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  • 重组新城疫病毒rl-RVG抑制人肺腺癌A549系细胞迁移及相关机制

    作者:金惠;步雪峰;王穆彬;苏春香;严玉兰

    目的 观察表达狂犬病毒糖蛋白的重组新城疫病毒(rl-RVG)对人肺癌细胞系A549的迁移影响,初步探讨其可能的机制.方法 重组新城疫病毒rl-RVG直接感染A549细胞为rl-RVG实验组,新城疫病毒LaSota株处理的A549细胞组及未感染病毒的A549细胞组作为对照组.Western blot法检测NDV-HN蛋白及狂犬病毒糖蛋白(RVG),细胞增殖实验测定新城疫病毒使用的佳作用浓度;划痕实验及Transwell法测A549迁移;Western blot法及免疫荧光法检测E-cadherin,MMP2蛋白表达.结果 空白对照组无NDV、rl-RVG表达,rl-RVG仅在感染rl-RVG细胞组有表达,NDV在感染rl-RVG细胞组及感染NDV细胞组皆有表达;与空白对照组相比,rl-RVG及NDV稀释浓度大于5×10-5对细胞的增殖有抑制作用(P<0.05);rl-RVG组迁移的距离及细胞数明显减少(P<0.05).与空白对照组及NDV感染组相比,rl-RVG组E-cadherin蛋白表达水平上调(P<0.05),MMP2蛋白表达水平减弱(P<0.05).结论 重组新城疫病毒rl-RVG能抑制人肺癌细胞系A549的迁移,并可能通过影响肺腺癌A549上皮细胞-间质转化(EMT)过程中的调控因子E-cadherin,MMP2蛋白而对细胞迁移而作用.

  • CRIM1在肝细胞癌中的表达及其与上皮-间质转化关系的初步研究

    作者:范宝珍;杨逵生;柏斗胜

    目的 探讨半胱氨酸丰富跨膜成骨蛋白调控因子1(CRIM1)在肝细胞癌(简称肝癌)中的表达及临床意义,初步探讨CRIM1表达水平与上皮细胞-间质转化(EMT)之间的关联性.方法 回顾性分析2013年1月-2017年12月扬州大学附属苏北人民医院收治的114例肝癌手术患者的临床病理资料,收集患者的术后肝癌组织和对应癌旁组织病理学标本,石蜡切片包埋,并行免疫印迹试验(Western blotting)及免疫组织化学染色检测,观察指标:(1)肝癌组织和癌旁组织中CRIM1蛋白及EMT相关蛋白(E-钙黏蛋白、波形蛋白)表达情况;(2)肝癌组织中CRIM1蛋白表达与患者临床病理因素的关系.运用Western blotting检测肝癌患者癌组织、癌旁组织中CRIM1及EMT相关蛋白(E-钙黏蛋白、波形蛋白)表达水平情况,采用t检验方法进行灰度值分析;采用免疫组化检测肝癌组织和癌旁组织中CRIM1蛋白表达情况,根据组化评分将其分为高表达组、低表达组,并用x2检验和Spearman相关性分析方法分析CRIM1蛋白的不同表达与患者临床病理因素的关系.后通过Kaplan Meier Plotter数据库分析CRIM1与肝癌患者生存率之间的关联性.结果 Western blotting显示肝癌组织和癌旁组织中CRIM1蛋白表达灰度值分别为0.15±0.03、0.80±0.04,E-钙黏蛋白表达水平分别为0.20±0.05、0.56±0.06,两者在癌旁组织中表达水平显著高于癌组织(t =14.21、4.69,P<0.05),而波形蛋白在肝癌组织和癌旁组织中表达水平分别为0.74±0.08、0.45±0.06,在癌组织中表达水平显著高于癌旁组织(t=2.87,P<0.05).免疫组化进一步验证肝癌组织及癌旁组织中CRIM1表达水平,114例患者中肝癌组织中,46例CRIM1蛋白高表达,68例CRIM1蛋白低表达,CRIM1的表达与患者甲胎蛋白水平、肿瘤大小、有无症状具有关联(r=-0.43、-0.34、-0.24,x2 =9.38、5.25、8.12,P<0.05).Kaplan Meier Plotter数据库分析表明,CRIM1高表达与低表达两者生存情况差异有统计学意义(P=0.04).结论 在肝癌中CRIM1的表达与肿瘤EMT过程呈负关联,CRIM1有望成为判断肝癌预后的潜在分子标志物.

  • Slug真核表达载体构建及功能鉴定

    作者:李欣;姜潇;陈滢洁;孙银萍;宋玉华

    目的 在肿瘤发生和发展过程中,上皮细胞-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)是上皮来源恶性肿瘤细胞获得侵袭、转移能力的重要生物学过程,并且与乳腺癌干细胞的生物学特性密切相关.本研究通过构建Slug的慢病毒真核表达载体,探讨Slug基因与EMT之间的关系及对乳腺癌干细胞生物学特性的影响.方法 以军事医学科学院(生物工程研究所)保存的乳腺cDNA文库为模板,通过PCR扩增出Slug的全长编码序列,将其克隆到经BamH Ⅰ和EcoR Ⅰ酶切的PCDH表达载体上,构建成PCDH-Slug真核表达载体,在人293T细胞中转入空载体和重组质粒,利用蛋白质印迹法检测PCDH载体介导的Slug的表达.后将包装质粒共转染293T细胞,包装病毒,感染ZR75-1细胞,经Puro(嘌呤霉素)筛选2周后,得到稳定表达Slug的ZR75-1细胞株,检测ZR75-1细胞对EMT的影响.并将稳定表达Slug的ZR75-1稳定细胞接种于的Matrigel基质胶,倒置显微镜观察ZR75-1稳定细胞株的成管特性.结果 从乳腺文库中获得Slug的全长编码序列,经BamH Ⅰ、EcoR Ⅰ双酶切及DNA测序证实得到PCDH-Slug表达载体,PCDH-Slug真核表达载体和PCDH分别转染293T细胞后,经过蛋白质印迹法检测Slug在293T细胞内有显影,对照组明显减弱,表明Slug-PCDH载体携带的Slug编码序列能够在293T细胞中成功;通过增加puro的含量进行筛选,得到稳定表达的混合克隆即能表达Slug的ZR75-1细胞株,经蛋白质印迹法检测PCDH-Slug 对E-cadherin的影响,以GAPDH为内参,结果比对照组的表达减弱,与预期相符,表明PCDH-Slug载体可以使细胞中E-cadherin的表达减弱;倒置显微镜下ZR75-1稳定细胞株成管明显,表明Slug可以通过调节EMT使乳腺癌细胞具有某些干性特征.结论 调节Slug基因表达可以影响EMT相关蛋白的表达,并以此影响乳腺癌干细胞的生物学特性.

  • 人脐带间充质干细胞对支气管哮喘大鼠气道重塑的治疗作用及可能机制

    作者:常琴;田新利;霍如婕;刘岱;陈俊艳;王旭;田新瑞

    目的 探讨人脐带间充质干细胞(MSCs)对支气管哮喘(简称哮喘)大鼠气道重塑的治疗作用及可能机制.方法 分离、培养人脐带MSCs,采用流式细胞术鉴定人脐带MSCs表面标志物;按随机数字表法将40只Wistar雄性大鼠分为对照组、哮喘组、MSCs组、布地奈德组各10只.对照组以生理盐水致敏和激发,哮喘组以卵白蛋白致敏和激发建立哮喘气道重塑模型,共8周,MSCs组于第35、45及55天激发前30 min尾静脉注射脐带MSCs 0.2ml(1×106个/ml),布地奈德组于激发前2h雾化吸入布地奈德2 mg.末次激发后24 h内留取肺组织及支气管肺泡灌洗液,计算机图像系统分析气道重塑程度,酶联免疫吸附试验检测支气管肺泡灌洗液(BALF)及血清中转化生长因子β1(TGF-β1)含量,免疫组化法检测肺组织上皮钙黏素、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、纤维连接蛋白(Fn)的表达.结果 哮喘组、MSCs组、布地奈德组支气管壁及平滑肌厚度均显著厚于对照组;BALF及血清中TGF-β1含量均显著高于对照组;上皮钙黏素表达均显著低于对照组,α-SMA及Fn表达均显著高于对照组.MSCs组、布地奈德组支气管壁及平滑肌厚度均显著低于哮喘组[(38.40 ±2.50、45.34±0.33)比(80.18±1.75) μm及(15.71 ±0.89、18.57 ±0.67)比(40.97±0.90) μm];BALF及血清中TGF-β1含量均显著低于哮喘组[(3.53±0.43、3.11 ±0.05)比(20.88±0.37) μg/L及(31.07 ±0.89、31.12 ±0.50)比70.58 ±0.39)μg/L];上皮钙黏素表达均显著高于哮喘组[(0.308±0.023、0.296±0.010)比(0.256±0.087)];α-SMA及Fn相对表达量均显著低于哮喘组[(0.438±0.057、0.445±0.027)比(0.521±0.030)及(0.459±0.041、0.458±0.029)比(0.527 ±0.022)](均P<0.01).结论 人脐带MSCs可减轻支气管哮喘气道重塑,其机制可能与抑制TGF-β1诱导的上皮细胞-间质转化有关.

  • 肺泡上皮细胞在肺纤维化中的作用及机制研究进展

    作者:朱剑萍;姚宏伟;陈季强

    肺泡上皮细胞(alveolar epithelial cell,AEC)是肺组织的结构细胞,在肺纤维化(pulmonary fibrosis,PF)发生和发展的过程中起着重要的作用.AEC损伤和凋亡是促进和引起肺纤维增生的原因之一,但并不是PF的必需因素,完整的AEC转染TGF-β1基因后也能诱导PF的发生.体外研究发现,AEC在TGF-β1的诱导下可以向间质细胞转化,但其在PF中所起的作用及分子机制还有待进一步阐明.因此,AEC在PF中的作用与上述因素及其它细胞尤其是成纤维细胞之间的相互作用有关.

  • HIF-1对乳腺癌EMT相关蛋白的调节作用研究进展

    作者:赵美荣;师永红

    目的:总结国内外关于缺氧诱导因子-1(HIF-1)、上皮细胞-间质转化(Epithelial-mesenchymal transition,EMT)在乳腺癌的浸润、转移中的作用,探讨HIF-1对EMT相关蛋白的调节作用.方法:应用CNKI、PUBMED全文数据库检索系统,以“HIF-1、EMT、TWIST、CAIX、N-cad、泛素、HIF-1与EMT”等为关键词检索相关文献.纳入标准:1)HIF-1的节构及功能;HIF-1在肿瘤生长、浸润、转移中的作用;2)EMT的特征及在肿瘤浸润、远处转移中的作用;3)HIF-1对EMT相关蛋白的调节.符合标准并纳入的分析文献23篇.结果:HIF-1、CAIX是肿瘤细胞缺氧的标志,在肿瘤的生长、浸润和转移过程中发挥重要作用;EMT亦参与了肿瘤的浸润和转移;HIF-1通过不同的通路对EMT相关蛋白进行调节.结论:探讨HIF-1对EMT相关蛋白的调节作用,有望为乳腺癌提供新的治疗方案.

  • 鼻咽癌ALDH1+细胞具有上皮细胞-间质转化的性质

    作者:吴爱兵;邓旭斌;杨志雄;沈湘;黎明春;李姝君;吴昆鹏

    目的:探讨鼻咽癌ALDH1+细胞是否具有上皮细胞-间质转化的性质.方法:利用ALDEFLUOR试剂分选鼻咽癌ALDH1+细胞和ALDH1ˉ细胞,Transwell及Boyden小室实验分析ALDH1+细胞和ALDH1ˉ细胞的侵袭、迁移能力;实时定量PCR及Western blot检测E-cadherin、Vimentin、Snail及Twist基因在ALDH1+细胞和ALDH1ˉ细胞mRNA和蛋白表达水平.结果:与ALDH1ˉ细胞相比,ALDH1+细胞侵袭及迁移能力明显高于ALDH1ˉ细胞;而且ALDH1+细胞中E-cadherin的mRNA和蛋白水平明显低于ALDH1ˉ细胞,相反,ALDH1+细胞中Vimentin、Snail及Twist的mRNA和蛋白水平明显高于ALDH1ˉ细胞.结论:鼻咽癌ALDH1+细胞可能具有上皮-间质转化的性质,这将为阐明肿瘤细胞在侵袭、转移中的机制提供理论基础.

  • 锌指转录因子Snail在喉癌中的表达及其与不同亚群喉癌细胞侵袭和转移的相关性研究

    作者:于丹;刘岩;赵雪;程金章;齐欣萌;金春顺

    目的:探讨锌指转录因子Snail在喉鳞状细胞癌中的表达情况及其与临床特征的关系,通过检测不同喉癌细胞亚群中Snail的表达研究其与喉癌侵袭转移的相关性。方法免疫组化法检测吉林大学第二医院耳鼻咽喉头颈外科48例喉癌组织和20例癌旁对照组织手术标本Snail蛋白的表达情况,并分析Snail与临床特征的相关性。采用RT-PCR及Western blot和细胞免疫化学染色检测CD 44+CD 133+、CD 44-和CD 133-不同亚群喉癌细胞中Snail和粘附分子E-cadherin的表达情况,并与侵袭及转移进行相关性探讨。结果 Snail在喉癌组织中表达水平显著高于癌旁对照组织(P<0.01)。Snail的表达与喉癌的临床分期、淋巴结转移、肿瘤分化程度密切相关(P<0.05),而与患者的性别、年龄、临床分型等无关。RT-PCR及Western blot检测结果均证实,Snail在CD 44+CD 133+喉癌细胞中的表达水平明显高于CD 44-和CD 1333-喉癌细胞,而粘附分子E-cadherin在CD 44+CD 133+喉癌细胞中的表达水平明显低于CD 44-和CD 133-喉癌细胞,细胞免疫组化染色证实CD 44+CD 133+喉癌亚群细胞中Snail和E-cadherin的表达呈负相关。结论 Snail的表达与喉癌的侵袭转移密切相关,且在高致瘤亚群CD 44+CD 133+喉癌细胞中呈显著高表达,与粘附分子E-cadherin的表达呈负相关,与喉癌细胞的侵袭和转移具有密切相关性。

  • 转化生长因子-β1诱导A549细胞向间充质细胞转化的作用研究

    作者:郑金旭;张小燕;端礼荣;陈炜;管淑红

    目的:观察重组人转化生长因子-β1(rhTGF-β1)对人肺上皮细胞株(A549)的转化作用.方法:将体外培养的A549用不同浓度的rhTGF-β1干预后,倒置显微镜观察细胞形态学的变化,用MTT法检测rhTGF-β1对A549增殖的影响.48 h收集蛋白用蛋白质印迹和间接免疫化学方法检测间充质细胞表型Fibronectin-EDA(Fn-EDA)表达变化.结果:rhTGF-β1诱导A549向间充质细胞形态转化,在体外对A549增殖无明显影响,上调间充质细胞表型Fn-EDA 表达.结论:rhTGF-β1可诱导A549发生上皮细胞-间质转化(ephethlial-mesenchymal transition,EMT),支持肺上皮细胞发生EMT的观点.

  • 下调Snail基因对子宫内膜癌增殖和侵袭的影响

    作者:朱清;吴礼高;冯振中

    目的 探讨下调Snail基因对子宫内膜癌增殖和侵袭的影响及其机制.方法 培养子宫内膜癌细胞株,构建Snail-shR-NA表达载体,建立下调Snail基因表达的子宫内膜癌细胞株;用CCK-8法检测子宫内膜癌细胞株(Ishikawa)的增殖能力.用Transwell小室结合基质胶(Matrigel)法比较子宫内膜癌细胞株与相应的瞬时转染细胞株在细胞迁移能力及侵袭能力的差异.结果 通过下调Snail基因在细胞内的表达,体外观察子宫内膜癌细胞增殖能力空白对照组高于细胞转染组;迁移与侵袭能力空白对照组高于细胞转染组.结论 Snail基因在子宫内膜癌中表达下调;与抑制子宫内膜癌的增殖和侵袭转移相关,其可能机制与逆转肿瘤的上皮细胞-间质转化过程和共同抑制下游转移靶基因相关.

  • 原发性肝细胞癌中干细胞标志物的表达与上皮细胞-间质转化的关系

    作者:徐军;胡勇;王健;王星星;程兰兰;余宏宇

    目的 探讨原发性肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中肝干细胞标志物的表达及其与上皮细胞-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的关系.方法 采用免疫组化法检测72例HCC中肝干细胞标志物CK19、EpCAM、CD133、CD90的表达及其与EMT相关蛋白E-cadherin、vimentin和Snail的关系.结果 HCC组织中CK19、EpCAM、CD133、CD90阳性率分别为31.9%(23/72)、40.3% (29/72)、51.4% (37/72)、41.7%(30/72),有镜下癌栓和门静脉癌栓组中CK19、EpCAM、CD133、CD90阳性率均高于无镜下癌栓和无门静脉癌栓组,Ⅲ+Ⅳ期、肿瘤数目多发的HCC中EpCAM、CD133、CD90阳性率高于Ⅰ+Ⅱ期和单发的HCC;<46岁、组织学Ⅲ+Ⅳ级、血清AFP≥350 ng/ml的HCC中CK19阳性率高于其相应对照组.E-cadherin与其余两种EMT标志物均呈负相关(vimentin:r=-0.572,P=0.004;Snail:r=-0.597,P=0.003),CK19、Ep-CAM、CD90阳性HCC组中vimentin阳性强度均高于阴性组,CD133阳性HCC组中E-cadherin阳性强度低于CD133阴性组,vimentin、Snail阳性强度均高于CD133阴性组.结论 与CK19、EpCAM、CD90相比,CD133阳性的肝癌干细胞与EMT的关系更加密切,CD133可作为同时针对HCC肝干细胞和EMT的治疗靶点.

  • PTEN、P130Cas与皮肤瘢痕癌上皮间质转化的关系研究

    作者:刘赞;周捷;张丕红;任利成;张明华;曾纪章;何志友;梁鹏飞

    目的 探讨磷酸酯酶及张力蛋白同源物(PTEN)、P130 Crk相关底物(P130Cas)与瘢痕癌上皮间质转化(EMT)的关系.方法 收集8例瘢痕癌患者的瘢痕癌、癌旁瘢痕和正常皮肤组织,采用免疫组织化学法(S-P法)检测正常皮肤、瘢痕、瘢痕癌组织中PTEN、P130Cas、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)的表达.结果 PTEN、P130Cas、E-cadherin在瘢痕癌、瘢痕、正常皮肤组织的表达水平差异均有统计学意义(P<0.05);Vimentin在正常皮肤、瘢痕组织内呈阴性表达,两者差异无统计学意义(P>0.05),但与瘢痕癌组织相比较,差异均有统计学意义(P<0.05).PTEN与P130Cas在瘢痕癌中的表达呈负相关(r=-0.78,P=0.023);瘢痕癌中E-cadherin的表达与PTEN的表达呈正相关(r=0.83,P=0.011),与P130Cas呈负相关(r=-0.74,P=0.035),PTEN、P130 Cas与Vimentin的表达不相关.结论 PTEN与P130Cas可能通过影响上皮间质转化现象在瘢痕恶变过程中起重要作用.

  • 苦瓜Ⅰ型核糖体失活蛋白对膀胱癌迁移能力的影响及机制研究

    作者:庞昆;陈波;郝林;史振铎;周荣升;臧光辉;韩从辉

    目的 研究苦瓜Ⅰ型核糖体失活蛋白(MAP30)对膀胱癌迁移能力的影响及机制.方法 采用MTT法计算MAP30对人膀胱癌5637和T24细胞的半数抑制浓度(IC50)后,采用此浓度的MAP30通过细胞划痕迁移实验和Transwell细胞迁移实验来评估两种细胞的迁移能力,并用Western blot分别检测两种肿瘤细胞加入MAP30后基质金属蛋白酶(MMPs)和黏附分子N-cadherin等蛋白的表达.结果 细胞划痕迁移实验:5637细胞加药组和对照组在8h和22 h迁移率比较差异均有统计学意义(P<0.05),T24细胞加药组和对照组间8h迁移率差异无统计学意义(P>0.05),在22 h迁移率差异有统计学意义(P<0.05).MAP30干预后,人膀胱癌5637细胞和T24细胞中Vimentin、Fibronectin、MMP-2、MMP-9、N-Cadherin蛋白的表达明显降低.人膀胱癌5637细胞E-Cadherin表达降低,但人膀胱癌T24细胞未检测到目的条带.结论 苦瓜Ⅰ型核糖体失活蛋白MAP30通过抑制上皮-间质细胞转化(EMT)途径和抑制MMPs表达,可以有效抑制人膀胱癌5637和T24细胞的迁移能力.

  • 2型糖尿病肾病患者肾组织中 STOML2的表达及作用

    作者:陈浩雄;傅君舟;何凤;刘日光

    目的:探讨2型糖尿病肾病(DN)患者肾组织中 STOML2的表达及作用。方法免疫组化检测临床2型糖尿病肾病患者肾组织 STOML2的表达及定位,采用慢病毒转染方法建立稳定过表达 STOML2的 HK-2细胞系,并应用 Western blot 检测肾小管上皮细胞钙粘蛋白(E-cadherin)、Fibronectin 和 STOML2的表达。结果 STOML2在 DN患者肾组织的肾小管上皮细胞胞浆中表达明显升高。在高糖刺激 HK-2细胞建立的 EMT 模型中,STOML2呈时间依赖表达上调。STOML2稳定高表达时,E-cadherin 表达下调,而 Fibronectin 明显上调,即能促进肾小管上皮细胞发生EMT。结论 STOML2可能通过促进肾小管上皮细胞向间充质细胞分化,进而参与糖尿病肾病肾脏纤维化的发生发展。

  • E-cadherin在黏附连接的调控机制及肿瘤EMT中的作用研究进展

    作者:杨心治;钟警(综述);文格波(审校)

    上皮组织中细胞间连接主要由3种基本结构构成并维持稳定:(1)紧密连接;(2)黏附连接;(3)桥粒体[1]。黏附连接的形成主要包括以下几个步骤:(1)钙离子介导的上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)胞外段发生同嗜性结合;(2)连环蛋白(catenin,主要包括β-catenin 和p120-catenin )被招募至 E-cadherin 的细胞质段;(3)借助catenin,E-cadherin终连接到肌动蛋白细胞骨架形成结构和功能完整的黏附连接。而由钙离子介导的E-cad-herin的嗜同性结合是整个过程中的关键步骤。有学者认为,E-cadherin与骨架蛋白连接的过程极可能由钙粘素/连环蛋白复合物调节,复合物形成后大量汇聚α-catenin,而α-catenin的大量汇聚间接促使E-cadherin与细胞骨架蛋白--肌动蛋白(actin)连接。

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