妇科护理论文范文 医学护理论文 护理学论文发表 医学核心期刊
穿心莲通常是种子繁殖，故种子的鉴定及其品质极为重要。蛋白质是基因表达产物，具有一定的稳定性，但亦会受环境的影响而发生基因的变异，形成不同的生态型甚至变种。本研究首次利用SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝胶电泳技术，对广东省4个不同来源地的穿心莲种子及同一产地不同采收期的穿心莲种子水溶性蛋白进行了蛋白质电泳的初步研究。
1材料与方法
1.1材料
采集4个不同地区和同一地区3种不同采收期的成熟穿心莲果实，室温下阴干，待果皮自然裂开弹出种子。收集于种子瓶中置室温阴凉处保存，各种子来源见表1。
1.2仪器与试剂
DYY-11型电泳仪（北京市六一仪器厂），DYCZ-24DN双垂直平电泳槽（北京市六一仪器厂），TDL80-2B台式离心机、HK3300H超声波清洗器（上海科导超声仪器有限公司），PHS-30酸度计（上海精密科学仪器有限公司），HC-TP12-2型架盘药物天平（北京医用天平厂）。表1穿心莲种子来源2 mol·L-1 Tris-HCl（pH=8.8），1 mol·L-1Tris-HCl（pH=6.8），10%（质量浓度）SDS，50%（体积分数）甘油，1%（质量浓度）溴酚蓝，考马斯亮蓝R-250染液（取0.04 g考马斯亮蓝R-250，加入甲醇18 mL、蒸馏水18 mL和冰醋酸4 mL，即得），考马斯亮蓝脱色液（10 mL甲醇、10 mL冰醋酸和80 mL蒸馏水混匀），30%（质量浓度，下同）丙烯酰胺，0.8%N，N'-甲叉双丙烯酰胺，10%SDS，10%过硫酸铵，1%溴酚蓝。
1.3方法
1.3.7样品溶液的制备[8]取穿心莲种子0.5 g，加入稀释5倍的样品缓冲液（pH6.8）2 mL，3%聚乙烯毗咯烷酮（PVP），冰浴下研磨，加入稀释4倍的5%浓缩胶缓冲液1 mL，振摇，混匀，超声20 min，室温离心20 min（4 000 r·min-1）。取上清液，离心20 min（4 000 r·min-1）， 取上清液， 加入石油醚 2 mL，振摇2 min，静止分层。吸取下层液体，加入适量冷丙酮，振摇，置4 ℃冰箱30 min，取出，离心5 s（4 000 r·min-1），弃去丙酮，风干。沉淀物加入样品缓冲液2～3 mL，振摇2 min，超声5～10 min，待溶解完全后，室温下离心5 min（4 000 r·min-1），取上清液，置4 ℃冰箱中存放，备用。
1.3.8电泳缓冲液的配制取Tris碱3 g、甘氨酸14.4 g和SDS 1 g， 加入蒸馏水至1 L， pH 8.3， 在 4 ℃冰箱中存放，备用。
1.3.9电泳操作采用1 mm厚的SDS-聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳，浓缩胶浓度为5%，分离胶浓度12%，电极缓冲液为Tris-甘氨酸，pH8.3。用微量注射器分别取样品液25 μL，注入样品槽底部，点样结束后向上槽内加入1滴溴酚蓝指示剂示踪。起始电压控制在120 V，样品进入分离胶后，电压调整为200 V，待指示剂距前沿约1 cm时，停止电泳，迅速取出胶板，标记前沿。
1.3.10染色和脱色取出胶板后，用蒸馏水冲洗，随即放入考马斯亮蓝 R250显色液中，置恒温箱中38 ℃染色2 h 后取出，多次更换脱色液（甲醇10 mL、冰醋酸10 mL和蒸馏水80 mL），至背景清晰为止。拍照、记录。
2结果与分析
结果显示，不同来源、同一产地不同采收期的穿心莲种子可溶性蛋白质电泳图谱共有11条共有特征带，且谱带清晰，Rf值分别为：0.460、0.471、0?482、0.495、0.512、0.524、0.538、0.825、0.921、0?937，表示其具有的共同遗传基础，可作为鉴定穿心莲种子的重要标记。以一级带、二级带作为主要分析特征，不同产地及不同采收期的穿心莲种子蛋白质谱带具有多条共同谱带，但广东省农科院白云基地采收种子的电泳谱带数目与其他种子有较大差异，有10条特征带。在三级带、四级带和五级带上，一些谱带的数目、迁移率有一定差异。研究结果表明，SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝胶电泳技术可作为鉴定穿心莲种子的生物指征。此外，同一来源不同采收期的穿心莲种子蛋白质电泳图谱在谱带数目、迁移率上具有较高相似性，在蛋白质相对含量上则呈现出一定的差异，提示可以作为穿心莲种子成熟以及最佳采收期的生化标记，相关的研究将在下一步工作开展。
妇科护理论文 https://www.360qikan.com/
