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人胰腺癌 Hedgehog 信号通路中膜蛋白受体 PTCH 的纯化
目的 构建人胰腺癌PTCH基因表达载体并诱导融合蛋白表达.方法 从人胰腺癌细胞株SW1990抽提总RNA,经RT-PCR扩增出PTCH基因,经纯化、回收目的 基因PTCH,将其插入表达载体pET22b,转化E. Coli BL21-CodonPlus(TM)-RP,构建重组质粒pET22b/PTCH,IPTG诱导表达融合蛋白,免疫印迹进行鉴定,Ni-螯合亲和层析纯化融合蛋白.结果 从人胰腺癌细胞株SW1990克隆出长为789 bp PTCH目的 片段,成功构建重组质粒pET22b/PTCH,并诱导表达目的 蛋白;经Ni-螯合亲和层析得到纯化的融合蛋白.结论 成功构建了重组质粒pET22b/PTCH,并获得纯化的融合蛋白,为进一步研究Hedgehog信号通路在胰腺癌中的发病机制提供了有效工具.
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Shh和Ptch在胆囊癌组织中的表达及其意义
目的 研究表明,Shh和Ptch是Hh传导通路的核心,消化系肿瘤中Hh通路的高度激活状态与消化系肿瘤的发生相关.本研究检测人胆囊腺癌标本中Shh和Ptch的表达,并探讨其意义.方法 采用免疫组化SP法对41例胆囊癌、21例胆囊腺瘤和20例正常胆囊组织中Shh和Ptch基因蛋白进行检测.结果 41例胆囊癌组织标本中Shh的阳性表达率为75.6%(31/41),Ptch的阳性表达率为78.0%(32/41).Shh和Ptch染色主要位于胆囊癌细胞的胞质和胞膜.20例正常胆囊组织中,Shh的阳性表达率为5%(1/20),Ptch的阳性表达率为10%(2/20).21例胆囊腺瘤组织中Shh的阳性表达率为4.7%(1/21),Ptch的阳性表达率为9.6%(2/21),各组间Shh和Ptch阳性表达率差异均有统计学意义(P＜0.001),而在不同性别、不同年龄组(年龄≥60岁及＜60岁)、不同病理组织学分级、Nevin不同分期、组织学不同分化程度、有无淋巴结或远处转移、有无伴发胆囊结石组间的Shh和Ptch阳性表达率表达差异均无统计学意义(P＞0.05).胆囊癌组织中Shh阳性表达率为75.6%与Ptch阳性表达率为78.0%之间存在显著正相关(r=0.72,P＜0.01).结论 原发性胆囊癌的发生可能与Hedgehog-Gli信号通路的异常活动密切相关.
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牙源性角化囊肿中PTCH基因的突变检测
目的检测牙源性角化囊肿(OKC)中PTCH基因突变的发生频率、类型及分布特点,分析散发OKC与伴发痣样基底细胞癌综合征(NBCCS)OKC之间的分子病理联系.方法收集8例OKC新鲜病变组织(4例散发,4例伴发NBCCS),提取DNA,采用PCR直接测序法检测OKC病变组织中的PTCH基因突变. 结果分别于4例NBCCS-OKC和2例散发OKC中检测到6处PTCH基因突变,2例为错义突变,引起1个氨基酸的改变;其余4例突变分别为1～7个碱基插入或缺失,其中3例引起读码框的改变(移码突变),并导致蛋白质的提前截断,1例导致了2个氨基酸的插入. 结论 PTCH基因突变不仅常见于NBCCS-OKC,部分散发OKC病变也可以发生该基因的异常.
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痣样基底细胞癌综合征的遗传学研究进展
痣样基底细胞癌综合征是一种以发育异常和肿瘤发生为特征的常染色体显性遗传性疾病,现已确定此综合征的发生与PTCH基因异常有关,作者着重对此综合征的遗传学研究现状和进展作一综述.
关键词： 痣样基底细胞癌综合征 PTCH基因 遗传学 -
人胰腺癌Hedgehog信号转导途径中PTCH基因表达载体的构建
目的:克隆人胰腺癌Hedgehog信号通路中PTCH基因,构建PTCH基因表达载体.方法:从人胰腺癌细胞株SW1990抽提总RNA,经RT-PCR扩增出PTCH基因,经纯化、回收目的基因PTCH,将其插入表达载体PET22b,转化E.coli BL21,构建重组质粒PTCH/PET22b.结果:从人胰腺癌细胞株SW1990克隆出789 bp的PTCH目的片段,成功构建重组质粒PTCH/PET22b.结论:成功构建重组质粒PTCH/PET22b,为PTCH蛋白表达奠定基础.
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实时荧光定量PT-PCR检测肝细胞癌中PTCH基因的表达
目的 探讨PTCH基因在肝细胞癌组织中的表达及其与肝癌病理分级的关系.方法 提取手术切除18例不同病理分级的人肝癌、癌旁组织和6例胆管结石手术切除的正常肝组织中的总RNA并逆转录为cDNA.应用实时荧光定量RT-PCR法观察人肝细胞癌组织与癌旁组织中PTCH基因的相对表达水平,以及观察人正常肝组织中PTCH基因的表达水平.结果 PTCH在所测18例肝细胞癌组织与癌旁组织中均有表达,在6例正常肝组织中不表达,且在病理分级为Ⅰ和Ⅱ级的癌组织中PTCH的mRNA表达水平显著高于癌旁组织(P<0.01),而在病例分级为Ⅲ级的癌组织中PTCH的mRNA表达水平显著低于癌旁组织(P=0.024).结论 随着肝癌恶性程度的增加PTCT的mRNA表达量呈递减趋势,提示PTCH可能参与了肝细胞的早期癌变过程.
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胶质瘤相关Hedgehog信号通路的研究进展
胶质瘤是中枢神经系统常见的原发性恶性肿瘤,传统治疗主要包括肿瘤切除、放疗及化疗,但肿瘤侵袭性强,术后复发率高.Hedgehog这一高度保守的细胞信号传导通路,广泛参与胚胎的发育和多种病理生理过程,且许多研究已证实该通路在较高比例的胶质瘤中异常活化,在肿瘤发生、发展中的作用也逐渐揭示.这为研究胶质瘤的发病机制及诊断治疗提供新的思路.本文就Hedgehog通路在胶质瘤中的研究进展进行综述.
关键词： 神经胶质瘤 Hedgehog信号通路 PTCH基因 SMO基因 Gli蛋白 -
基底细胞痣综合征
基底细胞痣综合征属常染色体显性遗传性疾病,主要由多发性颌骨囊肿、皮肤基底细胞痣(癌)、骨骼系统异常以及各种其他缺陷所组成的一种复杂少见的综合征,本文就其主要发病机制、临床特点、诊断和治疗作一综述.
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PTCH基因与牙源性囊肿
PTCH基因是Shh/PTCH/Smo信号转导通路中重要的调节因子,近来研究表明PTCH基因的突变与人牙源性囊肿的发生密切相关.本文将PTCH的分子结构、信号转导及与肿瘤和牙源性囊肿发生的关系作一综述.
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PCR-SSCP和DNA测序检测牙源性角化囊肿中PTCH基因的突变
目的 检测牙源性角化囊肿(OKC)中PTCH基因突变的特点.方法 采用PCR-SSCP筛查与DNA直接测序的方法对12例OKC进行PTCH基因突变的检测,其中2例为痣样基底细胞癌综合征(NBCCS)相关OKC,10例为散发OKC.结果 在4例OKC中发现了4处突变,其中2处生殖细胞突变发生在2例NBCCS相关OKC,2处体细胞突变发生在2例散发OKC.另外,还在10例OKC中检测到了8处PTCH基因多态性.结论 NBCCS相关OKC和散发OKC均可发生PTCH基因突变,但突变水平不同,PTCH基因的突变在二者的发病中可能均起重要作用.
关键词： 牙源性角化囊肿 痣样基底细胞癌综合征 PTCH基因
