋白表达水平下降(P＜0.05).与对照组比较,TGF-β1组细胞中α-SMA和COL1A1蛋白表达水平均明显升高(P＜0.05);与TGF-β1组比较,Smurf2 siRNA组细胞中α-SMA和COL1A1蛋白表达水平均下降(P＜0.05).与对照组比较,TGF-β1组和Smurf2 siRNA组细胞中Smad7和SnoN mRNA表达水平均升高(P＜0.05),而Smurf2 siRNA组和TGF-β1组细胞中Smad7和SnoN mRNA表达水平无明显变化(P＞0.05).与对照组比较,TGF-β1组细胞中Smad7和SnoN蛋白表达水平均明显下降(P＜0.05);与TGF-β1组比较,Smurf2 siRNA组细胞中Smad7和SnoN蛋白表达水平明显升高(P＜0.05).与对照组比较,TGF-β1组和Smurf2 siRNA组细胞中TβRⅠ mRNA和蛋白表达水平均明显升高(P＜0.05),而Smurf2 siRNA组和TGF-β1组细胞中TβRⅠ mRNA和蛋白表达水平比较差异无统计学意义(P＞0.05).各组细胞中Smad2和Smad3 mRNA和蛋白表达水平比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论:Smurf2可能通过泛素化降解Smad7和SnoN,参与调控TGF-β1/Smads信号通路,从而发挥其促进TGF-β1活化肺成纤维细胞的作用.
-
Smurf2与肿瘤关系的研究进展
Smad泛素化调节因子2(Smurf2)属于泛素蛋白水解酶途径中的一种E3泛素连接酶.研究发现Smurf2与肿瘤的发生、发展密切相关,其在肿瘤中的作用并不单纯依赖于泛素连接酶活性,亦可通过其他方式参与细胞增殖、凋亡、衰老、迁移等过程,从而调控肿瘤的发展.本文就Smurf2与肿瘤关系的研究进展作一综述.
-
Smurf2在梗阻性肾病小鼠肾小管上皮细胞转分化形成中的作用
目的:探讨Smad泛素化调节因子2(Smurf2)在小鼠单侧输尿管梗阻所致肾间质纤维化进展中的作用机制.方法:采用结扎雄性CD-1小鼠单侧输尿管(UUO)的方法建立肾间质纤维化动物模型,设假手术为对照组(Sham组).术后3、7、14 d处死小鼠.用常规病理染色法观察两组小鼠肾组织形态和肾间质纤维化程度；以免疫蛋白印迹及免疫组织化学染色法检测两组小鼠肾组织中Smurf2、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和纤维连接素(FN)的表达和分布.结果:与Sham组相比,UUO术后7d小鼠出现部分肾小管扩张、萎缩和肾间质纤维化.同时,UUO术后肾组织中Smurf2、α-SMA和FN表达呈时间依赖性升高,E-cadherin表达则明显下降.并且,Smurf2蛋白主要分布于肾小管上皮细胞核内；α-SMA分布于肾小管上皮细胞和肾间质中；FN则分布于肾间质中.相关回归分析表明:UUO术后小鼠肾组织内Smurf2表达与α-SMA(r=0.765,P＜0.001)和FN蛋白水平呈正相关(r=0.773,P＜ 0.001);与E-cadherin表达呈负相关(r=-0.656,P＜0.001).结论:梗阻性肾病小鼠肾组织中Smurf2可能通过诱导肾小管EMT形成促进肾间质纤维化的进展.
关键词： Smurf2 梗阻性肾病 肾间质纤维化 肾小管上皮细胞转分化 -
DPC4和Smurf2在子宫内膜腺癌中的表达及临床意义
目的 检测胰腺癌缺失基因(DPC4)及Smad泛素化调节因子2(Smurf2)在增殖期子宫内膜、子宫内膜不典型增生及子宫内膜腺癌组织中的表达,探讨两者与子宫内膜腺癌发生发展的关系.方法 采用免疫组化SP法检测DPC4和Smurf2在上述3种组织中的表达情况,并结合年龄、病理分期、组织学分级、肌层浸润深度及淋巴结转移等临床特征进行相关性分析.结果 与增殖期子宫内膜表达相比在子宫内膜腺癌中,DPC4呈低表达,而Smurf2呈高表达(均P<0.05),两者呈负相关(r=-0.525,P<0.05),两因子在子宫内膜腺癌中的表达均与其病理分级和临床分期相关(均P<0.05),而与淋巴结转移、癌肿浸润肌层深度及年龄无关(均P>0.05).结论 DPC4和Smurf2均与子宫内膜腺癌的发生发展相关,两者均与其病理分级和临床分期有关,而与淋巴结转移及癌肿浸润肌层深度无关,可作为肿瘤恶性程度及预后指标.
-
血管紧张素Ⅱ和氧化型低密度脂蛋白对大鼠血管平滑肌细胞Smurf2和Ⅰ型胶原表达的影响
目的 在体外培养的大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)中探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)和氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)对Smad泛素调节因子2(Smurf2)及I型胶原表达的影响.方法 应用RT-PCR检测Smurf2 mRNA的表达,Western blot检测Smurf2蛋白的表达,ELISA检测I型胶原的表达.结果 与对照组相比,AngⅡ呈浓度依赖性抑制Smurf2mRNA和蛋白的表达(P＜0.05),促进I型胶原的表达(P＜0.05)；ox-LDL呈浓度依赖性促进Smurf2mRNA和蛋白的表达(P＜0.01),抑制I型胶原的表达(P＜0.05).以AngⅡ(10-5 mol/L)联合不同浓度ox-LDL(20、40及80ms/L)作用大鼠VSMC后,与对照组相比,联合组Smurf2的表达升高(P＜0.05),抑制I型胶原的表达(P＜0.05).结论 AngⅡ可能通过抑制Smurf2的表达来提高I型胶原的表达；ox-LDL可能通过提高Smurf2的表达抑制Ⅰ型胶原的表达；ox-LDL呈浓度依赖性逆转AngⅡ对Smurf2的抑制作用,同时抑制I型胶原的表达.
-
盆腔器官脱垂患者Smurf2和Smad7表达特点
目的 研究盆腔器官脱垂(POP)患者阴道前壁和宫骶韧带的组织结构特点、smad泛素化调节因子2(Smurf2)、Smad7表达的特点,分析与POP发生的相关性.方法 收集2014年5月至2015年6月广州医科大学附属第三医院100例患者,分为三组:POP(Ⅰ～Ⅱ)20例、POP(Ⅲ～Ⅳ)30例和对照组(非POP患者)50例.标本选取阴道前壁和宫骶韧带,采用HE染色,光镜下观察各组切片组织结构.采用Western blotting方法检测阴道前壁和宫骶韧带组织中Smurf2、Smad7和Ⅰ型胶原的表达.采用免疫组织化学染色法检测阴道前壁和宫骶韧带组织中Smurf2和Smad7的定位及表达.结果 对照组阴道分娩次数少于POP(Ⅰ～Ⅱ)组和POP(Ⅲ～Ⅳ)组,差异均有统计学意义(P＜0.05);POP(Ⅰ～Ⅱ)组与POP(Ⅲ～Ⅳ)组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).HE染色结果显示,POP患者阴道前壁和宫骶韧带组织结构薄弱,其严重程度与POP病情呈正相关.Western blotting显示:与对照组相比,POP组Smurf2、Ⅰ型胶原蛋白均显著降低(P＜0.05),而Smad7却明显增多(P＜0.05).免疫组织化学染色结果显示:Smurf2阳性表达见于细胞浆、细胞间质和细胞核,Smad7阳性表达见于细胞浆;与对照组相比,POP组Smurf2明显降低,而Smad7却明显增多,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 阴道分娩次数是POP发生的高危因素之一,Smurf2和Smad7可能参与盆腔器官脱垂的发病机制.
-
Smurf2对TGF-β通路的调节
TGF-β是一类相关蛋白超家族成员,在胚胎发育、维持成人组织内环境稳定和多种疾病的发病中起决定性作用.目前TGF-β1/Smad信号转导通路已成为国际研究热点.近发现泛素-蛋白酶体途径中的泛素连接酶 Smurf 2 参与了TGF-β1/Smad信号通路中的多个环节,产生即有正调节又有负调节的双重作用.因此进一步研究Smurf 2对TGF-β1/Smad信号的影响机制,有助于深入了解TGF-β1/Smad信号紊乱引起各种疾病的发病机制.
-
脂溢性角化病皮损区Smurf1和Smurf2表达增强
目的 探讨脂溢性角化病皮损区Smad泛素化调节因子1和2(Smad ubiquitination regulatory factor 1 and 2, Smurf1, 2)的表达及其意义.方法 采用实时定量聚合酶链式反应(quantitative Real-time PCR,RT-PCR)和免疫组织化学技术分别检测脂溢性角化病皮损和对照正常皮肤中Smurf1和2的表达情况.结果 与对照正常皮肤相比,脂溢性角化病皮损中Smurf1和2表达水平上调.结论 脂溢性角化病皮损中Smurf1和2的过度表达可干扰转化生长因子β(transforming growth factor-β, TGF-β)信号转导通路,可能使TGF-β抑制上皮增生的作用不能有效发挥,促进了脂溢性角化病表皮的过度增生.
-
寻常型银屑病皮损区表皮Smurf2表达及其意义
目的探讨寻常型银屑病皮损区Smad泛素化调节因子2(Smad ubiquitination regulatory factor 2,Smurf2)的表达及其意义.方法采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)和S-P免疫组化法分别检测寻常型银屑病皮损和对照正常皮肤中Smurf2的表达情况.结果 RT-PCR显示,寻常型银屑病皮损中Smurf2表达水平上调.与对照正常皮肤相比,寻常型银屑病皮损区表皮角质形成细胞Smurf2的免疫组化染色显著增强.结论寻常型银屑病皮损区表皮Smurf2表达增强.
-
泛素-蛋白酶体抑制剂MG132对糖尿病大鼠视网膜上Smurf2及Smad7表达的影响
目的 探讨泛素-蛋白酶体抑制剂MG132对糖尿病(diabetes mellitus,DM)大鼠视网膜上Smurf2及Smad7的表达的影响.方法 选择健康雄性Wistar大鼠60只,按随机数字表法分为正常对照组、DM组和MG132干预组各20只.MG132干预组与DM组给予一次性腹腔注射50mg/kg 链脲佐菌素(streptozotocin,STZ),正常对照组一次性给予等体积的柠檬酸三钠-柠檬酸缓冲液(pH 4.5)腹腔注射.自第三天起,MG132干预组大鼠每天给予0.1mg/kg MG132 DMSO液腹腔注射,正常对照组和DM组每天给予0.1mg/kg DMSO液腹腔注射.分别于给药后第8周和第12周处死各组大鼠,完整摘除大鼠的左眼球制成眼杯,采用免疫组织化学的方法检测各组大鼠视网膜上Smurf2及Smad7蛋白的表达.结果 正常对照组大鼠视网膜上Smurf2无表达或弱表达,Smad7蛋白高表达.MG132干预组和DM组大鼠视网膜上Smurf2的表达均较正常对照组明显增加(P＜0.01),Smad7的表达均较正常对照组明显降低(P＜0.01);MG132干预组大鼠视网膜上Smurf2的表达较DM组明显降低(q分别为20.37和40.96,均P＜0.01),Smad7的表达较DM组明显增加(q分别为67.20和187.00,均P＜0.01).结论 泛素-蛋白酶体抑制剂MG132能够通过抑制Smurf2的表达使DM大鼠视网膜上Smad7的降解减少,对DR的防治具有重要意义.
关键词： 泛素-蛋白酶体抑制剂 糖尿病视网膜病变 Smurf2 Smad7
