HPLC法同时测定贵州不同产地女贞子中红景天苷、女贞苷、特女贞苷的含量

　　HPLC法同时测定贵州不同产地女贞子中红景天苷、女贞苷、特女贞苷的含量

　　张炯怡 王勇 宋晓宁 张志勇

　　(1.贵州省食品检验检测所，贵州贵阳550001;2.贵州省食品药品检验所，贵州贵阳550001)

　　关键词女贞子; 红景天苷; 女贞苷; 特女贞苷; HPLC; 含量测定

　　中图分类号：R282.5 文献标识码：B 文章编号：1000-744X(2017)10-1038-03

　　女贞子本品为木犀科植物女贞子( Ligustrumlucidum Ait.)的干燥成熟果实。具有发表透疹，清热解毒，升举阳气的功能。用于风热头痛，齿痛，口疮，咽喉肿痛，麻疹不透，阳毒发斑，脱肛，子宫脱垂等。2015年版《中国药典》收载的女贞子药材仅以HPLC法测定特女贞苷含量，测量成分单一，难以全面评价女贞子的质量。因此，增加成分控制，可使其的质量控制更加科学和完善。近年来，已有测定女贞子中齐墩果酸、熊果酸、女贞子苷‘胡、红景天苷等成分的报道，但未见同时测定女贞子苷、特女贞苷和红景天苷的研究。本文旨在建立一种新的HPLC方法，同时测定女贞子药材中女贞子苷、特女贞苷和红景天苷三个指标性成分的含量。该法简便、准确，可更全面的控制女贞子的质量。

　　1.材料与方法

　　1.1仪器和材料 安捷伦1260高效液相色谱仪、HP色谱工作站;红景天苷(中国药品生物制品检定所：110818-201206，含量99.8%)、女贞苷(中国药品生物制品检定所：111918-201102，含量88.6%)、特女贞苷(中国药品生物制品检定所：1119282012003，含量96.4%)，乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯。所收集的不同产地的女贞子经贵州省药品检验所熊慧林主任药师鉴定为正品女贞子药材。

　　1.2方法

　　1.2.1 色谱条件与系统适用性试验 以Allti-maTMC185m(4.6mm×250mm)为实验色谱柱;乙腈-0.2%磷酸溶液为流动相，梯度洗脱(0～10min,8%-12%A; 10～14min,12%-20%A; 14～25min，200/-25%A);检测波长220nm。理论板数按特女贞苷计算应不低于3000。按上述色谱条件获得对照品和样品的色谱图。

　　1.2.2对照品溶液的制备 精密称取红景天苷对照品0.01495g、女贞苷对照品0.01023g和特女贞苷对照品0.016 71 g，分别置100mL，100mL和10mL容量瓶，加甲醇溶解稀释至刻度，再分别取上述溶液3mL，2mL， mL至同-10mL容量瓶中，即得(每1mL各含红景天苷44.76 v_g、女贞苷18.13llg和特女贞苷161.08 Vg)。

　　1.2.3 供试品溶液的制备 取本品粉末(过三号筛)约0.5g，精密称定，精密加70%甲醇25mL，称定重量，置水浴上加热回流1.5h，冷却至室温，称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，续滤液经0.45y_m微孑L滤膜过滤，即得供试品溶液。

　　2.结果

　　2.1线性关系考察取上述混合对照品溶液2弘L，6肛L，10 UL，14 v_L，20 pL注入液相色谱仪，测得峰面积积分值。以进样量( v-g)为纵坐标，峰面积积分值为横坐标，分别绘制标准曲线，进行直线回归处理，得到相应的直线回归方程及相关系数，结果见表1。

　　表1 3个分析物的线性关系

　　直线回归方程 相关系数(r) 线性范围(vg)

　　2.2精密度试验 精密吸取上述红景天苷、女贞苷、特女贞苷混合对照品溶液10ul，注入液相色谱仪，重复进样6次，记录峰面积，结果显示红景天苷、女贞苷和特女贞苷的峰面积RSD分别为0.67%、1.18%和1.06%。以上结果表明，红景天苷、女贞苷、特女贞苷精密度良好。

　　2.3稳定性试验 精密吸取同一供试品溶液(批号：120824)10 VL，分别在0、2、4、6、8h进样，测定，记录峰面积，红景天苷、女贞苷和特女贞苷的RSD分别为0.70%、0.50%和0.14%。结果表明，供试品溶液在8h内稳定性良好。

　　2.4重复性试验取同一批供试品(批号：120824)分别精密称取6份，按正文方法处理，分别精密进样10V_L，测定其含量，结果红景天苷含量RSD值为1.83%，女贞苷含量RSD值1.68%，特女贞苷含量RSD值为1.33%。结果表明，供试品重复性良好。

　　2.5加样回收率试验 取已知含量的同一批供试品(批号120824)研细，精密称取约0. 25 g共6份，分别加入混合对照品溶液适量，按供试品制备所述方法处理，各精密吸取10 pL进样，测定峰面积，计算其加样回收率。结果见表2。

　　回收率(%)一型堡量(mg)一样品中含量(m型×100%X照品加入量(mg)

　　表2加样回收率试验结果(726)

　　2.6样品测定取收集的样品10批，10批样品按供试品溶液所述方法处理，精密吸取10p_L，进HPI。C仪测定，结果见表3。

　　表3 10批女贞子片中3个成分的含量

　　3.讨论

　　经全波长紫外吸收光谱扫描分析，红景天苷、女贞苷和特女贞苷在220 nm波长处有大吸收，且待测组分与杂质峰能够基线分离，检测灵敏度高。因此，采用220 nm作为本次研究的检测波长;通过比较Waters symmetry@ C18 5tLm(4.6 mm×250 mm)、ZORBAX Eclipse Plus C18 1.8y.m(2.1mm×100mm)、AlltimaTMC18 5rlm(4.6mm×250mm)和XBridgeTMC18 5tLm(4.6mm×250mm)四种不同品牌不同规格的色谱柱对红景天苷、女贞苷和特女贞苷的分离效果，发现AlltimaTMC18 5tLm(4.6mm×250mm)对三个待测成分的分离效果好，因此采用AlltimaTMC18 5y_m(4.6mm×250mm)作为本实验的色谱柱。选择流动相时，分别考察了甲醇一水、乙腈一水和乙腈-0. 2%磷酸水溶液三种流动相系统对待测成分分离效果的影响，由于出峰时间较快，所以多数方法采用乙腈一水系统，本研究结果显示乙腈-0. 2%磷酸水溶液相对于其他两组流动相，分离度较好，基线平稳，杂质干扰较小，故选用乙腈-0.2%磷酸水溶液作为本研究的流动相，同时比较了梯度洗脱与等度洗脱，采用梯度洗脱分离时间短，分离效果较好，终采用;1.2.1”项下的梯度洗脱程序。本研究比较了50%甲醇、70%甲醇和甲醇在相同提取时间下，对各待测成分提取效率的影响，结果显示70%甲醇提取较好;对比了超声和回流两种提取方式对提取率的影响，相对于超声提取，70%甲醇回流提取效果较好;分别考察了th、1.5h和2h回流时间对提取效率的影响，结果表明，回流1.5h与2h的提取效率均高于1h，但两者相差不大，所以本实验选择了70%甲醇回流1.5h的提取方式。本研究结果表明不同产地女贞子中3种成分含量差异较大，红景天苷含量质量分数在1.173 9～1.852 8mglg内，女贞苷含量质量分数在0.4873～0.7437mg-1g内，特女贞苷含量质量分数在6.0382～10.1533mg-1g。可能与女贞子产地、采收时间、药材采收后的处理条件等有关。

　　参考文献

　　[1]中国药典[S]-部，北京：中国医药科技出版社，2015：45.

　　[2]李梦.HPLC法测定女贞子中齐墩果酸的含量[J].安徽农业科学，2008，36(24)：10519，10 526.

　　[3]李涛，郝武常，徐长根，等.HPLC-ELSD法测定不同产地女贞子中齐墩果酸与熊果酸的含量[J].中药材，2005,28(5)：391-393.

　　[4] 张凤普.HPLC法测定女贞子中女贞苷的含量[J].临床合理用药，2010，3(3)：72-73.

　　[5]李元圆，何玉铃，张永勋.HPLC法同时测定台湾市售女贞子中红景天苷、女贞子苷的含量[J].药物分析杂志，2013,33(2):230-233.

　　[6]李元圆，何玉玲，张永勋.HPLC法同时测定台湾市售女贞子中红景天苷、女贞子苷的含量[Jl.北京：药物分析杂志，2013，33(2)：230.

　　[7]陈剑平，李圣，卢小凤.反相高效液相色谱法同时测定黄术健胃片中野黄芩苷、盐酸小檗碱及丹皮酚的含量[J].药物分析杂志，2010，30 (11)：2157.

　　[8]王西彬，陈畅，何希荣.RP- HPLC测定三黄片中黄芩苷和盐酸小檗碱的含量[J].中国实验方剂学杂志，2012，18(13)：128.

　　[9]吴雪丹，丁宝月，傅应华.HPLC法测定复方苦参洗剂中盐酸小檗碱和黄芩苷[J].中成药，2012，34(5):868.