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HPLC法同时测定口炎清颗粒中绿原酸和肉桂酸的含量

时间:2017-09-29 14:46来源:未知 作者:360期刊网 点击:

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  HPLC法同时测定口炎清颗粒中绿原酸和肉桂酸的含量

  张子建1,孑冬晓2,董立华2,王春英孙

  (1.河北省中医院口腔科,河北石家庄050017;2.河北医科大学药学院药物分析教研室,河北石家庄050017)

  【摘要】 目的建立同时测定口炎清颗粒中绿原酸和肉桂酸含量的方法。方法采用高效液相色谱法(high pressure liquid chromatography,HPLC),迪马DiamonsilrM Cl8色谱柱(4.6mm×250mm,5ym),乙腈-0.1%甲酸为流动相梯度洗脱,检测波长为300nm,流速1.OmU min,柱温为30。C。结果肉桂酸质量浓度在2.O~18. Omg/L范围内与峰面积良好的线性关系(r=0. 999 9,n=5),平均加样回收率为99. 72%,相对标准差(relative standard deviation.RSD)为1.0%;绿原酸质量浓度在4.3~38. 7mg/L范围内与峰面积呈良好的线性关系(r=0.998 2,凡=5),平均加样回收率为102. 2%,RSD为0.7%。结论该方法准确,快速,简便,重现性好,回收率高,适用于口炎清颗粒的质量控制。

  【关键词】 口炎清颗粒;绿原酸;色谱法,高压液相

  【中图分类号】R917 【文献标志码】Adoi:10. 3969/j. issn. 1007 -3205. 2012. 02. 020

  【文章编号】1007-3205 ( 2012) 02-0172-03

  DETERMINATION OF CHLOROGENIC ACID AND CINNAMIC ACID IN KOUYANQINGKELI BY HPLC

  ZHANG Zijian',SUN Dongxia02,DONG Lihua2,WANG hunying2'

  (1. Department of Stomatology,llebei Provirzcial TCM HospitaI,Shijiazhu.ang 050017 ,China ;2. Department of Pharmaceutical Analysis,the School of Pharmacy,llebei Medical University,Shijiazhuang 050017,China)

  ABSTRACT: Objective To establish the method for simultaneous determining chlorogenic acid and cinnamic acid in Kouyanqingkeli. Methods The experiments were performed using HPLC with C18 column (250mm x 4. 6mm,5“ m) as an analytical column. The mobile phase was acetonitrile 0. 1% formic acid with gradient elution. The detection wavelength was chosen at 300 nm. The flow rate was 1. 0mL/min. The column compartment was kept at the temperature of 30'C. Results The linear rang of was 99. 72% with

  cinnamic acid was 2. 0 ~ 18. Omg/L ( r = 0. 999 9,n = 5) , and the mean recovery we relative standard deviation( RSD) of l. O %. The linear rang of chlorogenic acid was 4. 3 ~ 38. 7mg/L( r =0. 998 2,n = 5) ,and the mean recovery was 102. 20'/o with RSD of 0. 70'/o . Conclusion The method was proved to be very accurate,rapid,simple and stable for the quality control of Kouyanqingkeli.

  KEY WORDS: Kouyanqingkeli;chlorogenic acid;chromatography,high pressure liquid

  口炎清颗粒是由天冬、麦冬、玄参、山银花和甘草等5味中药根据中医理论用现代科技方法精制而成的中药复方制剂(国家中药保护品种)。其疗效确切,作用显著,具有清热养阴、解毒消肿的功效,用于治疗阴虚火旺所致的口腔溃疡。现行质量控制方法为采用高效液相色谱法测定绿原酸含量。本实验旨在采用高效液相色谱法(high pressure liquid chromatography,HPLC)法同时测定口炎清颗粒中绿原酸和肉桂酸含量的方法,以便于提供更为全面的质量控制方法。

  1 仪器与材料

  Agilent Technologies 1200 series高效液相色谱仪,DAD检测器;绿原酸和肉桂酸对照品(中国药品生物制品鉴定所,批号分别为0737 - 9709和0844- 200003.供含量测定用)。乙腈为色谱纯(迪马公司),水为二次重蒸水,其他试剂均为分析纯。口炎清颗粒为市售(批号10090331,10012302.11052026)o

  2方法与结果

  2.1 色谱条件:迪马DiamonsilTM Ci8色谱柱(4. 6mm×250 mm,5斗m);乙腈-0.1%甲酸为流动相,梯度洗脱(0~5min.20%乙腈;5—15min,20%。30%乙腈;15~ 25min.30%—70%乙腈;25~26min,70%—100%乙腈);流速为1.OmL/min;检测波长为300nm;柱温为30aC,进样量10VL。

  2.2溶液的制备

  2.2.1 对照品溶液的制备:精密称取绿原酸和肉桂酸对照品适量,加甲醇制成浓度分别为1. OOg/L和1. 07 g/L的溶液,即得。

  2.2.2供试品溶液的制备:精密称定本品1.Og,置具塞锥形瓶中,精密加入50 010甲醇lOmL称定质量,超声处理th,放冷,再称定质量,用50%甲醇补足减失的质量,摇匀,离心( 12 000r/min) 20min,取上清液即得。

  2.3 专属性实验:按处方量分别制备不含山银花和玄参药材的阴性样品,按“供试品溶液的制备”方法制成山银花阴性对照溶液和玄参阴性对照溶液,依法测定。结果表明,在绿原酸和肉桂酸相应的保留时间范围内无干扰色谱峰出现(图1)。

  2.4标准曲线的制备:精密量取绿原酸和肉桂酸对照品溶液适量,加甲醇制成含绿原酸和肉桂酸浓度分别为2. Omg/L和4.3mg/L、6.Omg/L和12. 9mg/L、10. Omg/L和21. 5mg/L、14. Omg/L和30. Img/L、18. Omg/L和38. 7mg/L的混合对照品溶液,摇匀。进样,分别记录绿原酸和肉桂酸的峰面积,以峰面积对样品浓度进行线性回归。绿原酸的回归方程为,Y= 879. 25X +5. 135,r=0.998 2。表明绿原酸在2.0~ 18. Omg/L范围内与峰面积呈良好的线性关系;肉桂酸的回归方程为,Y= 1069. SX-1.265,r=0. 999 9。表明肉桂酸在4.3~38. 7mg/L范围内与峰面积呈良好的线性关系。

  2.5回收率实验:精密称定含绿原酸、肉桂酸浓度分别为1. 37mg/g和1.70mg/g的样品(批号10090331)0. 5g,置具塞锥形瓶中,精密加入50%甲醇lOmL,称定质量,超声处理th,放冷,再称定质量,用50%甲醇补足减失的质量,摇匀,离心(12 000r/min) 20min,取上清液即得。精密加入浓度为1.OOg/L的绿原酸对照品溶液0.6mL和浓度为1.07 g/L的肉桂酸对照品溶液0.8mL,加甲醇稀释到刻度,摇匀,离心( 12000r/min) 20min,取上清液依法测定,平行测定6次,计算加样回收率。肉桂酸的平均加样回收率为99. 3%,相对标准差(relative standard deviation,RSD)为1.6%,绿原酸的平均加样回收率为100. 5%,RSD为1.9%。

  A.绿原酸和肉桂酸混合溶液;B.样品溶液;C.样品溶液加绿原酸和肉桂酸;D.山银花阴性对照溶液;E.玄参阴性对照溶液1-绿原酸(chlorogenic acid)2 -肉桂酸( cinnamic acid)

  Figure l The HPLC chromatograms of each sample A. Standard mixed solution of chlorogenic acid and cinnamic acid;B. Sample solution;C.Sample solution spiked with chlorogenic acid and cinnamic acid;D.Negative control solution of lonicera confusa DC;E.Negative control solution of raidix scrophulariae

  2.6精密度实验:取同一样品溶液,连续进样6次,测得肉桂酸和绿原酸峰面积的RSD分别为1. 0%和0.7%。

  2.7重复性实验:取同一批(批号10090331)样品,按“2.2.2项供试品溶液的制备”方法,平行制备6份溶液,依法测定峰面积,肉桂酸和绿原酸浓度的RSD分别为1.2%和0.8%。

  2.8稳定性实验:按“2.2.2项供试品溶液的制备”方法制备供试品溶液,分别放置0、1、2、4、6、8h后,依法测定。计算得绿原酸和肉桂酸浓度的RSD分别为1. 6%和0.9%,结果表明,肉桂酸和绿原酸在样品溶液中放置8h稳定。

  2.9 样品测定:取口炎清颗粒样品3批(批号10090331、10012302、11052026),分别按“2.2.2项供试品溶液的制备”方法制备供试品溶液,按上述方法进行测定。分别计算样品中肉桂酸和绿原酸的含量。结果见表1。

表1 口炎清颗粒中绿原酸和肉桂酸的含量

Table l Contents of chlorogenic acid and cinnamic acid in Kouyanqingkeli

 
    Rateh
Chlorogenic acid
 
Cinnamic acid
 
 
  number
Content
(w/mg - g-')  RSD(%)
Content
(w/mg . g-')  RSD(o/o)
10090331     1. 37     1. 70
  10012302     1. 42    0.08     1. 86    0.11
  1 1052026     1. 32        1. 65

  3讨 论

  测定波长选择时发现,绿原酸和肉桂酸的\max分别在327nm和285nm处,但是样品在327nm和285nm下的色谱图中二者对应的保留时间处均有干扰峰存在。实验表明,在300nm处2种组分均有良好吸收,且相应保留时间处无杂质峰出现,故选择在300nm处同时测定绿原酸和肉桂酸的含量。样品前处理采用甲醇超声提取,离心后测定的方法处理过程简单,方便快速,减少有效物质的损失。结果表明,该方法灵敏度高,重现性好,能准确测定口炎清颗粒中绿原酸和肉桂酸的含量,可用于评价该制剂的质量。

  【参考文献】

  [1]曾宪涛.他克莫司软膏加口炎清颗粒治疗糜烂型OLP的疗效评价[J].临床口腔医学杂志,2011,27(7):432 -433.

  [2]中华人民共和国药典委员会,中国药典:一部[M].北京:中国医药科技出版社,2010:465 - 466.

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