高效液相色谱法测定咽炎片中肉桂酸的含量

　　高效液相色谱法测定咽炎片中肉桂酸的含量

　　黄静 蔡进 张丽 毛政益 陈瑞 肖婷婷 王磊 刘丽娜

　　(贵州医科大学药学院，贵州贵阳550004)

　　关键词 咽炎片; HPLC; 肉桂酸

　　中图分类号：R286.0 文献标识码：B 文章编号：1000-744X(2017)10-1040-02

　　咽炎片处方来源于中华人民共和国卫生部药品标准(中药成方制剂)，由玄参、百部(制)、天冬、牡丹皮、麦冬、款冬花(制)、木蝴蝶、地黄、板蓝根、青果、蝉锐、薄荷油组成，具有养阴润肺、清热解毒、清利咽喉、镇咳止痒之功能。我们采用高效液相色谱法，对药材中肉桂酸的含量进行了测定，建立本品科学、规范的定量控制指标，为咽炎片的深入开发应用提供试验依据。

　　1.材料与方法

　　1.1材料 仪器：电子天平(EL204，梅特勒一托利多仪器上海有限公司);岛津超快速高效液相色谱仪(Prominence I。C-20A上海纳诺实业有限公司)。试药：咽炎片(贵州缔谊健康制药有限公司，批号20140124，20140126，20140128);肉桂酸对照品(中国食品药品检定研究院，批号121363-201102);乙醇、甲醇均为色谱纯。

　　1.2方法 色谱条件：色谱柱为AgilentC18(规格4.6nm×150nm，5m);流动相为甲醇：2%冰醋酸水溶液(40：60);检测波长为278nm;理论塔板数按肉桂酸峰计算应不低于3000;进样量10肚I.;柱温为40℃;流速1.OmL/min。供试品溶液的制备：取咽炎片20片，除去薄膜包衣，研细，取约1g，精密称定，加甲醇25mL，称定重量，超声处理30min，放冷补重，用0.45tLm的微孑L过滤膜过滤，即得。阴性对照溶液(缺玄参药材)的制备：按照咽炎片处方和制法制得;精密称取阴性样品粉末lg，按照供试品溶液制备方法制备缺玄参的阴性对照溶液。标准曲线及线性范围考察：精密称定肉桂酸对照品约250tjg，置于50mL棕色量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成5p_g/mL对照品储备液，备用。分别精密吸取5tLg/mL肉桂酸对照品溶液0.5、1、2、4、6、8 mI。，分别置于10mI。棕色量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，进样测定。以对照品进样浓度为横坐标(X)，峰面积积分值为纵坐标(Y)绘制标准曲线。精密度试验：分别精密吸取肉桂酸对照品溶液10v_L，依次进样6次，即得。

　　将所得的值再进行相对标准偏差计算。重复性试验：取同一批号供试品(批号：20140124)，按照供试品溶液制备方法制备6份供试液，分别进样，测定，即得。根据回归方程计算样品含量并计算其RSD值。稳定性试验：取同一批号供试品溶液(批号：20140124)分别于0、4、8、12、16、20h进样测定，每次进样量为10uL，即得。求算所得结果的RSD值。加样回收试验：精密称取已知含量的咽炎片样品6份(批号：20140124，含肉桂酸22肚g/片)，各加入已知浓度(100t￡g/mL)的肉桂酸对照品溶液1mL，按供试品溶液的制备方法制备供试品溶液，按上述条件，测定其含量，计算回收率。样品测定：分别取3批样品，按供试品溶液制备方法及色谱条件项下进行提取、制备、进样，计算含量。

　　2.结果

　　2.1方法专属性考察结果 按照上述色谱条件对咽炎片供试品溶液、缺玄参阴性对照溶液和肉桂酸对照品溶液、进行色谱分析，表明阴性对照液对测定基本无干扰，供试品溶液中肉桂酸峰与杂质峰分离良好，不干扰测定，说明本方法专属性好。

　　2.2线性关系的考察 肉桂酸在0.005～0.08pg范围内进样量与峰面积呈良好的线性关系。线性回归方程：y一4.2×106+470 57，r值为0.999 1。

　　2.3精密度试验重复进样6次，峰面积积分值平均为133-529，RSD为2.1%。表明本方法精密度较好。

　　2.4重复性试验根据回归方程计算样品含量并计算，得到RSD%为2.3%(n=6)。表明本方法有较好的重现性。

　　2.5稳定性试验 同一批号6个时间点进样测定峰面积积分值平均为304 402，RSD为1.39%。

　　2.6加样回收试验结果。

　　2.7样品测定三批中试样品进行提取、制备、进样，计算肉桂酸含量值分别为21.4V_g/片、22.2pg/片、22.6ug/片。

　　3.讨论

　　咽炎片原质量标准没有含量测定项，质量标准简单，无法满足中药现代化的要求。课题组通过对咽炎片的组方化学物质基础研究相关文献的查阅，确定玄参在咽炎片处方中作为主药，其明显的抗炎药理作用，肉桂酸是其中的重要成分，所以增加肉桂酸的含量测定项，有助于提高咽炎片质量标准。提取时间的选择时，用甲醇作为溶剂处理样品，考察超声提取20、30、40分钟，结果显示超声处理20min提取效果不如30min，而30min与40min提取效果相当，故超声处理时间定为30min。为改善峰形，流动相选择了甲醇：2%冰醋酸水溶液(40：60);且在20min内可达到基线分离。

　　参考文献

　　[1] 卫生部药典委员会.卫生部药品标准[M].中药成方制剂(第二册)，北京：化学出版社，1993：161.

　　[2] 冯慧，林月英.RP-HPI。C测定咽炎片中哈巴俄苷和肉桂酸的含量测定[J].天津药学，2010，3(6)：126-127.

　　[3]徐福泉，徐旭东，陈士林.玄参化学成分及药理活性研究进展[J].中国现代医药，2013，15(12)：245-247.

　　[4] Chen X,Liu Y H,Chen P.Iridoid glycosyl esters fromScrophularia ningpoensis LJ]. Nat Prod Res, 2007, 21(3)：1187.

　　[5]付永慧，咽炎片质量控制方法及药动学研究[D].沈阳：沈阳药科大学药学院，2009.

　　[6]梁少强，谢仕伟，李国荣，咽炎片质量标准的研究[J].中国医药指南，2009，23(8)：312-314.

　　[7]文志云，刘元，莫海涛，等. TLC法定性鉴别咽炎片中3味中药[Jl.中国民族民间医药，2009，15(9)：223-225.

　　[8]徐福泉，徐旭东，陈士林，玄参化学成分及药理活性研究进展[J].中国现代医药，2013，15(8)：245-247.