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关于植物抗菌肽的研究-医学统计学论文

时间:2012-04-24 09:52来源:未知 作者:360期刊网2 点击:

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  凤仙花是一种较早开发的药用植物。中医认为, 凤仙花子能通经活血、软坚散结;根叶有散血通络、祛风止痛、解毒疗疮之功效。近年来,研究发现凤仙花还有抑菌、消炎和抗癌等作用。抗菌肽(AMPs),是生物界中广泛存在的一类生物活性小肽,具有抗细菌或真菌作用,有些还具有抗原虫、病毒或肿瘤细胞的功能[1]。抗菌肽具有广谱的抗菌作用,对革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌、真菌具有抑制作用;可以杀伤动物体内的肿瘤细胞,却又不破坏动物体内的正常细胞[2,3]。因此,抗菌活性肽的开发与应用研究已成为国内外昆虫学、植物学、生理学、药理学研究的热点。
  通过对航天诱变凤仙花种子总蛋白质的粗提、分离和纯化,经电泳获得了分子量在2 KD左右的具有抗菌活性的小分子蛋白质,推测航天诱变的凤仙花种子中存在抗菌肽。1997年,Tailor等首次从凤仙花种子中分离出4种对真菌和细菌表现出宽范围的抑制作用,而对培养的人细胞没有毒性的肽-Ib-AMP1、Ib-AMP2、Ib-AMP3、Ib-AMP4,而本实验室分离纯化出来只有一种小肽。一方面说明,航天诱变凤仙花种子中抗菌肽的基因可能已经发生了改变,另一方面也可能由于这4种基因编码的小肽分子量接近,在电泳时不易分开,要想彻底弄清该基因是否发生了突变还有待于进一步深入研究。
  本试验采用的材料是普通凤仙花种子搭载“神舟四号”航天飞船绕太空运行6天18小时后播种,由凤仙花航天突变植株获得的第四代种子(SP4)。研究[4~7]证实航天诱变凤仙花种子,由于宇宙射线、交变磁场、微重力和高真空等因素的影响,其染色体出现了大规模不规则变异,可能导致基因突变,从而影响植物体内蛋白质的合成。因此,航天诱变凤仙花抗菌肽的分离、纯化具有重要的研究价值,对航天诱变育种、抗菌肽的大量生产以及抗菌药物的开发等具有实际意义,在国内外尚属首次。
  本实验选用动物源性金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌 和植物源性枯草芽孢杆菌 4种菌株来做抑菌试验,发现提取的低分子量蛋白质对金黄色葡萄球菌和绿脓杆菌有明显的抑菌作用,但对大肠杆菌的抑菌作用比较弱,对枯草芽孢杆菌的抑菌作用不明显。在接种的过程中发现,随着低分子量蛋白质溶液量的增加,抑菌圈从无到有,从小到大,因而证明种子中确实存在具有抗菌作用的分子量大约2 KD左右的小肽,即抗菌肽。但是其抗菌机制和抗菌谱还需要进一步研究建立。
  本实验表明,从航天诱变凤仙花种子中直接分离纯化小分子抗菌肽,由于材料比较少、分离纯化过程繁琐、成本高、不易检测以及容易失去活性等。因此,要获得大量抗菌肽进而研究其抗菌机制、理化性质、分子结构等,还需要采用基因工程技术构建cDNA文库和抗菌肽基因工程菌,为筛选抗菌肽基因和大量生产抗菌肽奠定基础。
  目前,凤仙花抗菌肽对绿脓杆菌的抑菌活性并未见报道。绿脓杆菌是是伤口感染较常见的一种细菌,能引起化脓性病变其致病力较低但抗药性强。通过本实验发现,航天诱变凤仙花种子中纯化出的小肽对绿脓杆菌具有较强的抑制作用,为以后开发肽类抗生素、特别是针对耐药性细菌的药物具有重大意义。
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