医药营销技巧论文 医药学论文发表 药学论文发表 临床医学论文
1 仪器与材料
Agilent 1100型高效液相色谱仪（四元梯度泵，DAD检测器，HP Chem Station 色谱工作站，美国安捷伦科技），上海BRANSONSB2200超声波发生器，D1810C型电子分析天平（上海申生科技有限公司），R-201型旋转蒸发器（上海申生科技有限公司），万能粉碎机（天津泰斯特仪器有限公司）。
芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚对照品购自中国药品生物制品检定所；四川产大黄药材购于湖南国杏中药饮片有限责任公司，经湖南中医药大学药学院中药鉴定教研室鉴定为正品。药材于40 ℃干燥、粉碎过40目筛，贮于干燥器中置暗处保存备用；甲醇、乙腈、磷酸均为江苏汉邦科技有限公司生产的色谱纯，二次蒸馏水，乙醇、醋酸乙酯、石油醚、正己烷等均为北京化工厂生产的分析纯试剂。
2 方法与结果
2.1 HPLC-DAD分析条件色谱柱为Waters PAH C18色谱柱（4.6 mm×250 mm, 5 μm）；柱温：25℃ ；进样量：20 μl；流速：1.0 ml/min；检测波长225 nm。流动相为甲醇-乙腈-0.01%磷酸溶液 （3∶5∶2）。试样过0.45 μm的微孔滤膜后进行HPLC分析。
2.2 标准溶液的配制
2.2.1 标准储备液精密称取5种对照品适量，加甲醇配制成含芦荟大黄素（135 μg/ml），大黄酸 （105 μg/ml），大黄素（90 μg/ml），大黄酚（90 μg/ml），大黄素甲醚（75 μg/ml）的标准混合储备液。于4 ℃下冷藏，备用。工作标准液临用前精密吸取适量加甲醇配制成每1 ml分别含芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚为13.5，10.5，9，9，7.5 μg的工作标准液。
2.3 样品溶液制备称取0.5 g 大黄细粉，用15 ml溶剂（正己烷、石油醚、氯仿、醋酸乙酯、丙酮、甲醇、80%甲醇、乙醇、70%乙醇、水）进行超声提取， 抽滤，滤液于40 ℃下真空旋转蒸发至干，后用甲醇溶解定容于10 ml容量瓶中，于4 ℃下冷藏，备用。
2.4 方法学实验
2.4.1 色谱分离在拟定的色谱条件下，得到芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚及大黄素甲醚的标准色谱图（图1a） 以及大黄药材样品的色谱图（图1b） 。由图1可知，样品中芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚与相邻组分的分离度Rs>1.5 ,达到基线分离。线性关系取混合标准储备液适量，用甲醇稀释成一系列不同浓度的标准溶液，分别进样3次，以标准溶液浓度X对峰面积Y进行线性回归，各组分在各自浓度范围内线性关系良好。精密度考察精密度分为日内精密度和日间精密度。对同一工作标准液在日内连续进样5次，得日内精密度，结果测得峰面积的RSD为芦荟大黄素0.65%，大黄酸1.09%，大黄素0.98%，大黄酚1.39%，大黄素甲醚1.71%；在连续3 d内分别测定5次得日间精密度，结果测得峰面积的RSD为芦荟大黄素3.46%，大黄酸2.52%，大黄素3.26%，大黄酚3.15%，大黄素甲醚3.06%。重复性考察在上述色谱条件下，对同一批样品按样品溶液的制备方法平行制备6份，分别进样20 μl，进样测定，按外标法测定含量并计算RSD，芦荟大黄素2.52%，大黄酸2.20%，大黄素2.10%，大黄酚2.07%，大黄素甲醚2.89%。
2.5 方法的应用－最适超声提取工艺的确定称取0.5 g 大黄细粉，用50ml溶剂（正己烷、石油醚、氯仿、醋酸乙酯、丙酮、甲醇、80%甲醇、乙醇、70%乙醇、水）进行超声提取30 min, 抽滤，滤液于40 ℃下真空旋转蒸发至干，后用甲醇溶解定容于10 ml容量瓶中，于4 ℃下冷藏，备用。在上述色谱条件下对各提取液进行HPLC分析，测定其中5种游离蒽醌含量。
表3结果表明，正己烷等低极性溶剂提取大黄游离蒽醌效率低，而甲醇，乙醇提取率高，在水中提取效率很低，且提不出大黄酸，这是因为其在水中溶解性小。大黄游离蒽醌中的芦荟大黄素、大黄酸、大黄素在以80%甲醇作为提取溶剂时，提取率最高；大黄酚、大黄素甲醚在以甲醇作为提取溶剂时，提取率最高；游离蒽醌提取效率次高的为70%乙醇。考虑到甲醇有毒，不宜用于食品和药物的加工，而乙醇从自然得来，成本低等诸因素，我们认为70%乙醇最合适。
以70%乙醇为提取溶剂，其他条件不变，考察不同超声提取时间（10，20，30，40，60 min）对5种游离蒽醌提取率的影响：芦荟大黄素、大黄酸、大黄素在20 min时提取率最高（2.092，2.913，2.497 mg/g），大黄酚、大黄素甲醚在40 min提取率最高（5.069 mg/g、1.294 mg/g），在20 min时次之（5.042 mg/g，1.286 mg/g），综合考察选择20 min为提取时间。以同样的方法，分别考察了不同料液比（1∶5，1∶10，1∶20，1∶30，1∶40，1∶50 g/ml）以及超声提取次数对提取效率的影响。结果显示，5种大黄游离蒽醌在1∶30料液比时提取效率最高；超声提取两次最为合适。
医药市场营销论文 https://www.360qikan.com/
