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阿托伐他汀钙片强制降解试验及有关杂质的研究

时间:2017-09-22 11:06来源:未知 作者:360期刊网 点击:

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  阿托伐他汀钙片强制降解试验及有关杂质的研究

  姚亮元宿亮 蒋胜兰 朱婧 吴正勇

  (湖南千金湘江药业股份有限公司,湖南株洲412000)

  【摘要】目的::建立高效液相色谱法测定阿托伐他汀钙片有关杂质检查方法。方法:采用Venusil XBP CN氰基硅烷键合硅胶色谱柱(4.6mm ×250mm,5μm);流以醋酸铵缓冲液和乙腈为流动相,梯度洗脱,流速1.0ml/min,检测波长为240nm。结果:各特定杂质有效分离,杂质 A、B、C、D、H、a、c 检出限分别为3.27ng、2.85ng、2.40ng、3.12ng、2.64ng、0.85ng、2.50ng、2.64ng。确定了酸、碱、高温、氧化、光照条件下主要的降解杂质结构。结论:该方法专属性好、准确、灵敏,用于阿托伐他汀钙片有关物质的测定结果可靠。

  【关键词】阿托伐他汀钙;有关物质;降解杂质鉴定;高效液相色谱

  【中图分类号】R453 【文献标识码】A 【文章编号】1009-3389(2016)16-0008-02

  阿托伐他汀钙是一种HMC-CoA还原酶的选择性竞争性抑制剂,通过抑制肝脏内HMG-CoA还原酶和胆固醇合成从而降低血浆中胆固醇和脂蛋白水平,并通过增加细胞表面的肝脏LDL受体以增强LDL的摄取和代谢。阿托伐他汀钙可降低纯合子型和杂合子型家族性高胆固醇血症、非家族性高胆固醇血症和混合型血脂异常患者的总胆固醇,低密度脂蛋白胆固醇和载脂蛋白B水平。

  阿托伐他汀钙最早由美国华纳一兰伯特公司研制,由辉瑞代理销售,商品名为立普妥( LIPITOR)。2004年,阿托伐他汀钙成为全球第一只销售额突破百亿美元的药物。

  阿托伐他汀钙制剂有关物质测定的研究文献很多‘“钉,阿托伐他汀钙制剂标准中有关物质方法无法对由原料引入的杂质有效监控。本文采用一种梯度洗脱的HPLC方法,对阿托伐他汀钙各杂质的分离条件、方法进行了筛选。该方法准确度高,能对阿托伐他汀钙原料及制剂中的各杂质有效分离。通过强制降解试验,对阿托伐他汀钙制剂中的主要降解杂质及降解途径做了进一步研究。

  1仪器与试药

  Waters e2695液相色谱仪;BS110S电子天平(赛多利斯仪器系统有限公司)。阿托伐他汀钙对照品由中国食品药品检定研究院提供(批号100651-201203,含量99.8 010);阿托伐他汀钙片(辉瑞制药有限公司;国药准字1237179)。

  2方法与结果

  2.1 色谱条件 色谱柱:氰基硅烷键合硅胶为固定相(Venusil XBP CN.4.6mm×250mm,5l,cm);流动相:A为0. 05 mol/L醋酸铵缓冲液一乙腈(75:25);B为0.05 mol/L醋酸铵缓冲液一乙腈(50:50)[缓冲液配制为3. 9g醋酸铵加水稀释至1000ml.冰醋酸调pH至5.O(s=0.05)];检测波长为240nm;流速1.Oml/min;进样体积:20斗l。

  2.2溶液的配制 供试溶液的配制:取阿托伐他汀钙片20片,研细,称取相当于阿托伐他汀10mg的样品细粉于100ml量瓶中,加适量稀释液[0. 05 mol/L柠檬酸铵溶液(氨水调pH至7.4):乙腈50:50)]适量,充分溶解并定容,摇匀,滤过B口得供试溶液。

  对照溶液的配制:精密量取上述供试溶液1~ 100ml量瓶中,稀释液定容。

  3方法学验证

  3.1专属性试验 将供试品储备液加流动相稀释至0. Img/ml。分别以Imol/L盐酸溶液、1 mol/L氢氧化钠溶液和30%过氧化氢溶液为破坏条件,进行强制降解试验。另取2份分别放进lOOoC的水浴锅(lh)和254nm紫外灯照射(lh),进行热破坏和紫外线强制降解试验。

  强制降解试验表明:阴性空白溶液很稳定,各破坏产物峰与主峰分离良好;阿托伐他汀钙片对氧化、高温、酸、碱及光照条件下不稳定,增幅较大的杂质有杂质a(阿托伐他汀吡咯烷酮化物)、杂质H/b(阿托伐他汀内酯)和杂质e/D(环氧化物)。

  3.2稳定性试验取同一份供试品溶液,用流动相稀释至约0. Img/ml,在上述相同色谱条件下,分别于室温放置Oh、2h、4h、6h、8h、12h、24h后进样测定,计算得阿托伐他汀钙峰面积的相对标准偏差( RSD)为2.51%(n=7)。表明供试品溶液在室温下24h内稳定。

  3.4检测限分别精密称取杂质对照品A、B、C、D、H、a、e,加入稀释溶剂逐级稀释后按上述相同色谱条件依法测定,以3倍噪音( S/N= 3)计算检出限分别为3.27 ng、2.85 ng、2.40ng3. 12ng.2. 64ng、0.85ng.2. 50ng、2.64ng。

  3.5耐用性试验

  3.5.1 柱温变化将柱温分别调为35℃、40aC、45C,取同一份供试品溶液,精密量取20pLl,进样测定。

  3.5.2流动相pH变化将流动相pH分别调为4.8、5.0、

  5.2.取同一份供试品溶液,精密量取20pul,进样测定。

  3.5.3检测波长变化将检测波长分别调为238nm、240rim、242nm.取同一份供试品溶液,精密量取20yl,进样测定。

  3.5.4流速变化 分别设定流动相流速为0.8 ml/min、1.0 ml/min、1.2ml/min,取同一份供试品溶液,精密量取20pLl,进样测定。

  4讨论

  4.1色谱条件采用本文中所列色谱条件对阿托伐他汀钙片进行有关物质检查,国外各国药典收载的特定杂质均能够被有效检出,分离度良好,相比于原药典方法能够更好地控制本品的质量。

  4.2有关杂质采用进口注册标准JX20070073有关杂质项下方法对其所控制的5个已知单杂进行定位,初步判断代码PD140728所指杂质为杂质A和杂质a的混合物,代码PD130694为杂质H/b,代码PD153824为杂质c,代码PD139844为杂质D。本文所列有关物质检查方法与进口注册标准JX20070U73有关物质项下方法检查结果基本一致。采用本文所列色谱条件,各特定杂质均能有效分离,更有利于产品质量控制。

  4.3降解途径阿托伐他汀钙片在氧化、高温、酸、碱及光照条件下不稳定,增幅较大的杂质有杂质a(阿托伐他汀吡咯烷酮化物)、杂质H/b(阿托伐他汀内酯)和杂质e/D(环氧化物)。杂质A(进口注册标准JX20070073有关物质项下色谱条件检查,与杂质A相对保留时间相同),在强制降解试验中没有变化;阿托伐他汀钙自制样品和被仿品立普妥杂质变化情况基本一致,已知杂质和未知杂质检出个数类似,各破坏产物峰与主峰分离良好。

  参考文献

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