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基因转染Smad7对高糖介导大鼠肾小管上皮细胞转分化的影响
目的 探讨Smad7对高糖介导.肾小管上皮细胞转分化的影响.方法 体外培养转染Smad7的大鼠近端肾小管上皮细胞株(NRK52E细胞),分为强力霉素(Dox)诱导组和未加强力霉素的对照组,前者予Dox诱导24 h后,给予高糖刺激,后者不加Dox诱导.采用免疫细胞化学方法检测p-Smad2/3核转位情况;Western blot方法检测Smad7、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、E-钙黏素(E-cadherin)蛋白的表达水平.结果 成功构建了Dox调控的可上调表达Smad7的NRK52E细胞.NRK52E细胞在基础状态下可表达低水平p-Smad2/3(16.1%),与对照组比较,上调表达Smad7显著抑制高糖介导的NRK52E细胞p-Smad2/3核转位(30.3% vs 58.5%,P<0.01).抑制α-SMA蛋白的表达,逆转高糖介导的NRK52E细胞E-Cadherin蛋白的下调表达.结论 基因转染上调表达Smad7可通过抑制Smad2/3的活化和核转位而阻抑高糖介导的肾小管上皮细胞转分化.
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软肝颗粒对肝纤维化大鼠转化生长因子-β1/Smads信号通路的影响
目的：探讨软肝颗粒对肝纤维化大鼠转化生长因子-β1(TGF-β1)/Smads 信号通路的影响。方法105只Wistar大鼠，按随机数字表法随机分为正常对照组，模型组，秋水仙碱组，大黄?虫丸组，软肝颗粒高、中、低剂量组，每组15只。采用四氯化碳和高胆固醇饮食诱导肝纤维化。模型制作后，软肝颗粒低、中、高剂量组分别灌胃软肝颗粒混悬液3.600、7.200、14.400 g/(kg?d)；大黄?虫丸组灌胃大黄?虫丸混悬液0.180 g/(kg?d)；秋水仙碱组灌胃秋水仙碱混悬液0.108 mg/(kg?d)；正常对照组和模型组以等体积蒸馏水灌胃。均连续灌胃8周。采用免疫组化染色法检测肝组织TGF-β1、Smad3、Smad7表达，运用 RT-PCR 技术检测肝组织 TGF-β1、Smad3、Smad7 mRNA 表达。结果与正常对照组比较，模型组TGF-β1[(2.59±0.99)比(0.43±0.21)]、Smad3[(2.56±0.67)比(0.41±0.18)]蛋白及 TGF-β1 mRNA[(2.25±0.21)比(0.71±0.09)]、Smad3 mRNA[(2.34±0.03)比(0.78±0.12)]表达显著升高（P均＜0.01）。与模型组比较，软肝颗粒高剂量组TGF-β1[(1.12±0.27)比(2.59±0.99)]、Smad3蛋白[(1.05±0.34)比(2.56±0.67)]表达下降，Smad7蛋白表达[(2.33±0.62)比(0.36±0.18)]升高（P＜0.01），TGF-β1 mRNA[(1.09±0.11)比(2.25±0.21)]、Smad3 mRNA[(1.10±0.02)比(2.34±0.03)]表达下降，Smad7 mRNA[(1.18±0.13)比(0.38±0.11)]表达升高（P＜0.05）。结论软肝颗粒可通过下调TGF-β1、Smad3，上调Smad7调节肝纤维化大鼠TGF-β1/Smads信号通路。
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TGF-β1/Smads信号蛋白在溃疡性结肠炎大鼠肺损害中的表达及意义
目的:检测溃疡性结肠炎大鼠肺肠组织TGF-β1/Smads信号蛋白含量,探讨其肺损害的机制.方法:SD大鼠60只随机分为正常组(30只)和模型组(30只),模型组构建三硝基苯磺酸诱导的溃疡性结肠炎动物模型,正常组大鼠予等量0.9％氯化钠溶液灌肠.实验过程中观察大鼠一般情况,首次造模后第8、29、50天取肺、结肠组织行HE染色观察病理形态改变,电镜观察组织超微结构改变,免疫组化法检测肺肠组织TGF-β1/Smads信号蛋白表达.结果:与正常组比较,模型组大鼠肺、肠组织均出现病理形态改变;模型组大鼠第8、29天结肠组织TGF-β1、Smad3表达含量显著升高(P＜0.01,P＜0.05),第29、50天肺组织TGF-β1、Smad3表达显著升高(P＜0.01,P＜0.05).结论:溃疡性结肠炎模型大鼠出现肺部损伤,其损伤程度随结肠病变进展而加重,TGF-β1/Smads信号蛋白可能通过对结肠和肺的损伤修复作用介导“肠病及肺”的病理传变过程.
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清热止血颗粒对IgA肾病模型大鼠TGF-β1/Smad信号转导通路的影响
IgA肾病的病理改变主要是免疫复合物IgA在系膜区的沉积和系膜的增生,TGF-β1是目前发现重要的致细胞增生和致纤维化细胞因子.TGF-β效应的发挥与Smad蛋白的信号转导密切相关.
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Smad蛋白及其对中医药防治肝纤维化作用的研究进展
TGF-β信号传导通路在肝纤维化进展过程中对细胞生长的控制和细胞外基质的形成起着重要的作用.Smad蛋白是目前研究发现的TGF-β家族受体激酶的关键作用底物,可以双向调节FGF-β的反应,是肝纤维化研究的关键之一.进一步阐明该通路的结构、功能及中医药对该通路的影响,必将有助于进一步揭示中医药防治肝纤维化的分子机制,为中医药防治肝纤维化提供物质基础.
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排毒保肾丸对肾纤维化大鼠肾组织TGF-β1/Smad信号通路的影响
目的 观察排毒保肾丸对5/6肾切除大鼠肾纤维化的影响并探讨其可能作用机制.方法 将50只SD大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组、排毒保肾丸组、尿毒清颗粒组,每组10只.除正常组、假手术组外,其余各组大鼠均采用5/6肾切除方法建立肾纤维化模型.排毒保肾丸组和尿毒清颗粒组分别予排毒保肾丸1.0g/(kg·d)和尿毒清颗粒3.33g/(kg·d)灌胃,正常组、假手术组、模型组予2ml生理盐水灌胃,每日1次.各组均灌胃4周后处死大鼠,取残肾组织行HE、PAS、PASM、Masson染色病理观察,检测肾组织转化生长因子β1 (TGF-β1)、Smad2、Smad7蛋白及其mRNA的表达水平.结果 病理结果显示,模型组大鼠局灶节段性肾小球缺血性皱缩,较多炎性细胞浸润伴轻至中度纤维化;与模型组比较,排毒保肾丸组残肾组织病变程度减轻.与正常组、假手术组比较,模型组大鼠TGF-β1蛋白及其mRNA、Smad2蛋白及其mRNA表达水平均显著升高,Smad7蛋白及其mRNA表达水平均显著下降(P＜0.01);与模型组比较,排毒保肾丸组和尿毒清颗粒组TGF-β1蛋白及其mRNA、Smad2蛋白及其mRNA表达水平均显著降低,而Smad7蛋白及其mRNA表达水平均显著升高(P＜0.01).结论 排毒保肾丸有抗肾纤维化的作用,下调肾组织TGF-β1、Smad2的表达和上调Smad7的表达可能是其作用机制之一.
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转化生长因子β1抑制食管癌细胞的生长
检测食管癌细胞系EC9706对转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)抑制生长作用的反应,并探讨其抑制肿瘤生长的机制.检测TGF-β1信号转导因子在食管癌细胞系EC9706中的表达.TGF-β1(10 μg/L)刺激后食管癌细胞系EC9706细胞的增殖,信号转导因子在细胞内的转移和表达以及TGF-β1信号的靶基因p15、p16、p21、p27蛋白的改变情况.结果表明食管癌细胞系EC9706中TGF-β1信号转导因子均有表达,TGF-β1对食管癌细胞系EC9706有着较强的抑制生长作用.在TGF-β1刺激后磷酸化的Smad2以及Smad7在细胞内发生转移,而且蛋白表达量发生改变.此外TGF-β1诱导p27蛋白的表达升高,刺激后24h,p27表达量是刺激前和刺激后12h的3.2和2.7倍,而p15、p16、p21无变化.这些结果提示,TGF-β1信号通过下游Smad因子传入细胞核,并诱导p27表达增高,来抑制食管癌细胞的增殖.
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TGFβ1,CTGF信号传导通路在小鼠肝纤维发生中的作用
目的 探讨实验性肝纤维化小鼠肝组织中TGFβ1,CTGF信号传导通路的变化及意义.方法 将小鼠随机分为对照组、肝纤维化模型组(腹腔注射10％的CCl4橄榄油),8周后应用酶法和放射免疫法检测血清ALT、HA水平,HE染色、Masson染色观察肝组织炎性反应及纤维化程度,免疫组化法和RT-PCR法检测肝组织α-SMA、TGFβ1、TGFβRⅡ、Smad3、Smad7、CTGF蛋白和mRNA水平.结果 模型组血清ALT及HA水平明显高于对照组；肝组织α-SMA、TGFβ1、TGFβRII、Smad3及CTGF(8.21±1.48、5.52±0.89、0.52±0.04、5.86±1.49、5.49±0.29)蛋白表达明显高于对照组(1.51±0.95、1.31±0.81、0.37±0.04、1.41±0.95、0.31±0.19)(P＜0.01)；而模型组肝组织Smad7( 1.83±0.62)蛋白和mRNA表达较对照组(6.32±1.18)显著降低(P＜0.01).各指标mRNA表达与蛋白表达一致.结论 TGFβ1和CTGF信号传导通路过度活化,Smad表达和负调节TGFβ、CTGF信号传导通路的功能被抑制可能与肝纤维化的发生和发展密切相关.
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Th17细胞与Smads蛋白家族间的相互作用研究进展
Th17细胞作为一种新发现的Th细胞亚型主要分泌IL-17、IL-17F和IL-21,被认为在清除特定的病原体和诱导自身免疫组织炎症反应中发挥重要作用.Smads蛋白是重要的TGF-β受体胞内激酶的底物,磷酸化后可穿越胞膜,因此既是胞内信号分子,又起到转录子的作用.本文对当前国内外有关Th17细胞分化及功能的研究进展以及Th17细胞与Smad蛋白之间的相互作用做简要综述.
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芪苈强心提取物阻断Smad3信号通路抑制血管紧张素Ⅱ诱导的心脏成纤维细胞转分化
目的 观察芪苈强心提取物对血管紧张素Ⅱ(AngiotensinⅡ,AngⅡ)诱导的心脏成纤维细胞转分化的影响,探讨芪苈强心胶囊在改善心肌重构方面的分子机制.方法 采用胰酶消化法培养新生SD大鼠的心脏成纤维细胞(Cardiac fibroblasts,CFs),传代后将CFs细胞随机分为:对照组,AngⅡ(10-6mol/1)组,芪苈强心提取物(0.5mg/ml)组和AngⅡ+芪苈强心提取物组.以芪苈强心预处理CFs细胞1h,再以AngⅡ干预6h,采用免疫荧光和Western Blot等方法分别检测α-SMA,TGF-β1以及TGF-β1下游信号通路中Smad3和Smad6蛋白及磷酸化表达水平.结果 与对照组相比,AngⅡ组CFs的α-SMA、TGF-β1蛋白表达增加.与AngⅡ组比较,芪苈强心提取物能减少AngIⅡ诱导的α-SMA、TGF-β1蛋白表达,同时降低Smad3蛋白的磷酸化水平,增加Smad6蛋白的表达.结论 芪苈强心提取物通过调控TGF-β1/Smads信号通路,实现抑制AngⅡ诱导的CFs转分化,这可能是芪苈强心改善心肌重构的重要分子机制之一.
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β转化生长因子/smad信号通路与慢性移植肾肾病
慢性移植肾肾病(chronic allograft nephropathy, CAN)是移植后期肾功能丧失的主要原因.尽管CAN发病机制仍未阐明,但β转化生长因子(transforming growth factor- beta, TGF- β)作为关键的促纤维化细胞因子已得到公认,其能导致细胞外基质(extracellular matrix, ECM)的集聚和肾脏的慢性损伤,在CAN的发病机制中起重要作用[1,2].smad蛋白为TGF- β 家族信号从受体到核的细胞内转导分子,其发现使TGF- β 信号转导机制的研究进展迅速.本文就smad蛋白所介导的TGF- β 信号转导与CAN的关系作一综述.
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Smurf2对增生性瘢痕TGF-β1信号通路负向调节因子Smad7的影响及调控机制
目的 探讨Smurf2对增生性瘢痕成纤维细胞TGF-β1/Smad信号转导通路负向调节因子Smad7的影响及调控机制.方法 标本来自暨南大学附属广州市红十字会医院2014年1月至10月收治的8例需要手术的增生性瘢痕患者,年龄1岁8个月至7岁,瘢痕增生的时间在2～12个月,以同一患者术中剩余正常皮肤作为对照.采用组织块培养法分离后传代培养人增生性瘢痕成纤维细胞和正常皮肤成纤维细胞,取第3～5代细胞进行实验.①采用蛋白质印记法检测2组细胞中Smad7的蛋白表达水平;②加入外源性TGF-β1(10 ng/ml)作用0 min、5 min、15 min、30 min、1 h、2 h、12 h后,采用RT-PCR和蛋白质印记法分别检测2组细胞中Smad7的mRNA和蛋白表达水平;③收集增生性瘢痕成纤维细胞和正常皮肤成纤维细胞的细胞裂解液,分别加入泛素化混合物于37℃孵育1 h、2 h、6 h,采用蛋白质印记法检测2组细胞中Smad7的体外降解水平;④收集增生性瘢痕成纤维细胞的细胞裂解液,同时加入泛素化混合物及蛋白酶体抑制剂MG132/MG115(50μmol/L:50μmol/L),研究其对Smad7体外降解的抑制作用;⑤利用免疫共沉淀技术,检测增生性瘢痕成纤维细胞中Smad7与E3泛素连接酶Smurf2是否存在相互作用;⑥采用siRNA干扰技术沉默增生性瘢痕成纤维细胞中Smurf2的基因表达,研究沉默Smurf2后,增生性瘢痕成纤维细胞中Smad7蛋白在TGF-β1刺激下的表达水平.实验数据采用两样本t检验、单因素方差分析进行统计分析,组内两两比较采用SNK法,以P<0.05认为差异有统计学意义.结果 在正常皮肤及增生性瘢痕成纤维细胞中,Smad7的蛋白表达水平无明显差异(t=0.763,P=0.46);②在外源性TGF-β1刺激下,正常皮肤成纤维细胞中Smad7 mRNA和蛋白表达水平均呈时间依赖性增高均P<0.05,增生性瘢痕成纤维细胞中Smad7 mRNA表达呈时间依赖性增加(除5 min时P>0.05,其余各时间点与未刺激细胞比较,P值均<0.05),蛋白水平无明显变化(P>0.05);③正常皮肤成纤维细胞中,Smad7的体外降解无明显变化(P=0.162),增生性瘢痕成纤维细胞中,Smad7的体外降解增强(各时间点Smad7蛋白表达水平与对照组及上一个时间点比较,除2 h与1 h比较时P值为0.012,其余P值均为0.000);④蛋白酶体抑制剂MG132/MG115可以阻断增生性瘢痕成纤维细胞中Smad7的体外降解;⑤在用Smurf2抗体免疫共沉淀下来的蛋白复合物中检测到Smad7,表明增生性瘢痕成纤维细胞中Smurf2与Smad7存在相互作用;⑥增生性瘢痕成纤维细胞中,加入TGF-β1刺激,Smad7的蛋白表达水平无明显变化;沉默Smurf2基因后,Smad7蛋白在TGF-β1刺激下表达增高.结论 在烧伤后儿童增生性瘢痕成纤维细胞中,Smurf2通过泛素化降解Smad7,削弱了Smad7对TGF-β1信号转导的抑制作用,从而增强了TGF-β1/Smad信号转导,可能参与了增生性瘢痕的形成.
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转化生长因子β/Smad信号通路和骨关节炎研究进展
骨关节炎(osteoarthritis,OA)是以关节组织成份、结构和功能退行性改变为特征的慢性关节疾病,主要涉及关节软骨损伤并累及软骨下骨和周围结构(例如软骨下骨病变、骨赘和滑膜炎症等).
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转化生长因子β信号及其信号通路阻断剂的研究进展
转化生长因子-β(TGF-β)是一类多功能的细胞因子,具有非常广泛的生理作用,其信号异常与许多重要疾病的发生和发展高度相关.本文综述了TGF-β信号通路研究的新进展,并重点介绍了其信号通路的阻断剂,主要是其受体ALK5抑制剂的研究概况.
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德都红花-7味散对肝纤维化组织中转化生长因子β1及smad蛋白通路的影响
目的 探讨德都红花-7味散治疗肝纤维化的作用及其与转化生长因子β1及smad蛋白通路的相关性. 方法 将肝纤维化大鼠随机分为A组、B组、C组,每组8只;同时,另取8只正常大鼠,作为D组. A组予以灌胃0.6 g·kg-1德都红花-7味散,每天1次;B组予以灌胃0.4 mg·kg-1秋水仙碱,每天1次;C组和D组同时予以蒸馏水,每天1次. 4组均连续给药40 d. 用弹力胶原纤维染色法观察肝组织纤维化程度. 用酶联免疫法检测肝组织匀浆透明质酸、层黏连蛋白含量. 用免疫组织化学法检测肝smad2、smad3、smad6、smad7、转化生长因子β1蛋白表达变化. 结果 C组胶原纤维较D组增多,A组和B组胶原纤维较C组减少. C组透明质酸、层黏连蛋白含量较D组升高( P<0.05 ) ,A组和B组透明质酸、层黏连蛋白含量较C组降低( P<0.05 ). C组转化生长因子β1、smad2、smad3蛋白表达较D组上调(P<0.05),A组和B组转化生长因子β1、smad2、smad3蛋白表达较C组下调( P<0.05 ). C组smad6、smad7蛋白表达较D组下调( P <0.05 ) , A 组和 B 组 smad6、smad7 蛋白表达较 C 组上调(P<0.05).结论 德都红花-7味散通过调节转化生长因子/smad蛋白通路,从而阻断转化生长因子表达,抑制细胞外基质的合成,促进细胞外基质的降解,达到阻断或延缓肝纤维化发展的目的.
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扶正剔邪搜络方对肺纤维化大鼠的防治作用及机制研究
目的 探讨扶正剔邪搜络方对博莱霉素致大鼠肺间质纤维化不同时相的防治作用及其作用机制.方法 将SD大鼠随机分为假手术组、模型组、激素组、扶正剔邪搜络组,气管内插管注射博莱霉素制备肺纤维化大鼠模型,假手术组注入等体积生理盐水作为正常对照,造模24 h后给予相应药物灌胃,于第7、14、28、45天分别处死,取肺组织行HE、Masson染色,ELISA法检测转化生长因子-β1(TGF-β1)含量、RT-PCR法测定Smad3、Smad4、Smad7蛋白的表达.结果 扶正剔邪搜络组大鼠第7、14天肺泡炎程度均较模型组明显减轻(P＜0.05),第14、28、45天纤维化程度较模型组明显减轻(P＜0.05);扶正剔邪搜络组大鼠各时相TGF-β1含量均低于模型组;扶正剔邪搜络组大鼠各时相Smad3/4蛋白表达明显减弱(P＜0.05),Smad7蛋白表达明显增强(P＜0.05).结论 扶正剔邪搜络方不仅可以早期预防博来霉素致大鼠肺泡炎、肺纤维化的形成,长期用药还可以延缓其病程的发展,其机制可能与Smad3、Smad4信号低表达及Smad7高表达,进而影响TGF-β1通路有关.
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病理性瘢痕中TGF-β/Smad通路研究进展
瘢痕疙瘩是一种常见的损容性、难治性的疾病,其病因不明.目前,许多研究证实机械信号转导通路在瘢痕形成中发挥着重要作用.其中TGF-β/Smad通路是研究的热点且对瘢痕的形成有确切作用.本文旨在总结瘢痕相关TGF-β/Smad通路研究的新进展,为进一步认识病理性瘢痕的发病机制提供依据.
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脂联素对高糖环境下肾小管上皮细胞凋亡及纤维化的影响
目的 动态观察人肾小管上皮细胞在高糖环境下转化生长因子(TGF)-β1及下游正负反馈调节因子smad-3、smad-7、BMP-7的表达水平及加入脂联素干预后的影响,探讨脂联素对高糖环境下人近曲肾小管上皮细胞株(HK-2)的凋亡及纤维化的影响,以揭示脂联素(ADPN)对糖尿病肾病可能的保护机制.方法 体外培养人肾小管上皮细胞(HK-2)随机分为:①正常对照组(D-葡萄糖浓度5.5 mmol/L)；②高糖组(D-葡萄糖浓度30.0mmol/L)；③高糖+脂联素组(D-葡萄糖浓度30.0mmol/L+ ADPN浓度2.5μg/ml),分别于24、48、72h,测定各时间段细胞的凋亡率及TGF-31、BMP-7和smad-3、smad-7mRNA的表达变化.结果 与对照组相比较,随着高糖的持续作用细胞凋亡率增加；高血糖导致促纤维化细胞因子TGF-β1、smad3表达增加,过度激活TGF-β1/smad信号转导通路,加入脂联素干预后,信号转导抑制因子BMP-7、smad-7的表达增加,与高糖组相比,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 脂联素可通过提高BMP-7、smad-7的表达,降低TGF-β1、smad-3的表达以阻断TGF-β1/smad信号转导通路的过度激活,调控TGF-31/smad信号转导通路的平衡,达到保护肾脏的作用.
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转化生长因子β－Smads通路在间充质干细胞修复软骨中的作用
骨关节炎是主要累及关节软骨的慢性疾病，软骨损伤后不能再生。间充质干细胞是软骨修复的候选材料，其向软骨分化过程中受到细胞内外多种因素的影响，其中转化生长因子Smad蛋白通路是向软骨细胞分化的主要通路。但该通路在诱导间充质干细胞软骨分化方面具有两面性，既可以向正常软骨分化，起到修复作用；也可以向肥大软骨分化，加速软骨退变。
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TGF-β1/Smads信号通路与糖尿病心肌纤维化
转化生长因子β1(TGF-β1)是细胞外基质重要的调节因子,也是目前已知的与组织纤维化关系密切的细胞因子,它通过Smad信号途径、蛋白激酶C途径、分裂原活化蛋白激酶途径发挥生物学作用.近年研究发现,TGF-β1/Smads信号通路与心肌纤维化的发生和发展密切相关,深入研究有助于为糖尿病心肌病的治疗提供新的思路.现就TGF-β1/Smads信号转导通路与糖尿病心肌纤维化的关系进行综述.
