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抗生素联合舒巴坦对抗鲍曼不动杆菌的实验分析

时间:2017-10-10 15:29来源:未知 作者:360期刊网 点击:

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  抗生素联合舒巴坦对抗鲍曼不动杆菌的实验分析

  丁 力,王宪德孙

  (1.河北医科大学第二医院药品科,河北石家庄050000;2.河北医科大学第二医院心外科,河北石家庄050000)

  【摘要】 目的探究8种临床常用抗菌药物对鲍曼不动杆菌的体外抗菌活性以及含舒巴坦制剂药物的体外联合抗菌活性,为临床治疗鲍曼不动杆菌提供联合用药的实验依据。方法耐药鲍曼不动杆菌30株,采用微量肉汤稀释法测定8种临床常用抗菌药物及阿米卡星与头孢哌酮钠/舒巴坦钠、哌拉西林/舒巴坦、美洛西林/舒巴坦联合用药的最低抑菌浓度。结果8种临床常用抗菌药物中带有舒巴坦制剂的抗生素对鲍曼不动杆菌显示一定的体外抗菌活性,三代头孢都表现为强耐药;阿米卡星与头孢哌酮钠/舒巴坦钠联合后联合抑菌指数小于1,表现为协同相加作用,哌拉西林/舒巴坦,美洛西林/舒巴坦分别有5%和30%联合抑菌指数大于1,表现为无关作用。结论鲍曼不动杆菌对临床常用抗菌药物已经产生了很强的耐药性,临床可优先选择阿米卡星或带舒巴坦制剂的抗生素,也可根据患者具体情况选用联合进行治疗,以防耐药株的产生和医院感染的扩散,并注意消毒与隔离,防止交叉感染。

  【关键词】鲍氏不动杆菌;抗菌药;抗药性,多药 doi:10. 3969/j.issn. 1007-3205. 2012. 02. 045

  【中图分类号】 R978.1 【文献标志码】 B 【文章编号】 1007-3205(2012)02-0225-03

  鲍曼不动杆菌( Acinetobacter baumanii,Ab)为需氧非发酵革兰阴性杆菌,是条件致病菌,为医院内感染的重要机会性病原菌。随着免疫抑制剂和大量广谱抗菌药物的应用,该菌引起的感染特别是多重耐药菌株的感染有增加的趋势。在非发酵菌中,Ab在临床标本中的分离率仅次于铜绿假单胞菌,而在不动杆菌属中则占第1位。这些多重耐药的Ab可以是局部医院性的,也可以在城市、国家、甚至国家与国家之间流行传播。很明显,Ab已经成为常见的感染非发酵革兰阴性杆菌,且对临床已知各类抗生素产生了天然的耐药性,以至于临床可选抗生素种类少,治疗困难。笔者查阅文献得知H1,抗生素联合舒巴坦对抗Ab效果不错,遂设计新型的联合用药方案,以期为临床合理用药提供帮助。

  1 材料与方法

  1.1 菌株来源:河北医科大学第二医院检验科从临床感染患者痰、血、脓汁等临床标本分离出的Ab30株,大多为多重耐药菌。

  1.2实验器材:20mL试管20支,高压灭菌锅,无菌吸管,锥形瓶,250B生化培养箱,冷藏冰箱,HFsafe操作安全柜,Tissue Culture Plate 96 Well及10、50、100、200、1 000vL移液枪,M-H琼脂肉汤。

  1.3抗菌药物:注射用头孢他啶(CAZ,葛兰素史克集团公司,产品批号H394);注射用头孢哌酮钠/舒巴坦钠(CFS,瑞阳制药有限公司,产品批号10092411);注射用美罗培南(MEC,住友制药有限公司,产品批号2051C);注射用哌拉西林钠舒巴坦钠(PIPS,双鹤药业,产品批号110106);注射用头孢吡肟(FEP,深圳立健药业有限公司,产品批号1004090 2);注射用美洛西林钠舒巴坦钠(MES,海南通用三洋药业有限公司,产品批号100405);阿米卡星(AMK,标准品,中国生物制品检定所);左氧氟沙星(LVX,标准品,中国生物制品检定所)。

  1.4 菌悬液的配制:取冷藏的临床感染患者多重耐药Ab,接种在M-H肉汤中在35℃下培养20h,然后进行涂片,革兰染色,显微镜下观察,筛选出有活性的Ab 30株,再分别接种在有编号的含有M-H肉汤的试管中,温箱培养18~24h,对比浑浊度,得到所需要浓度的菌悬液。

  1.5单药的药敏试验:用微量肉汤倍比稀释法检测鲍曼不动杆菌30株对8种抗菌药的最低抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC)。实验方法及结果判断标准参照CLSI 2009年版‘副。①抗菌药物配制,抗菌药物原液均配制成1 024mg/L,试验中采用倍比稀释法稀释,依次得到2~1 024mg/L 10个实验浓度。②实验操作,取实验用的96孔培养板4块,横向编号依次为阳性对照,2、4、8、16、32、64、128、256、512、1 024mg/L,阴性对照,纵向为菌株编号。取lOOyL药液分别加入到各自编号下的孔中,在再各孔中依次加入100VL菌悬液,写好编号即可。③孵化,将加好液的培养板放人生化培养箱中35℃培养18~24h。④观察结果和报告,读取无抗生素的的对照孔,从低浓度到高浓度逐一比较,以肉眼观察无细菌生长孔为MIC。

  1.6联合药敏实验:用微量肉汤倍比稀释法测定阿米卡星分别联合头孢哌酮钠舒巴坦钠,哌拉西林钠舒巴坦钠,美洛西林钠舒巴坦钠对严重耐药的Ab20株的MIC,实验方法及结果判断标准参照CLSI2009年版。①抗菌药物配制,将阿米卡星配成2、4、8、16mg/L 4个浓度;将头孢哌酮钠舒巴坦钠、哌拉西林钠舒巴坦钠、美洛西林钠舒巴坦钠分别配成2、4、8、16、32、64mg/L 6个浓度。②实验操作,取实验用的96孔培养板6块,横向编号依次为阳性对照,2、4、8、16、32、64mg/L,阴性对照,纵向编号依次2、4、8、16mg/L,分别取50 V,L头孢哌酮钠舒巴坦钠,哌拉西林钠舒巴坦钠,美洛西林钠舒巴坦钠纵向加到对应浓度编号下,取50vL阿米卡星横向加入到对应浓度编号下,再取lOOl_cL菌悬液分别加到含不同药物浓度的孔中。③孵化,将加好液的培养板放人生化培养箱中35℃培养18—24h。④观察结果和报告,读取无抗生素的的对照孔,从低浓度到高浓度逐一比较,以肉眼观察无细菌生长孔为MIC。

  1.7联合抑菌指数( fractional inhibitory concentration,FIC)的确定:FIC指数为对联合用药时各药的MIC值分别除以单药时MIC值的商的和。相互作用解释为FIC≤0.5为协同作用,0.51为相加作用,l< FIC≤2为无关作用,FIC >2为拮抗作用。

  2结 果

  2.1 单种抗菌药物的药敏试验:头孢哌酮/舒巴坦钠耐药率最低,为75%,其次是阿米卡星80%,头孢他啶,头孢吡肟,左氧氟沙星全耐药,为100%。见表1。

  2.2 联合抗菌药物的药敏试验:联合后,各药的MIC值均明显下降,FIC比较头孢哌酮/舒巴坦钠联合阿米卡星后,主要表现为协同与相加作用,其他3种联合用药方式不同程度的出现了无关作用。见表2,3。

  表1 8种抗菌药物对Ab 30株的体外抗菌活性

 
    抗菌药物
 
 MICso
 
 (p/ mg . L-')
MICgo
 
(p/ mg . L-')
耐药率
 
  (%)
  美洛培南     128     256   90.6
  阿米卡星     128     256   80.0
  头孢他啶     128     256  100.O
美洛西林钠/舒巴坦钠     256     512     87.5
    头孢吡肟     256     512  100.0
  哌拉西林钠/舒巴坦钠     128     256   95.0
  头孢哌酮/舒巴坦钠     64     128   75.0
  左氧氟沙星     32     128  100.0

  表2抗菌药物联合后对Ab的体外抗菌活性(n =20,p/mg . L)

    抗菌药物     MICso     MIC90
头孢哌酮钠舒巴坦钠/阿米卡星     8/2     16/4
哌拉西林钠/舒巴坦钠/阿米卡星     16/4     32/8
美洛西林钠舒巴坦钠/阿米卡星     16/8     32/16
头孢吡肟/阿米卡星     64/8     64/16

  

  丁力等抗生素联合舒巴坦对抗鲍曼不动杆菌的实验分析

  表3抗生素联合应用后FIC值比较(%)

 
    抗菌药物
 
 
FIC≤0.5
 
 0.5<
 
FIC≤1
 1< FIC
 
    ≤2
 
  FIC >2
 
头孢哌酮钠舒巴坦钠/阿米卡星     70     30     0     O
哌拉西林钠/舒巴坦钠/阿米卡星     70     25     5     0
美洛西林钠舒巴坦钠/阿米卡星     60     10     30     0
头孢吡肟/阿米卡星     60     10     30     0

  3讨 论

  Ab作为医院感染的重要条件致病菌,近年来感染增多,耐药性也日益严重,为临床治疗带来了很大的困难,这已引起临床专家和微生物学者的关注。感染源可以是患者自身(内源性感染),亦可以是感染者或带菌者,尤其是双手带茵的医务人员。其传播途径主要有接触和空气传播。医院里,污染的医疗器械及工作人员的手都可能是重要的传播媒介。该菌易感者主要为老年人、早产儿和新生儿,以及手术创伤、气管切开、严重烧伤或者插管、使用人工呼吸机、腹膜透析和行静脉导管者、放疗化疗后的肿瘤患者、广谱抗菌药物或免疫抑制剂应用者、长期住院的慢性病患者、重症心脏监护病房和重症监护病房患者等。Ab为条件致病菌,正常条件下对健康的个体不致病,但可使虚弱个体感染,可以引起呼吸系统感染、中耳炎、肺炎、烧伤感染、脑膜炎、切口感染、尿路感染、腹膜炎、骨髓炎、心内膜炎、关节炎等,并可进一步发展为败血症。Ab往往存在混合感染,所以临床表现不典型。目前Ab的耐药性日益严重,部分菌株甚至对目前所有已知的抗生素均耐药,即成为“泛耐药”的Ab。

  Ab带有多种耐药基因,易造成高耐药率和多重耐药,给临床治疗带来了一定的困难,导致较高的病死率。对所有抗生素耐药性总体呈上升趋势,Ab耐药机制非常复杂,对头孢类及亚胺培南的耐药是由于产生多种B -内酰胺酶、碳氢酶烯酶,还有青霉素结合蛋白的改变及外膜通透性的降低;对氨基糖苷类耐药则与修饰酶的产生有关;对喹喏酮类耐药与外排机制有关。此外,耐药质粒的水平传播可以使该菌更易获得耐药基因。本实验研究了8种抗生素单独使用后的MIC,发现这几种抗生素耐药率很高,头孢他啶、头孢吡肟、左氧氟沙星耐药率为100%,含舒巴坦制剂的抗生素耐药率也在75%95%之间,连碳青霉烯类的美罗培南耐药率也在90.6%。笔者在此实验上进行了联合药敏实验,阿米卡星与头孢哌酮钠/舒巴坦钠、哌拉西林/舒巴坦、美洛西林/舒巴坦两两联用,MIC明显下降,同时阿米卡星与头孢哌酮钠/舒巴坦钠联合后FIC小于1,表现为协同和相加作用,哌拉西林/舒巴坦、美洛西林/舒巴坦分别有5%和30% FIC大于1,表现为无关作用,这与舒巴坦对Ab属细菌有独特的杀菌作用有关,与文献报道一致.

  总之,Ab日益成为全世界的一个难题,抗生素在世界范围内的滥用,使Ab的耐药性越来越强,人类开发新一代抗生素的步伐远远赶不上细菌变异的速度,人类正处于一个危难的境地。因此建议临床应根据实验室的药敏结果,结合患者的自身情况以及病原菌的耐药表型选择最佳联合抗菌药物方案,以达到控制感染、提高疗效及防止耐药菌的产生和播散,同时希望本实验能给临床医师带来新的治疗思路。

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