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联合检测外周血T淋巴细胞及DNT细胞在恶性肿瘤早期诊断中的应用
目的 探讨良、恶性肿瘤鉴别和恶性肿瘤早期诊断的新方法.方法 采用流式细胞仪测定五组良、恶性肿瘤患者(肺肿瘤组、乳腺肿瘤组、胃肿瘤组、肝肿瘤组、肠道肿瘤组)外周血T淋巴细胞和DNT细胞的表达水平,分析五组良、恶性肿瘤患者外周血T淋巴细胞及DNT细胞的差异.结果 五组恶性肿瘤组外周血CD4+/CD8+比值均明显低于同种良性肿瘤组,DNT细胞比例均明显高于同种良性肿瘤组.联合外周血T淋巴细胞亚群及DNT细胞检测恶性肿瘤的灵敏度、特异度分别为89.2％、92.7％.结论 利用外周血T淋巴细胞亚群与DNT细胞联合检测,将明显提高恶性肿瘤诊断的灵敏度和特异度,有较大的临床应用价值.
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联合检测血清CA15-3及外周血DNT细胞在乳腺良、恶性肿瘤鉴别及乳腺恶性肿瘤早期诊断中的应用
目的 探讨乳腺良、恶性肿瘤鉴别和乳腺恶性肿瘤早期诊断的新方法.方法 采用流式细胞仪测定乳腺肿瘤患者外周血DNT细胞及血清CA15-3的表达水平.结果 血清CA15-3及外周血DNT细胞检测乳腺恶性肿瘤的灵敏度、特异度分别为60.0％、96.3％;55.8％、71.3％.联合血清CA15-3及外周血DNT细胞检测,并联实验将乳腺恶性肿瘤的灵敏度提高至82.3％,串联实验将特异度提高到98.9％.结论 利用血清CA15-3与DNT细胞联合检测,将明显提高乳腺恶性肿瘤诊断的灵敏度和特异度,有较大的临床应用价值.
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联合检测血清CEA及外周血T淋巴细胞、DNT细胞在肺癌诊断中的应用
目的 探讨肺部良、恶性病变鉴别的新方法.方法 采用流式细胞仪测定肺癌患者、肺良性病变患者及健康体检者三组血清CEA及外周血T淋巴细胞亚群与DNT细胞的表达水平.结果 联合检测血清CEA及外周血T淋巴细胞亚群与DNT细胞可将肺癌检出的灵敏度、特异度提高至90.8％、98.9％.结论 利用血清CEA及外周血T淋巴细胞亚群与DNT细胞联合检测,将明显提高肺癌诊断的灵敏度和特异度,有较大的临床应用价值.
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DNT细胞对肿瘤细胞作用的研究进展
DNT细胞(CD4-CD8-double-negative T cells)是新发现的一种免疫细胞,其特点是细胞表而既不表达CD4分子同时也不表达CD8分子.近年来,通过免疫疗法可以使肿瘤患者的愈后及生存质量得到很大的改善和提高.免疫细胞可以通过免疫调节或直接杀伤的途径作用于肿瘤细胞,因此研究DNT细胞对肿瘤细胞的作用将有重要意义.
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NKG2D受体通路与DNT细胞杀伤作用的关联性分析
NKG2D受体是一种表达于多种免疫细胞表面的激活型受体.目前发现与它结合的配体有8种,可以分为两大类:MHCⅠ类相关蛋白和UL16结合蛋白.NKG2D受体与其配体差异存在于正常组织与癌组织中.多项研究发现,NKG2D受体介导免疫细胞杀伤肿瘤,在机体抵抗肿瘤的发生发展中起到不可替代的作用.“过继免疫”通过寻找针对癌细胞有特异杀伤作用的免疫细胞并扩增其数量后输入体内,用于癌症的治疗.近年来学者们发现,DNT细胞(CD4 CD8-T细胞)对癌细胞有明显的杀伤作用,但具体机制尚不清楚,本文在总结NKG2D受体介导的杀伤通路的基础上,探讨、分析其与DNT细胞杀伤作用的关联性,目的在于研究DNT细胞的杀伤机制.
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胰腺癌的免疫治疗及DNT细胞在其治疗中的应用
胰腺癌是一种恶性度高、预后极差的恶性肿瘤,起病隐匿,易早期转移,进展迅速,尽管临床上不断地提高胰腺癌的切除率,但是术后的生存时间并没有明显延长,且胰腺癌对放疗、化疗均不敏感,因此目前尚无有效的治疗方法.过继免疫治疗是一种治疗恶性肿瘤的重要辅助方法,是指在不损伤患者自身免疫系统的前提下,通过向患者体内注射有效的免疫细胞,杀伤患者体内的恶性肿瘤细胞.近几年发现的DNT细胞,即TCR+、CD3+、CD4-、CD8-T细胞,是具有独特免疫调节功能的T细胞亚群,其表达的Fas/FasL、TNF/TNFR、MHC Ⅰ等,在抗肿瘤、免疫调节、免疫抑制等方面具有重要的作用.
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双阴性T细胞在肿瘤免疫治疗中的研究进展
双阴性T细胞(即DNT细胞)是一种细胞表型为TCR+ CD3+ CD4-CD8-的特殊的调节性T细胞,分为αβT和γδT两群,在调节免疫反应中起着十分重要的作用.既往人们对DNT细胞研究主要局限于自身免疫性疾病和器官移植免疫方面.近年来,DNT细胞的过继免疫治疗作为一种新型的抗肿瘤方法逐渐走进公众的视野.本综述主要对DNT细胞来源分群、抗肿瘤作用及其可能的作用机制进行描述.
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慢性丙型肝炎患者DNT细胞及T细胞亚群的研究
目的 探讨外周血中CD3 + CD4 - CD8 -( double negative T,DNT )细胞及T淋巴细胞亚群在慢性丙型肝炎(chronic hepatitis C,CHC)患者中的表达及意义.方法 利用流式细胞仪对92例CHC患者、93例正常健康人外周血中的DNT细胞及T细胞亚群进行检测,并对比分析两者的差异.结果 CHC患者DNT细胞百分比(8.57％±6.16％)高于正常对照组(6.78％±4.50％)(P＜0.05),其绝对数在两者间比较,差异无统计学意义(P＞0.05).CHC患者CD4+％,CD4+/CD8+比值低于正常对照组(P值均＜0.001),CD8+％高于正常对照组(P＜0.001).结论 CHC患者DNT细胞百分比显著升高及T淋巴细胞亚群比例改变,可能是丙型肝炎病毒感染慢性化的重要原因之一.
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强直性脊柱炎患者外周血CD4-CD8-双阴性T细胞的检测及意义
目的 通过检测CD4-CD8-双阴性(DN)T细胞在强直性脊柱炎(AS)外周血中的表达水平,探讨DNT细胞与AS发病机制的关系以及在AS诊断治疗中的临床应用价值.方法 采用流式细胞技术检测30例未经治疗的活动期AS患者及30例健康对照人群外周血中的CD4+T细胞亚群、CD8+T细胞亚群、DNT细胞的表达水平,并探讨DNT与Bath AS功能指数(BASFI)、Bath AS测量指数(BASMI)、病程、年龄及实验室炎性指标血沉(ESR)、超敏C反应蛋白(hs-CRP)的相关性.结果 AS患者DNT细胞水平为(8.62±3.09)％较正常对照组的(5.47±2.78)％明显升高(P＜0.001),CD4+T细胞亚群和CD4+/CD8+比值分别为(29.24±9.22)％和(0.96±0.49)较正常对照组的(40.09±6.86)％和(1.70±0.67)显著降低(P＜0.001),CD8+T细胞亚群水平为(32.91±6.86)％较正常对照组的(25.60±5.97)％明显增高(P＜0.001),AS患者外周血DNT细胞水平与CD4+呈负相关,r=-0.497(P＜0.01),和CD4 +/CD8+呈负相关,r=-0.520(P＜0.01),与CD8+呈正相关,r=0.371(P＜0.05),与hs-CRP呈正相关,r=0.439(P＜0.05),与BASMI呈正相关,r=0.729(P＜0.001),与BASFI呈正相关,r=0.636(P＜0.001),与AS患者的年龄、病程、ESR均无明显相关性.结论 AS患者外周血DNT细胞水平明显升高,并与AS疾病活动存在相关性,检测DNT细胞有助于研究AS的发病机制,并有助于早期发现病情活动,为判断病情和制定治疗策略提供更好的依据.
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肝癌患者DNT细胞和T细胞亚群检测的临床意义
目的 探讨肝癌患者外周血中DNT细胞和T淋巴细胞亚群的变化及临床意义.方法 利用流式细胞仪对43例肝癌、36例健康人外周血中的DNT细胞及T细胞亚群进行检测及统计学检验.结果 肝癌患者DNT细胞百分比(9.1±5.5)％高于正常对照组(4.8±.1.4)％,差异有统计学意义(P＜0.05)；肝癌组Th细胞、CD4+/CD8+比值低于对照组,Tc细胞高于对照组,差异有统计学意义(均P＜ 0.01).结论 肝癌患者DNT细胞百分比升高及T淋巴细胞亚群比例改变,提示肝癌患者免疫功能异常,为肝癌发病机制研究及免疫治疗提供理论依据.
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MHV-3诱导的暴发性肝炎小鼠肝脏表达IL-9免疫细胞的变化
目的 研究MHV-3病毒感染所致的暴发性肝炎小鼠肝脏T淋巴细胞亚群胞内细胞因子IL-9表达的变化,以探讨IL-9在该疾病模型中的作用.方法 利用MHV-3病毒诱导Balb/cJ小鼠暴发性肝炎模型,采用流式细胞术检测肝脏分泌IL-9的淋巴细胞亚群比例的变化.结果 随着MHV-3感染时间的延长,肝脏分泌IL-9的CD4+T细胞比例由感染前的1.87±1.36％于48小时升高到4.77±0.42％,差异显著(P＜0.05)；而分泌IL-9的CD4-CD8 (DN)T细胞比例则于感染后72小时达峰值7.83±3.30％,显著高于感染前(3.57±1.82,P＜0.05)和24小时时(3.60±0.85,P＜0.05).结论 随着感染时间延长,肝脏分泌IL-9的CD4+T和CD4-CD8-(DN)T淋巴细胞显著升高,说明IL-9可能参与了MHV-3诱导的暴发性肝炎小鼠免疫诱导的肝脏损伤发病过程.
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sTRAIL及受体TRAIL-R1在DNT细胞抑制胰腺癌细胞中的作用及意义
目的 探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(sTRAIL)与其受体TRAIL-R1在DNT细胞杀伤胰腺癌细胞中的作用及意义.方法 采用抗体吸附法培养外周血中分离的DNT细胞,ELISA法检测其细胞培养上清液中的sTRAIL水平.采用qPCR、Western blot法检测TRAIL-R1在5株胰腺癌细胞株中的表达,免疫组织化学法检测48例胰腺癌组织标本中TRAIL-R1的表达情况,分析其与病理参数之间的关系.结果 DNT细胞数目逐渐增多,其培养液中sTRAIL与对照组相比浓度明显升高(t=17.24,P＜0.05).qPCR检测受体TRAIL-R1在5株胰腺癌细胞中均有表达,Western blot法检测TRAIL-R1受体表达发现在胰腺癌细胞系CFPAC-1中表达高,在MIA PaCa-2和panc-1中表达较高,BXPC-3中表达较低,在Capan-1细胞系中不表达.TRAIL-R1在胰腺癌组的阳性表达率及染色强度低于相应的癌旁组织(x2=7.43、12.48,P＜0.05);TRAIL-R1的表达与染色强度有关(x2=12.48,P＜0.05).结论 外周血来源的DNT细胞可分泌sTRAIL,sTRAIL与胰腺癌细胞和组织所表达的受体TRAIL-R1结合诱导细胞凋亡,可能是DNT细胞抑制胰腺癌细胞增殖的机制之一.
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DNT细胞的扩增及其对胰腺癌Panc-1细胞的影响
目的 探讨TCR+CD+3CD-4CD-8(DNT)双阴T细胞对人胰腺癌细胞系Panc-1的影响.方法 应用抗体吸附法扩增人外周血DNT细胞,采用流式细胞仪检测所得细胞表型,选择多组对照观察DNT细胞对裸鼠荷瘤的生长曲线和抑瘤率的影响,应用RT-PCR检测不同浓度DNT细胞与Panc-1细胞体外培养后Fas/FasL的表达情况.结果 经过12 d左右的培养,每孔细胞数量可达1.0×106个以上.流式细胞仪鉴定细胞表型为CD+3CD-4CD-8.与阴性对照组比较,实验组和阳性对照组对裸鼠荷瘤的肿瘤生长曲线及抑瘤率的差异有统计学意义,实验组的抑瘤率达44.75%.DNT细胞与胰腺癌细胞共培养后,胰腺癌细胞在mRNA水平的Fas表达量明显上升,差异有统计学意义;FasL表达略有下调,差异无统计学意义.结论 DNT细胞能抑制胰腺癌Panc-1细胞株增殖,Fas/FasL途径为其作用机制之一.
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佛波酯对人外周血DNT细胞表面抗原检测的影响及检测方法的探讨
目的 探讨佛波酯(PMA)对人外周血淋巴细胞中TCRαβ+CD4-CD8-T细胞(DNT细胞)表面抗原检测的影响及检测方法的探讨.方法 分离人外周血单个核细胞,分别在激活前后对细胞进行TCRαβ、CD4和CD8荧光单抗标记,流式细胞术计数DNT细胞.结果 A方法(先激活,再标记),淋巴细胞表面抗原CD4分子显著下调,DNT细胞与TCRαβ+CD4+CD8+T细胞、TCRαβ-CD4-CD8-T细胞和TCRαβ-CD4+CD8+F细胞间无法设门,与正常对照比较,DNT细胞计数显著增加;B方法(先标记,再激活),DNT细胞与其他细胞群设门清晰,与正常对照比较,对DNT细胞计数无明显影响;C方法(先标记,再联合激活),DNT细胞检测结果与B方法相同.结论 采用A方法(常规方法),不能对活化后的DNT细胞进行准确计数;采用B和C方法(改进方法),可以对活化后的DNT细胞进行准确计数,避免了磁珠或(和)流式分选,为其计数和表面抗原检测提供了一种新的简便方法.
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外周血DNT细胞和T细胞亚群检测在乙型肝炎病毒感染者诊断中的意义
目的 观察外周血DNT细胞和T细胞亚群检测在乙型肝炎病毒感染者诊断中的临床意义.方法 正常对照组(A组)30例,慢性乙型肝炎组(B组)40例,慢性重型乙型肝炎组(C组)35例,分别采用流式细胞分析技术检测外周血中DNT细胞及外周血T细胞亚群CD4+T细胞、CDs+T细胞、CD4+/CD8+表达百分比,进行各T细胞亚群百分比统计学分析.结果 B组和C组的DNT细胞绝对数和A组比较差异无统计学意义(P＞0.05),DNT细胞占T淋巴细胞的百分比和A组比较明显增高,差异有统计学意义(P＜0.05);C组较B组增高更为显著,两组比较差异具有统计学意义(P＜0.01).B组和A组比较,CD4+降低较明显,差异具有统计学意义(P＜0.05);C组和B组比较,CD4+亚群和CD4+/CD8+比值均降低,CD8+亚群升高,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 乙型肝炎病毒感染者体内存在DNT百分比细胞升高及T细胞亚群失衡;这可能是慢性乙型肝炎向慢性重型肝炎发展的因素之一.
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不同临床类型小鼠肝炎模型T细胞亚群的初步研究
目的 探讨3型鼠肝炎病毒(MHV-3)感染不同品系小鼠所致不同临床疾病类型小鼠肝炎模型后体内T细胞亚群的动态变化.方法 取Balb/cJ和A/J小鼠各8只,腹腔注射100 pfu 3型鼠肝炎病毒(MHV-3),采用流式细胞仪检测感染后0、24、48、72 h外周血、脾细胞悬液以及肝脏组织中T淋巴细胞亚群包括CD3+CD4+CD8-、CD3+CD4-CD8+及CD3+CD4-CD8-T(DN T) 细胞的细胞数及各自在T淋巴细胞中所占比率.结果 Balb/cJ小鼠于感染后24 h外周血、脾脏以及肝脏T淋巴细胞中DN T细胞比率明显升高直至小鼠3 d后全部死亡,CD3+CD4+CD8-和CD3+CD4-CD8+T淋巴细胞比率相应下降;A/J小鼠感染后24～96 h外周血和脾脏T细胞各亚群变化不明显.结论 两种不同品系小鼠感染MHV-3 后的不同转归及DN T 细胞比率的不同改变提示DN T 细胞可能在病毒性肝炎发生、发展中起着一定的作用.
