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1 仪器与试药
Agilent 1200 高效液相色谱仪（DAD检测器，VWD检测器）。乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯。栀子苷对照品（中检所，批号110749-200511）；西红花苷-1对照品（中检所，批号111588-200501）；本实验共收集江西、浙江、湖南、广西等产地不同品种的栀子共11批，经鉴定为栀子G.jasminoides Ellis的干燥成熟果实。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱： Agient Zorbax Eclipse XBD-C18（4.6 mm×250 mm,5 μm），流动相：A（乙腈），B（水）。0～20 min,VA∶VB=10～90;20～40 min,VA∶VB=20～40,二元梯度洗脱。检测波长：238 nm（0～20 min）；440 nm（20～40 min），柱温：30℃，流速：1 ml/min，进样量：10 μl。
2.2 波长转换点及梯度洗脱程序的考察
根据栀子中环烯醚萜苷类和西红花苷类化合物的极性差异，在分段考察该两类成分梯度分离条件的基础上，优化并确定了梯度洗脱程序。反复调节流动相梯度，使环烯醚萜苷类和西红花苷类各色谱峰均具有较好的分离度，确定梯度洗脱程序。由于238 nm色谱峰集中在0～18 min, 440 nm色谱峰集中在22～60 min。因此，选取20 min为检测波长转换点，采用HPLC系统中的操作软件进行程序设定，使检测波长由238 nm变为440 nm，在同一色谱条件下同时检测栀子中的环烯醚萜苷类和西红花苷类成分的含量。
2.3 供试品溶液的制备
取栀子药材50℃干燥12 h,粉碎，过40目筛。取粉末约0.1 g,精密称定，置圆底烧瓶中，精密入甲醇-水（50∶50）25 ml,回流提取60 min,放冷，再称定重量，用50%甲醇补足失重，摇匀，过滤，精密量取续滤液2 ml置10 ml量瓶中，用50%甲醇定容，摇匀，经0.45 μm的微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液。
2.4 对照品溶液的制备
称取栀子苷对照品适量，精密称定，用甲醇制成每毫升含栀子苷20.6 μg的溶液，得栀子苷对照品储备液，同样条件下制成每毫升含18 μg西红花苷-1的溶液，得西红花苷-1对照品储备液。分别取上述各贮备液适量，用甲醇定容，制成每毫升含栀子苷50 μg、西红花苷-1为4 μg的混合对照品溶液，经0.45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液作为混合对照品溶液。进样，得到各对照品色谱图。结果见图2～4。
2.5 方法学考察
2.5.1 线性关系考察精密吸取对照品储备液适量，加甲醇适量，分别配制成不同浓度的对照品溶液：栀子苷：2.42，4.52，22.6，45.2，90.4，180.8 μg/ml；西红花苷-1：0.9，1.8，3.6，5.4，7.2，9.0μg/ml。在确定的色谱条件下分别测定不同浓度栀子苷和西红花苷-1对照品，平行测定3次，以峰面积对对照品系列浓度进行回归，绘制标准曲线，结果表明，栀子苷在4.52～ 180.8 μg/ml之间与峰面积线形关系良好，回归方程为：A=13.585C+3.688，r=0.999 9；西红花苷-1在0.9～9.0 μg/ml之间与峰面积线形关系良好，回归方程为：A=171.733 4C-21.648 2，r=0.999 7。
2.5.2 精密度实验精密吸取适宜浓度的栀子苷、西红花苷-l对照品溶液各10 μl，连续测定6次，记录峰面积，其中栀子苷对照品峰面积的RSD=0.21%,西红花苷-l对照品峰面积的RSD=0.97%，表明仪器精密度良好。稳定性实验精密吸取同一供试品溶液10 μl，分别于0，1，2，4，8，12 h测定，记录栀子苷、西红花苷-l峰面积，栀子苷的RSD=0.64% ，西红花苷-l的RSD=1.96%，表明供试品在12 h内稳定。重复性实验平行配制6份同批供试品溶液，分别测定，记录栀子苷、西红花苷-l峰面积，栀子苷的RSD=1.93%，西红花苷-l的RSD=0.82%，实验的重现性良好。
2.5.5 加样回收率实验称取已知含量的栀子粉末（过40目筛）9份，每份约0.1 g，精密称定。精密加入栀子苷、西红花苷-l对照品，按供试品制备方法制备供试品溶液，进行测定，计算回收率。栀子苷平均回收率为99.52％，RSD为1.10%（n=9）， 西红花苷－1平均回收率为100.76%,RSD为1.41%（n=9）。
2.6样品的测定及结果按照供试品制备方法制备样品并对不同产地及各品种栀子中栀子苷及西红花苷－1进行测定。 栀子苷95%置信区间为4.20%～6.73%；西红花苷-1的95%置信区间为0.12%～0.44%；结合生产实际，暂定本品含栀子苷不得少于3.0%，西红花苷-1不得少于0.1%.本实验采用波长转换点检测方法，即栀子苷集中在0～18 min, 西红花苷集中在22～60 min。选取20 min为检测波长转换点，可以在同一色谱条件下同时检测栀子中的环烯醚萜苷类和西红花苷类成分。且实验重复性好，回收率高，稳定性可靠，此法可用于环烯醚萜苷类和西红花苷类的含量测定。根据实验结果，各产地栀子苷的含量均大于药典规定量，质量较好。
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