目前我国是世界上食管癌死亡率高的国家之一,年平均死亡率为15．59／10万，且其发病率仍在显着上升，严重威胁着人民的生命健康。因此，从分子水平探讨食管癌的发生、发展机制及判断预后已成为食管癌研究的关键。CMTM3是一个新的潜在肿瘤抑制基因，RTPCR和实时定量PCR分析表明，CMTM3在人正常组织及正常上皮细胞广泛表达，但是在多种肿瘤细胞系和某些原发肿瘤中无表达或低表达。有关食管癌组织中CMTM 家族表达情况的研究目前较少，本研究观察食管癌组织和正常组织中CMTM3的表达变化，并探讨其临床意义。

　　1 资料与方法

　　1．1 一般资料 收集2011年1月～2012年1O月问在临沂市人民医院行食管癌根治术的患者62例，其中男性38例，女性24例，年龄35～78岁，平均54岁。所有病例均经病理学检查确诊，临床资料完整。每例均取食管癌及癌旁正常组织，62例食管癌均为食管鳞癌(ESCC)，所有患者术前均未进行化疗和放疗。

　　1．2 试剂 抗CMTM3抗体由北京大学基因中心提供，山羊封闭血清、PBS缓冲液、一抗稀释液、二氨基联苯胺(DAB)显色剂均北京中杉金桥生物科技有限公司。

　　1．3 HE染色 食管癌及正常组织常规石蜡包埋，连续切片(厚5 m)。切片脱蜡入水，苏木素染色2min，流水冲洗lmin，盐酸酒精分色3sec，充分水洗；浸入伊红染液染色lmin，蒸馏水洗3次；梯度酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片，显微镜下观察。

　　所有组织均进行HE染色，以进行病理分型，检查癌旁正常组织中有无癌细胞。

　　1．4 免疫组化染色 切片脱蜡入水，3H2O2封闭内源性过氧化物酶；0．01mol／L枸橼酸盐缓冲液煮沸20min，进行热抗原修复；5BSA封闭液37℃封闭20 min；滴加CMTM3抗体，用0．01MPBS代替一抗做空白对照。4℃冰箱孵育过夜；滴加二抗，37℃孵育20min；DAB显色，显微镜下控制显色时间；梯度酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。显微镜下观察切片，以细胞膜或细胞质中出现棕黄色细颗粒为阳性细胞，比较CMTM3阳性着色的位置和强度，并用显微照相系统照相，利用图像分析软件Image-PropPlus5．0分析、测定CMTM3蛋白表达的灰度值，每片随机取5个高倍镜视野，取其平均值记录为CMTM3蛋白表达的灰度值。

　　1．5 统计学处理 采用SPSS16．0统计软件对所记录数据进行分析，采用(x±5)表示，计量资料使用t检验，以P d0．05为差异有统计学意义。

　　2 结果

　　2．1 组织分型 显微镜下观察HE染色切片，所有正常组织中无癌细胞。62例食管癌确定病理分型为：高分化鳞癌2O例，中分化鳞癌28例，低分化鳞癌14例。

　　2．2 免疫组化结果CMTM3蛋白在食管鳞癌和正常组织均定位于细胞质和细胞膜，胞核无明显表达。食管癌组织CMTM3蛋白的表达明显低于正常组织，两组比较差异有统计学意义(P<0．05)，见表1。CMTM3蛋白在食管鳞癌的表达还与肿瘤的分化程度有关，分化程度越高，CMTM3蛋白的表达也越高。

　　3 讨论食管癌是世界上常见的恶性肿瘤之一，世界卫生组织公布的资料显示，2008年全世界新发食管癌48．2万例，发病率为7．0／10万，居全部恶性肿瘤第9位；死亡40．7万例，死亡率5．8／10万，居第8位。

　　食管癌发病率有着明显的地域差异和性别差异。

　　2008年中国食管癌发病率为16．7／10万，居全国各类恶性肿瘤第5位；死亡率居第4位。食管早期癌治疗后5年生存率高达9O%～100%，而进展期癌5年生存率为1O 左右，这与现有治疗方法对早期患者治疗的有效性有关，因此，提高食管癌患者生存率关键在于早期诊断。CKLF样MARVEL穿膜结构域超家族(CKLFlike MARVEL transmembrane domain containing family，CMTM)是北京大学人类疾病基因研究中心在国际上首次报道的一个新基因家族。在人类，该家族包括9个成员，即CKLF和CMTM18，其编码产物的结构和功能特点介于经典的趋化因子和四次跨膜蛋白之间。它们在免疫系统、男性生殖系统发挥重要作用，并参与肿瘤的发生、发展和转移。其中CMTM3定位于染色体16q22．1，该位置是肿瘤抑制基因聚集的区域，在多种原发肿瘤中存在缺失。近年研究表明，人类趋化素样因子超家族成员具有广谱的免疫细胞趋化活性，可以影响多种细胞的增殖、分化和凋亡，目前也有文献证实超家族成员在多种恶性肿瘤组织中明显低表达。近也有研究证实超家族成员具有明确的抑制肿瘤活性作用 n 其抑制肿瘤的机制尚不清楚。本研究发现，食管鳞癌组织中CMTM3的表达明显低于正常组织，说明CMTM3有抑制肿瘤的作用，这与查鹏对CMTM4、8的研究结果相一致，但其确切机制有待于进一步研究。