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北五味子花粉萌发生长条件实验研究-医药销售毕业论文

时间:2012-04-26 10:59来源:未知 作者:360期刊网2 点击:

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1  材料
  于通化师范学院生物系桃源实验基地,采集少量盛开花、多数为即将开放花蕾的北五味子花序,置于冰盒带回实验室,放置室温下待其自然开放,取刚开裂花药中的成熟花粉供实验用。
  2  方法
  2.1  实验处理和花粉活力测定
  2.1.1  硼酸浓度梯度实验
  把新鲜花粉均匀地撒在蒸馏水(CK)和浓度梯度为0,10,20,30,40 mg/L的硼酸培养基上,盖紧盖玻片后置于25℃下恒温培养。
  2.1.2  蔗糖浓度梯度实验
  把新鲜花粉均匀地撒在蒸馏水(CK)和浓度梯度为0%,5%,10%,15%和20%的蔗糖培养基上,盖紧盖玻片后置于25℃下恒温培养。
  2.1.3  花粉萌发率和花粉管长度的检测
  每处理重复3次,每次随机取3个视野,每视野观察30粒以上。以花粉管长度大于花粉粒直径1/2以上者为萌发标准[5,6],统计花粉萌发率(%),用目镜测微尺测量花粉管长度(μm),每视野随机测量10个花粉,每处理共测50个花粉管长度,计算其平均值。经SAS统计软件进行实验数据显着性分析。
  3  结果
  3.1  蔗糖浓度与北五味子花粉萌发生长的关系
  3.1.1  蔗糖从图1可知,随着培养基内蔗糖浓度的增加,花粉萌发率逐渐上升,花粉管长度伸长。当浓度达15%时,花粉萌发率达到最大值,为64.17%,是对照的3.467倍;但浓度超过20%时,对花粉萌发有抑制作用,花粉萌发率急剧下降到37.50%,仅为对照的1.71倍。但不同蔗糖浓度对花粉管生长的影响有所不同,当蔗糖浓度在20%以内时,花粉管生长长度随着蔗糖浓度的增加而增长,浓度为20%时达最大值为498.23 μm,超过该浓度后,花粉管的生长长度又呈逐渐下降趋势。方差分析表明萌发率在10%,15%浓度下与对照,20%,的浓度存在显着差异。虽然花粉管长度在浓度为20%时显着高于其它浓度,但是其萌发率极低,因此最佳蔗糖浓度为10%或15%。
  3.1.2  硼酸在一定浓度范围内,花粉萌发率和花粉管生长随培养基内H3BO3浓度的增加而增加,但超过一定浓度时,H3BO3对北五味子花粉萌发和花粉管生长度起抑制作用(图2,A)。花粉萌发率最高的H3BO3浓度为30 mg/L,在该培养基内花粉萌发率达47.62%,是对照(培养基中无H3BO3)的2.57倍。花粉管生长的最佳硼酸浓度也为30 mg/L(图2),此时花粉管生长长度为471.56 μm。方差分析表明:花粉萌发率在H3BO3浓度为10,20和40 mg/L时萌发率无显着差异;而在30 mg/L的浓度时长势最好。因此H3BO3的最佳浓度为30 mg/L。
  3.1.3  北五味子花粉离体培养最佳培养条件的选择
  在单因子实验的基础上,选取对北五味子花粉萌发影响较大的蔗糖、硼酸采用正交实验设计,寻找2因子的最佳组合(见表1)。对表1中数据进行单因素和交互作用分析,实验结果表明:蔗糖各浓度下的北五味子花粉萌发率以15%最高,H3BO3各浓度以30 mg/L最高,花粉萌发率均超过其单独作用效果,花粉最大萌发率达81.81%,花粉管长度达483.20 μm因此最佳的组合培养液为15%蔗糖+30 mg/L H3BO3。用该液体培养基培养时,花粉管生长良好,没有异常现象(见图3A),但是在浓度过高时花粉管的生长容易出现波浪式弯曲生长(见图3B)。
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