1仪器与材料丹参酮ⅡA对照品(批号:110766200619,购于中国药品生物制品检定所);丹参(批号:1202031,购于四川新荷花中药饮片股份有限公司)。药材经检验符合《中国药典}2010年版标准。

  高效液相色谱仪waters2695,waters2424蒸发光散射检测器;高速冷冻离心机(Eppendorf公司);BSI10S电子分析天平(北京赛多利斯电子天平有限公司);HHS6A恒温水浴锅(北京科伟永兴仪器有限公司);超声波清洁器(昆山市超声仪器有限公司);旋转蒸发器(上海亚荣生化仪器厂);循环水真空泵2实验方法与结果2.1正交试验设计影响醇提效果的主要因素为醇浓度(A)、提取时间(B)、提取次数(C)。所以选用正交试验设计表试验,因素与水平。

  2.2样品含量的测定

  2.2.1色谱条件岛津LC.10AT二极管阵列检测器,色谱柱:ult@mateXD.C18,4.6mm×250.0mm×5.0m,柱温:35℃,流动相:甲醇一水(75:25),流速:1.0mL/min,检测波长:270nm。

  2.2.2标准曲线与线性精密称取丹参酮Ⅱ对照品5.0mg,加甲醇定容至5.0mL,再精密吸取1.0mL,加甲醇定容至100.0mL,即得0.01mg/mL的丹参酮Ⅱ对照品溶液。以对照品溶液1.0、4.0、7.0、10.0、13.0、16.0、20.0L进样,记录色谱图。

  并以进样量为横坐标,以峰面积为纵坐标,进行线性回归。所得标准曲线:Y=8190602.5x7813.1,r=0.99986,说明丹参酮Ⅱ在0.01~0.20g线性关系良好。

  2.2.3供试品溶液制备取本品粉末(过三号筛)约0.3g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇50.0mL,称定重量,加热回流lh,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。

  2.2.4对照品溶液的制备取丹参酮Ⅱ对照品10.0mg,精密称定,置50.0mL棕色量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀;精密量取2.0mL,置25.0mL棕色量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,即得(每1.0mL中含丹参酮ⅡA16.0g)。

  2.2.5加样回收率实验分别精密称取已知量的供试品50.0mL共3份,分别精密加入2份丹参酮Ⅱ对照品溶液各3.0mL,按样品含量测定方法测定丹参酮Ⅱ含量,计算回收率,结果平均回收率为98.70%,RSD=0.52%。

  2.3实验结果与分析

  2.3.1提取工艺条件考察正交试验数据。

  根据正交实验结果进行极差分析及方差分析,结果显示A、B均不具有显着性差异,C具有显着性差异。影响程度C>A>B,佳工艺条件为A2BC3。

  2.3.2重复性试验与结果对优选出来的方案进行验证试验,即同一方案做3次,看是否与原实验结果基本一致,结果见表5。从综合生产成本和节省资源考虑,提取时间的P>0.05,所以提取时间不是显着性因素,以降低成本角度看0.5h比1h经济,所以拟选择AB。C作为实施方案,并对其进行比较验证,结果见表6。试验结果表明,两个方案试验结果基本一致,并且第2个方案工艺稳定,为降低成本后决定选择A:B,c,即佳提取工艺为醇浓度为80%,提取3次,每次提取时间为0.5h。

  3讨论

  丹参药材中水溶及脂溶性成分都呈现显着药理作用,而脂溶性成分又以丹参酮Ⅱ为主要指标。

  因此,在对丹参药材进行质量标准控制的时候,应对丹参酮Ⅱ含量进行含量控制。而丹参酮的不稳定性易对提取率造成极大影响。因此,提取中应选佳提取试剂、控制好提取时间,以及回收条件,以达大收率。