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中药川芎和赤芍配伍规律的方法研究
目的:分析与探讨中药川芎与赤芍配伍规律.方法:使用HPLC-MS法对川芎与赤芍配伍中的各种化学成分进行研究,以了解上述两种中药进行配伍应用时的规律.建立稳定、可靠、重复性高的HPLC法用于分离,再对所得色谱图进行数据处理,以了解单煎液与合煎液的成分变化.结果:通过对色谱图进行分析可得,川芎与赤芍配伍后,图谱上有新峰产生,并伴有含量变化.结论:川芎与赤芍配伍后能够产生新的化合物,且各自的药用成分的含量也会发生改变,说明配伍使用时对于治疗疾病具有新的意义.
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人血浆中尼莫地平的HPLC-Ms测定及其片剂的生物等效性
目的建立人血浆中尼莫地平的HPLC-MS法,以测定国产片剂的人体生物等效性.方法血样经碱化后乙酸乙酯提取,进行HPLC-MS分析,色谱柱Hypersil ODS(5μm,150mm×4.6mm),流动相为甲醇-水冰醋酸(85:15:0.1),内标为尼群地平,检测离子为[M+Na]+44.1(尼莫地平)[M+Na]+383.1(内标) ,裂解电压为80V.20名健康受试者交叉口服两种国产尼莫地平片剂,计算主要药动学参数,并估算其相对生物利用度,判断生物等效性.结果在1-200ng/ml范围内尼莫地平与内标峰面积比值与浓度线性关系良好(r=0.099845),低可定量浓度为0.3ng/ml,提取回收率为74.8%-93.2%.以AUC0-12计算的片剂相对生物利用度为99.8%±6.6%.结论本实验建立的分析方法灵敏、准确、简便.统计学结果表明两种制剂量生物等效.
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降香总黄黄酮体内Ⅱ相代谢反应研究
对灌胃给予大鼠降香总黄酮后,进入体内的化学成分和Ⅱ相代谢产物进行了初步研究.采用酶水解的方法将Ⅱ相代谢产物水解为原型形式,以HPLC-DAD和HPLC-MS技术进行样品分析,采用对照品对照的方法,在水解前、后的生物样品中分别定性分析了18个黄酮类成分.结果表明大鼠灌胃降香总黄酮后,黄酮类成分在体内发生了Ⅱ相代谢反应,药物在体内同时存在原型和Ⅱ相代谢产物两种形式,Ⅱ相代谢产物又以硫酸酯结合物为主.
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液质联用技术与中药现代化
液质联用技术将液相色谱(HPLC)的高分离效能与质谱(MS)的强大结构鉴定功能结合起来,逐渐成为中药现代化研究的强有力手段.本文对我国科学工作者应用液质联用技术在中药化学成分分析、中药质量控制、中药体内代谢、药代动力学及药效学方面进行的研究工作作一综述.
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HPLC-MS与HPLC-1H-NMR联用鉴定土茯苓中的二氢黄酮醇苷异构体
目的:鉴定土茯苓中的二氢黄酮醇苷异构体.方法:采用高效液相色谱-质谱法(HPLC-MS)与高效液相色谱-核磁共振氢谱法(HPLC-1H-NMR)对土茯苓提取液中的二氢黄酮醇苷类成分进行分析鉴定.结果:从土茯苓中鉴定出4个二氢黄酮醇苷异构体,分别为落新妇苷、新落新妇苷、异落新妇苷和新异落新妇苷.结论:该法能简单、快速地鉴别土茯苓中的二氢黄酮醇苷类成分.
关键词： 土茯苓 二氢黄酮醇苷 HPLC-MS HPLC-1H-NMR -
高效液相色谱-电喷雾-质谱法分析补骨脂中化学成分
目的:建立补骨脂药材中化学成分的高效液相色谱-电喷雾质谱分析方法.方法:采用Diamonsil~(TM) C_(18)(4.6mm×250 mm,5μm)色谱柱;流动相0.05%甲酸水溶液一乙腈,梯度洗脱;流速1 mL·min~(-1);柱温30℃;DAD扫描范围190～400nm;检测波长246 nm.Finnigan电喷雾离子阱多级质谱仪;正离子检测模式;ESI喷雾电压4 500 V;鞘气(N_2)流速60个单位;辅助气(N_2)流速20个单位;毛细管温度350℃;毛细管电压19 V,扫描范围m/z90～800.结果:补骨脂中化学成分获得了较好的分离和检测,共鉴定出2个香豆素苷,3个香豆素,8个黄酮和1个单萜酚类成分.结论:该方法灵敏度高、分离度好,适用于补骨脂药材中化学成分的快速定性鉴定.
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黄芩水提液透过妊娠大鼠胎盘屏障的药物成分研究
目的:对不同孕期妊娠大鼠给予黄芩水提液,采用HPLC-MS研究透过胎盘屏障的药物成分.方法:早、中、晚孕期Wistar大鼠灌胃黄芩水提液,连续给药5d,末次给药后1.5,12 h,取母体血浆(母血)及胚胎组织,检测生物样品中所含药物成分.结果:实验剂量下,各孕期孕鼠血浆中均检测到了7个化合物,明确归属的化合物有黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素、千层纸素A.各孕期胚胎组织中,早期检测到7个化合物,包括已归属的5个化合物；中期未检测到待测成分；晚期检测到除黄芩素以外的6个化合物.结论:大鼠妊娠不同时期给药黄芩后,除孕中期外,孕早、晚期胚胎组织中均可检测到黄芩中的药物成分,提示在妊娠期应用黄芩可以造成胎儿的宫内暴露,应对其进一步进行胚胎毒性研究.
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山楂中黄酮类成分的定性和定量分析
目的:通过LC-MS鉴定山楂中黄酮类成分,并采用HPLC建立多种黄酮类成分的同时定量方法.方法:采用LC-TOF-MS,在正、负离子模式下分别采集数据,以精确相对分子质量结合对照品定性鉴定黄酮类成分.采用反相液相色谱法建立了绿原酸,原花青素B2,表儿茶素,金丝桃苷,异槲皮苷5种黄酮类成分的定量方法,并用于10种不同来源山楂样品的测定.结果:通过TOF-MS鉴定出8种可能的黄酮类成分.对其中5种黄酮成分的定量方法学进行验证,绿原酸,原花青素B2,表儿茶素,金丝桃苷,异槲皮苷的线性范围分别为1.8～178.5,2.2～284.8,2.7～270.6,1.5～150.0,1.5～150.0 mg·L-1,相关系数均高于0.999；精密度、重复性的RSD均小于5.0％；平均回收率98.5％～102.5％,RSD小于3.5％.结论:该法重复性好,且简便、可靠,为山楂质量控制标准的建立提供了科学依据.
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桂枝茯苓胶囊对大鼠体外培养卵巢颗粒细胞增殖的影响及物质基础评价
目的:了解桂枝茯苓胶囊各分离部位对大鼠卵巢颗粒细胞增殖的影响,并探讨了物质基础与效应之间的关系.方法:将桂枝茯苓胶囊水提物经大孔树脂分离得到不同部位,以2,20,200 mg·L~(-1) 3个剂量加入培养的大鼠卵巢颗粒细胞中,通过MTT法观察药物对卵巢颗粒细胞生长的影响;采用LC\UV\MS\MS法对活性显著部位的主要色谱峰进行分析鉴定.结果:桂枝茯苓胶囊促进大鼠卵巢颗粒细胞增殖的活性部位主要为GZ-5,GZ-6,通过与标准化合物对照及质谱特征对活性显著部位GZ-5,GZ-6进行了归属和指认,鉴定了7个化合物,分别为苦杏仁苷、芍药内酯苷、芍药苷、1,2,3,4,6-O-没食子酰葡萄糖、苯甲酸、芍药新苷、肉桂酸等.结论:桂枝茯苓胶囊促进卵巢颗粒细胞增殖的生物效应源于水溶性部位,水溶性部位经大孔树脂吸附醇梯度洗脱得到了50%(GZ-5)、60%(GZ-6)两段活性部位.
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HPLC-MS法检测大鼠肝S9蛋白中T-2毒素及一种羟基代谢产物
目的：应用HPLC-MS技术，建立高灵敏度的大鼠肝S9蛋白中T-2毒素及其一种羟基化代谢产物的分析方法。方法以XDB-C18色谱柱（4.6 mm ×50 mm，1.8μm）分离，以5 mmol·L-1的乙酸铵水溶液和甲醇溶液为流动相进行梯度洗脱，以玉米赤霉酮为内标，在正离子多反应监测模式下对各分析物进行定性和定量分析。结果 T-2毒素、3'-OH-T-2分别在5~5000 nmol·L-1、25~5000 nmol·L-1的浓度范围内具有良好的线性。检测限分别为2、5 nmol ·L-1，定量限分别为5、25 nmol ·L-1，回收率介于72.6%~125.8%。结论方法学验证表明本方法快速、重复性好、灵敏度高，已成功应用于T-2毒素羟基化产物制备的监测。
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HPLC-MS测定大鼠体内白杨素及其药代动力学
目的 建立HPLC-MS的方法测定大鼠血浆中白杨素含量.方法 以柚皮素为内标；采用Waters Xtera C18色谱柱(150 mm ×4.6 mm,5μm)分离,柱温设定为30℃；梯度洗脱:A相为乙腈,B相为0.05％甲酸；流速为0.8 ml·min-1,使用分流器将0.2 ml ·min-的洗脱液注入离子源；选择离子监测检测(SIM):白杨素m/z255[M+ H]+,内标柚皮素m/z 273[M+H]+.结果 本研究所采用的方法检测限为1.5 ng ·ml-1,定量限为4.0 ng ·ml-1,且精密度、稳定性及回收率满足测定要求,并成功用于白杨素在大鼠体内的药动学评价.结论 本研究建立了快速、准确的HPLC-MS法用于测定大鼠血浆中的白杨素含量,并成功拟合其药动学参数,白杨素在大鼠体内的药动学特性符合二室开放模型含量.
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HPLC-MS法测定大鼠血浆中利福布汀的浓度及其药代动力学研究
目的 建立HPLC-MS法测定大鼠血浆中利福布汀浓度的方法,并对大鼠灌胃给药利福布汀后,研究利福布汀在大鼠体内的药动学.方法 采用HPLC-MS法测定血浆中利福布汀的浓度.色谱柱:Waters Xbridge-C18(100 mm×3.0mm,3.5 μm),流动相:乙腈-水(含0.1％甲酸)=70:30;流速:0.4 ml ·min-1,分析时间5 min,柱温:25℃,进样量:5μl,质谱条件:采用ESI源负离子模式,毛细管电压3500 V,干燥气流速10 L ·min-1,雾化气压力35 psi,干燥气温度350℃.选择离子模式(SIM)下,利福布汀的监测离子为[M-H]-m/z 845.4和内标A3的监测离子为[M-H]-m/z 509.3,碎片电压100 eV.结果 利福布汀在0.15 ～30 μg ·ml-1浓度范围内线性关系良好(r=0.9987);低定量限为0.15μg·ml-1;低、中、高浓度的提取回收率为86.42％ ～ 95.80％;日内、日间精密度RSD均＜11.5％.其药动学参数分别为:Cmax(2.08±0.783)μg·ml-1、Tmax(2.20±1.247)h、t1/2(12.58±4.909)h、CLz/F(1.15±0.098) L·h·kg-1、Vz/F(20.31±7.276) L·kg-1、AUC(0-∞)(26.32±2.144) μg·h·ml-1、MRT(0-∞)(18.29±5.05)h、VRT(0-∞)(379.94±195.84)h2.结论 该方法简便、准确、可靠,可用于测定大鼠血浆中利福布汀的浓度,并应用于其药代动力学研究.单次口服利福布汀后,药物吸收迅速,消除缓慢,能快速达到峰浓度,且能长时间维持较高浓度.
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HPLC-MS用于中药马兜铃中6种马兜铃酸类成分的检测
目的建立HPLC-MS同时检测6种马兜铃酸类成分的方法.方法采用高效液相-质谱联用法检测,色谱柱为Diamonsil C18柱(250mm×4.6mm,5μm);乙腈-水系统,分别含0.1%的乙酸和0.1%的四氢呋喃,采用梯度洗脱程序;流速:1.0ml/min,采用DAD检测,波长范围190～400nm.质谱采用ESI负离子模式和选择性离子扫描(SIM).结果马兜铃酸A、B、C、D、7-OH-马兜铃酸A和去硝基马兜铃酸A等6种成分可在1h内达到分离并得到同时检测.结论该法可用于含有或可疑含有马兜铃酸类有毒成分中药材及制剂的检测,方法灵敏,快速,专属性较强.
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液质联用技术鉴定rLTB的结构
目的利用电喷雾离子化为接口(ESI)的高效液相色谱/质谱联用技术(HPLC-MS),鉴定重组大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(rLTB)氨基酸序列结构的正确性.方法利用SDS-PAGE分离、呈现蛋白混合物,胰蛋白酶原位水解rLTB,HPLC-MS联机制备肽指纹图,分析肽指纹图获得rLTB氨基酸全序列信息.结果 rLTB的全序列结构与理论的全序列结构完全一致.结论改进的HPLC-MS测定条件稳定,提高了质谱灵敏度,结合肽指纹图的分析结果,可以验证蛋白质的氨基酸序列.
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环维黄杨星D控释片犬体内生物等效性研究
目的 研究环维黄杨星D控释片在犬体内生物等效性.方法 采用液相色谱-质谱联用法测定犬单剂量、多剂量口服给予环维黄杨星D控释片和普通片后的血药浓度,计算两制剂的药代动力学参数及相对生物利用度,将Cmax、Tmax、AUC0～t、AUC0～∞等指标进行统计学分析,判断两制剂生物等效性.结果 控释制剂与普通制剂相比,Cmax降低,Tmax延长,多剂量给药时两者的波动系数分别为1.04和1.17,AUC均无显著性差异.结论 环维黄杨星D控释片与普通片相比,释药时间显著延长,达峰时间明显延迟,无突释现象,具有良好的控释释药特征.
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人血浆中非那雄胺的HPLC-MS法测定
目的建立人血浆中非那雄胺的HPLC-MS测定法,以测定志愿者口服非那雄胺片剂后的血药浓度,并对供试制剂和参比制剂的生物等效性进行评价.方法血样经0.1 mol*L-1NaOH碱化后用重蒸乙酸乙酯提取,进行HPLC-MS分析,色谱柱为Hypersil ODS (5 μm,250 mm×4.6 mm),流动相为甲醇-水 (85∶15),内标为甲地孕酮,检测离子为m/z 395(非那雄胺)、m/z 407(内标),裂解电压为120 V.20名健康志愿者交叉口服供试片和参比片,计算主要药代动力学参数及相对生物利用度,以判断生物等效性.在1～200 μg*L-1非那雄胺与内标峰面积比值与浓度线性关系良好(r=0.998 6), 检测限为0.05 μg*L-1,回收率为85.9%～98.7%.以AUC0-24计算的非那雄胺片剂的相对生物利用度为(100±13)%.结论建立的分析方法灵敏、准确、简便.统计学结果表明两种制剂生物等效.
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HPLC-MS法鉴定左氧氟沙星的降解产物
采用高效液相色谱-质谱联用法(HPLC-MS)鉴定左氧氟沙星的降解产物.以Agilent ZORBAX Extend-Cl8 (250 mm×4.6 mm,5 μm)色谱柱为分析柱,0.1％醋酸铵溶液(用甲酸调节至pH 3.5)-乙腈为流动相,梯度洗脱,流速为0.5 mL·min-1,柱温为40℃.通过与对照品比较,结合质谱仪扫描结果分析,在左氧氟沙星的破坏样品中检测出去羧基左氧氟沙星(m/z 318.2)、去甲基左氧氟沙星(m/z 348.3)、左氧氟沙星-N-氧化物(m/z378.1)等降解产物.本方法简单可行,结果准确可靠,可用于左氧氟沙星降解产物的定性鉴别.
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OATP1B1基因位点521T→C的突变对瑞舒伐他汀在中国健康人体内药代动力学特征的影响
研究中国健康人体内OATP1B1基因位点521T→C的突变对瑞舒伐他汀药代动力学的影响,为临床参考遗传多态性特征来确立瑞舒伐他汀正确合理的给药方案提供依据.血浆样品应用LC-MS方法测定:采用电喷雾电离源(ESI),选择性监测瑞舒伐他汀(m/z480.0),内标匹伐他汀(m/z420.0).利用ARMS-PCR方法对40名健康受试者OATP1B1的521T→C位点的基因分型,结果显示有7名为OATP1B1基因位点521T→C突变者,占全部健康受试者的17.5%,其余OATP1B1基因野生型纯合子占全部健康受试者的82.5%.首次发现中国人体内的瑞舒伐他汀药代动力学特征在OATP1B1基因位点521T→C突变组与基因野生型组间存在显著差异.中国人体内OATP1B1基因位点521T→C突变对瑞舒伐他汀的药代动力学过程有显著影响.瑞舒伐他汀OATP1B1基因突变组与野生型组相比较,其在人体内的吸收程度增加,消除过程减慢,故在临床应用中应参考OATP1B1基因位点521T→C的突变情况来指导瑞舒伐他汀的合理用药.
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附子配伍甘草前后汤液沉积物的HPLC-MS化学组成分析
采用HPLC-MS分别对中药附子配伍甘草前后汤液中产生的沉积物进行化学组成鉴定,探讨附子配伍甘草减毒的可能机制,并为含附子-甘草药对的中药成方制剂的提取纯化工艺合理性提供实验依据.分别制备附子单煎液沉积物与附子甘草合煎液沉积物供试品,在同一分析条件下,分别建立了其HPLC-MS指纹图谱,并采用Q-TOFMS检测.从附子单煎液沉积物中指认出28种成分(鉴定出25种成分及结构)；从附子甘草合煎液沉积物中指认出36种成分(鉴定出34种成分及结构),其中11种来源于甘草,25种成分来源附子,但附子配伍甘草前后汤液沉积物中生物碱成分种类和含量差别均较大.说明配伍甘草可能导致汤液中附子生物碱成分状态的改变,为附子-甘草配伍减毒机制的探讨提供了实验依据,同时也提示附子-甘草药对煎煮液沉积物中含有效成分,在临床和实际生产中需注意沉积物部分的综合利用.
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凉血通瘀方凉血活血有效部位及其化学成分的HPLC-MS和GC-MS分析
为阐明凉血通瘀方凉血活血药效物质基础,本文建立干酵母血热血瘀大鼠模型,以体温、全血黏度和血浆黏度为指标,评价凉血通瘀方及系统溶剂提取部位凉血活血作用.结果显示,与模型组比较,凉血通瘀方提取物、挥发油部位和正丁醇部位给药组均能明显降低模型大鼠体温升高(P＜0.01),不同程度的降低全血黏度和血浆黏度(P＜0.01或P＜0.05),初步确定挥发油部位和正丁醇部位为该方凉血活血有效部位;采用GC-MS分析凉血通瘀方挥发油部位,用归一法测定其相对含量,鉴别得到70个化合物,占总量的92.54％,主要成分为β-细辛醚、丹皮酚、α-细辛醚和菖蒲酮等;采用HPLC-MS技术及对照品比对分析凉血通瘀方正丁醇部位成分,推断出42个化合物,主要为芍药苷类、鞣质类和环烯醚萜苷类等.该研究明确了凉血通瘀方凉血活血有效部位及其化学成分,为进一步研究凉血通瘀方的凉血活血物质基础及作用机制奠定了基础.
