【摘要】 目的 通过体内实验研究鸡血藤提取物(SSCE)的抗肿瘤作用及对造血功能的影响。方法 采用小鼠移植性Lewis肺癌模型,观察SSCE体内的抑瘤效应并通过检测外周血象,骨髓涂片,观察其对荷瘤小鼠造血功能的影响。结果 SSCE抑瘤率达到30.65%。SSCE可促进骨髓增殖,与化疗药合用可减轻化疗的骨髓抑制作用,同时,荷瘤小鼠体质状态不受影响。结论 SSCE具有抗癌、刺激造血的双重作用,与化疗药合用可减轻其骨髓抑制作用。
鸡血藤是常用的养血活血药物,中医临床常用于治疗肿瘤中晚期患者的血瘀证[1]。国外有文献报道,鸡血藤分离组分能诱导肿瘤细胞凋亡和抗肿瘤转移[2]。前期实验证实,鸡血藤水提物体外对6种肿瘤细胞系具有抗增殖作用[3],在此基础上,进一步采用聚酰胺柱层析技术和梯度乙醇洗脱的方法,从鸡血藤水提物中分离得到化合物SSCE,体外实验对A549细胞有明显杀伤作用,24 h药效强,IC50值为25.54 μg/mL。前期体内实验发现其具有较强的抑瘤率,确定了其适剂量。本次实验选择该剂量作为治疗剂量,同时对小鼠造血功能进行检测,旨在从抑瘤、刺激造血两方面研究其药理作用。
1 实验材料
1.1 仪器
万能显微镜Olympus-VANOX(日本Olympus公司)；血液分析仪MEK-5216K(日本光电公司)。
1.2 药物
鸡血藤(Spatholobus suberctus Dunn)饮片,购自北京卫仁中药饮片厂(批号603305101)。
1.3 动物与瘤株
选用清洁级C57BL/6小鼠,雌性,体重18～20 g,中国医学科学院动物研究所提供,许可证号：SCXK京2004-0001。Lewis肺癌细胞由中国医学科学院肿瘤研究所提供。
1.4 试剂
30%乙醇(AR),北京化工厂生产；聚酰胺(30～60目),江苏临江试剂化工厂生产。
2 实验方法
2.1 鸡血藤提取物的制备
SSCE由北京市中医研究所药理药化室提取。将药材碎成小块(2 500 g),加去离子水浸泡1 h,回流提取2次,120目筛滤过。合并提取液冷藏过夜,取上清浓缩至稠膏,真空干燥(温度60 ℃、真空度0.01 Pa、时间6 h),取干膏水溶解,上已处理好的聚酰胺柱(柱直径5 cm、柱高40 cm,水洗至流出液澄明后备用)。换不同浓度乙醇(0%、30%、95%)梯度洗脱,收集30%乙醇洗脱部分,回收乙醇至无醇味,经水浴蒸干,真空干燥得洗脱物,即SSCE 13.89 g备用。
2.2 建立Lewis荷瘤C57BL/6小鼠模型
将液氮冻存的小鼠Lewis肺癌细胞复苏后,先接种3只C57BL/6小鼠右腋窝皮下传代,将荷瘤14 d的小鼠以颈椎脱臼法处死,固定、消毒,剥离肿瘤,选取生长良好、有光泽的瘤组织块,剪碎研磨,加生理盐水稀释成单细胞悬液并计数,调整细胞浓度5×106/mL,台盼蓝拒染实验示活细胞数大于95%,于每只小鼠右腋皮下接种0.2 mL,约1×106/只。24 h后称重、给药。
2.3 体内抑瘤实验
将C57BL/6小鼠40只随机分为模型组、化疗组(环磷酰胺)、中药组(SSCE)、联合组(环磷酰胺加SSCE),共4组,每组10只。每只小鼠按20 g体重计,中药3 mg/0.3 mL灌胃,环磷酰胺0.6 mg/0.2 mL腹腔注射。中药治疗(中药组和联合组)于接种后第2日灌胃给药,模型组以生理盐水0.3 mL灌胃,连续给药14 d。环磷酰胺治疗(化疗组和联合组)于接种后第3日开始腹腔注射给药,隔2 d 给1次,共4次。观察指标：用游标卡尺每隔2 d测定肿瘤直径(肿瘤长径和肿瘤短径),绘制生长曲线。取材时,剥离肿瘤组织称重,计算抑瘤率：抑瘤率(%)＝(1－实验组平均瘤重/对照组平均瘤重)×100%。实验结束,各组小鼠眼眶取血,检测WBC、RBC、PLT计数。取胸骨骨髓涂片,油镜下观察骨髓像改变。
2.4 统计学方法
