胃癌是世界第二大常见恶性肿瘤，每年新发病例约占新发所有癌症病例的8．6%，仅次于肺癌、乳腺癌和结直肠癌，排在第4位。在中国，胃癌病例约占全球的42%。然而，仅有3O%～5O%的胃癌患者有接受手术治疗的指征，而且术后生存率也不理想；辅助化疗虽能增加生存率，但化疗后有白细胞数降低、恶心、呕吐、脱发等副作用，不同程度的影响患者的生活质量。因此，如何减轻化疗药物的毒副作用，寻找更低毒、高效的抗癌药物，仍是广大医务工作者亟需解决的难题。近年来，采用中药辅助治疗胃癌的方法逐渐成为研究者关注的热点。金花茶系山茶科山茶属金花茶组植物，有;大熊猫”和;茶族皇后”的美誉，是广西极具开发价值的特色资源植物。对金花茶活性及功能因子的研究表明，金花茶不仅具有抗衰老、降血压、降血糖、增强机体免疫力、抗氧化活性，还具有对多种恶性肿瘤(肝癌、鼻咽癌等)的细胞毒作用和抑制这些肿瘤细胞的生长的抗癌作用。目前金花茶对胃癌的作用效果还未见报道，因此，本研究通过观察金花茶水提取物对人胃癌MGC一803细胞增殖的影响，探讨金花茶对人类胃癌的防治作用，研究新的具有广西特色的防癌药物，为进一步开发金花茶的药用价值提供实验研究资料。

　　1 材料与方法

　　1．1 试剂与仪器：金花茶(中国广西)；人胃癌细胞MGC一803(中国科学院上海生物研究所细胞库)；RPMl1640培养液(美国Hyclone公司)；胎牛血清(美国Hyclone公司)；胰蛋白酶(美国Hyclone公司)；噻唑蓝(MTT，美国Slgma公司)；二甲基亚砜(DMSO，美国Slgma公司)；超净台(BBS-DSC)；二氧化碳细胞培养箱(美国Thermo Flsher)；倒置显微镜(日本0一LYMPUS CKX31)；全自动酶标系统(美国Thermo MULTlSKAN M K3)

　　1．2 方法

　　1．2．1 水浸提法制备金花茶茶花水提取物：称取10 g金花茶茶花用研钵研碎，置于干燥器中备用，按1：10的料液比(w／v)，即10 g茶花+100 mL三蒸水，在90℃ 恒温水浴锅中浸提1 h。重复3次。浸提液用0．22m微孔滤膜级50 mL一次性无菌注射器抽滤，然后用真空冷冻干燥机在一80℃下冷冻干燥，得褐色冻干结晶。将其储存于干燥器中，于一20℃保存。待使用时取出溶于1640培养液配制成所需浓度。

　　1．2 2 细胞培养：人胃癌MGC-803细胞培养于含10胎牛血清的1640培养液中，在37℃ 、5 COz饱和湿度的培养箱中培养，每天观察细胞的形态、数量、培养液的颜色，2～3 d传代1次。

　　1．2．3 细胞生长曲线的制定及细胞群体倍增时间(TD)：胃癌细胞以1×10 ／mL 的浓度接种于24孔培养板，每孔1 mL，每天在相同时间点取3孔细胞进行消化并用血球计数板计数每孔细胞数，计算3孔细胞数平均值，持续计数8 d；以时间为横轴、每天细胞均数为纵轴绘制细胞生长曲线，根据公式计算人胃癌MGC-803细胞的TD：TDt×1g2／(1gNt-lgNo)](t为培养时间，No为首次记下的细胞数，Nt为t时间后的细胞数)。

　　1．2．4 MTT法测细胞增殖抑制率：取对数生长期的胃癌细胞，消化并制备成单细胞悬液，以5×10 ／mL的密度接种于96孔培养板，培养于含1O 胎牛血清的1640培养液中，每孔200;L，24 h细胞贴壁后，实验分为实验组和对照组，每组设3个复孔。实验组加入药物，终浓度分别为500，600，700，800，900，1 000，1 100 mg／l ，对照组不加药物。继续培养24，48，72 h后每孔分别加人2O L(5 g／L)的MTT，继续培养4 h，吸尽每孔中的液体，然后每孔加入150 L DMSO，震荡10 mln，在酶标仪上测每孔490 nm的吸光度(OD)值；因为药物本身为褐色，在490 nm处也有光吸收，会影响实验结果，所以每个实验组都另设只加各药物浓度处理的细胞不加MTT处理的空白孔，单独测定由于药物残留而产生的0D值，实验组OD值应扣除该OD值。实验重复3次。细胞增殖抑制率一(1一实验组OD值／对照组OD值)×100％ 。

　　计算细胞增殖抑制率及金花茶水提取物半数抑制浓度。以金花茶水提取物浓度为横轴，各浓度对应的金花茶水提取物的平均抑制率为纵轴绘制金花茶水提取物作用24，48，72 h后的抑制作用曲线。

　　1．2．5 统计学分析：应用SPSS 13．0统计软件，结果以均数士标准差(z±S)表示；多组间采用单因素方差分析(one wayAN0VA)，两两比较采用LSD-t检验，P<O．05差异有统计学意义

　　2 结 果

　　2．1 人胃癌MGC一803细胞生长曲线及TD：细胞接种24 h内，细胞增殖比较缓慢，在2～6 d后细胞数明显增加，6～7 d细胞增殖减慢呈平台状，7～ 8 d细胞数开始减少。胃癌MGC一803细胞生长曲线图呈;倒s”型。通过群体倍增公式计算，MGC一803 TD-20 h。

　　2．2 采用MTT检测金花茶水提取物对人胃癌MGC一803细胞增殖抑制作用的结果显示，随着金花茶浓度和时间的增加，增殖抑制率逐渐升高，呈剂量依赖性，见图2。SPSS13．0统计结果显示，相同浓度下，48，24 h抑制率差异有统计学意义(P<0．001)；72，48 h抑制率除500 mg／L组(P>0．05)和700 mg／L组差异无统计学意义(P>0．05)，余各组均差异有统计学意义(P < 0．01)。见表1。根据实验数据经SPSS13．0统计分析得，24，48，72 h的lC5。分别为(912．33±12．70)，(789．67±10．69)，(746．00±6．08)mg／L。可见，随着金花茶水提取物对人胃癌MGC一803细胞作用时间的的增加，lc也明显降低。

　　3 讨 论金花茶富含对人体有重要保健作用的天然有机锗、硒、铁、铜、锰、锌、钻、钼、钒等多种保健功能的微量元素以及各种氨基酸、维生素、茶多酚、茶多糖、黄酮类和皂苷等多种人体必需的营养成分。既往研究发现金花茶对BEL一7404肝癌细胞l7 及CNE一2鼻咽癌细胞均有不同程度的抑制增殖作用，且抑制作用和浓度呈量效关系。这些实验在一定程度上揭示了金花茶的抗癌效应，但是否对所有肿瘤细胞都有作用，仍有待进一步研究。

　　本研究以人胃癌MGC一803细胞为研究对象，以水煮金花茶模拟人日常喝茶方式，观察金花茶水提取物对胃癌是否有抑制作用。首先通过细胞生长曲线和MGC-803 TD=20 h可推测细胞对数生长期为2O～ 144 h，所以后续实验都在2O～144 h细胞对数生长期进行。MTT实验结果显示金花茶水提取物对MGC一803细胞的抑制作用呈剂量依赖性。由不同浓度的金花茶水提取物对MGC一803细胞的增殖抑制率曲线和统计学结果E48 h组与24 h组抑制率差异有统计学意义(P<0．001)，72 h和48 h组抑制率500，700 mg／L抑制率差异无统计学意义(P>0．05)，可得出金花茶水提取物作用的佳时间为48h，所以后续实验可选在金花茶水提取物作用48 h进行，浓度可选取抑制率5O 前后的600，8O0，1000 mg／L。

　　综上所述，金花茶水提取物对MCG-803细胞的增殖有抑制作用，且抑制作用和浓度呈量效关系。但我们还需要进一步的研究来阐明金花茶水提取物对MGC一803细胞抑制作用的机制，以便更明确金花茶辅助治疗胃癌的应用价值，为我们寻找安全、有效地抗胃癌药开拓新思路。