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　　1  仪器与试药
　　SPD-10AVP型高效液相色谱仪(日本岛津公司),包括LC-10ATVP泵,SPD-10AVP检测器,CTO-10ASVP柱温箱, SCL-10AVP系统控制器；LibrorAEG-200电子天平(日本岛津公司)；LS-3120超声波发生器。祖卡木颗粒由本所自制。大黄素对照品(中国药品生物制品检定所,批号0766-200011),大黄酚对照品(中国药品生物制品检定所,批号0736-200116)。硅胶G(青岛海洋化工有限公司生产)。甲醇为色谱级,其它试剂均为分析纯；水为超纯水。
　　2  方法与结果
　　2.1  色谱条件
　　Shim-pack ODS C18柱(150 mm×4.6 mm,5 μm)；检测波长：254 nm；流动相：甲醇-0.1%磷酸(85∶15)；流速：1.0 mL/min；柱温：35 ℃。分别取样品溶液、阴性样品溶液和对照品溶液各10 μL,按上述色谱条件分别进样测定,绘制色谱图,结果理论塔板数大黄素大于4 000,大黄酚大于5 000。
　　2.2  线性关系的考察
　　分别吸取大黄素贮备液1.0、2.0、5.0、8.0、10.0 mL,置10 mL量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,从中分别取10 μL注入液相色谱仪,测定。以进样浓度为横坐标、峰面积为纵坐标进行回归,得标准曲线方程为：A=41 711C-1 615.9,r=0.999 4。大黄素在0.4～4 μg/mL范围内呈良好的线性关系。
　　精密吸取大黄酚贮备液1.0、2.0、3.0、5.0、10.0 mL,分别置10 mL量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,从中分别取10 μL注入液相色谱仪,测定。以进样浓度为横坐标,峰面积为纵坐标进行回归,得标准曲线方程为：A=58 968C-5 672.3,r=0.999 2。结果大黄酚在0.848～8.48 μg/mL范围内呈良好的线性关系。
　　2.3  阴性试验
　　按样品工艺制备缺大黄的阴性对照品,按供试品溶液的制备方法操作,进样10 μL,结果HPLC 图谱在与大黄素和大黄酚相应位置上没有吸收峰,表明其他成分对大黄素和大黄酚测定无干扰(见图1)。
　　2.4  精密度试验
　　精密量取同一供试品(批号031007),照供试品溶液方法制备,重复进样5次,每次进样10 μL,求得大黄素RSD=1.94%,大黄酚RSD=2.46%。取同一批号(批号031007)样品5份进样测定,求得大黄素RSD=1.51%,大黄酚RSD=1.39%。同一批样品(批号031007)分别在同一天的不同时间(每隔2 h)用含量测定方法重复测定5次,计算大黄素和大黄酚总量的RSD=1.16%；同一批样品(批号031007)分别在不同天(连续5 d)用含量测定方法重复测定,计算大黄素和大黄酚总量的RSD=1.98%。
　　2.5  回收率试验
　　采用标准添加法测定回收率。精密称取供试品(批号031007)0.5 g,共7份,分别置具塞锥形瓶中,第1、2份作为空白回收,其余5份分别加入浓度为35.0 μg/mL的大黄素对照品溶液1.0 mL,再分别加入浓度为115.0 μg/mL的大黄酚对照品溶液1.0 mL,照2.3项下方法制备,并进样10 μL测定含量。结果大黄素平均回收率为95.43%,RSD=1.42%；大黄酚平均回收率为95.80%,RSD=1.40%。小检测限测定及定量限测定：配制浓度适当的大黄素对照品溶液,进样10 μL,当信噪比S/N为3时,其小检测浓度约为50 ng/mL。