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加压提取三七总皂苷及其含量测定

时间:2014-02-21 09:33来源:未知 作者:360期刊网1 点击:

  三七(Radix Notoginsen)又名田七,属古热带残遗植物,是我国珍贵的特产中药,主产于云南、广西等地。三七入药历史悠久,具有散瘀止血、消肿定痛之功效。三七中总皂苷是一七主要药理活性成分 ,现代医药研究表明三七总皂苷具有捌血脂、降压、增加心脑血流量、抗肝纤维化、保护心肌、抗心律失常、抗休克、抗血栓、改善微循环等多方面的药理活性。加压提取是一项新的提取技术,近年应用于中药领域。在中药有效成分的提取过程中,施加一定的压力,可使溶剂在高于沸点时仍保持液体状态,改善溶剂的溶解性,同时,使药材的细胞壁破裂增多,有效成分的溶出速率加快,药材有效成分的提取率明显增加。许多研究结果表明 ,加压提取技术适用用于大部分中药材,是具有广泛发展前途的中药有效成分提取新工艺。本文采用香草醛一高氯酸比色法测定三七总皂苷含量,以三七总皂苷得率为指标设计正交试验,确定其加压提取法的最佳艺参
 
  1 材料与仪器
 
  1.1 药材三七块根,购自广州市医药公司。
 
  1.2 试剂三七皂苷Rgl标准品由中国药品生物制品检定所提供,批号:1246—9705;香草醛、冰醋酸、高氯酸、乙醇、甲醇等均为分析纯。
 
  1.3 仪器电子天平(赛多利斯,型号:KY—GSA124S);紫外可见分光光度计(北京普析通用,型号:TU一1800);旋转蒸发仪(上海亚荣,型号:RE一3000);高速离心机(江苏省金坛市环宇科学仪器厂,型号:YxJ一2);数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司,型号:KQ一2200DB);高压磁力搅拌反应釜(烟台科立化T设备有限公司,型号:PCF一1)。
 
  2 方法与结果
 
  2.1 三七总皂苷测定
 
  2.1.1 对照品溶液的制备精密称取2.48 mg对照品三七皂苷Rgl,倒人25mL量瓶中,加甲醇液至刻度,充分溶解即得对照品溶液(每mL含对照品三七皂苷0.099 2 mg)。
 
  2.1.2 供试品溶液的制备精密称取24.8 mg精制三七总皂苷样品,倒入25 mL容量瓶中,加甲醇液至刻度,充分溶解即得即得供试品溶液(每mL含样品0.992 mg)。
 
  2.1.3 检测波长的确定吸取标准液,按2.1.4项方法显色,以紫外分光光度计扫描(800 Dm~200 Fin),最大吸收波长(即检测波长)为560 1113。
 
  2.1.4 标准曲线的制备 分别精密吸取对照品溶液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 mL,倒入10 mL试管,挥干溶剂后加入0.2 mL 5%香草醛一冰醋酸溶液。取0.8 mL高氯酸水浴加热(水浴温度60℃),20 min后立即取出放入冷水中冷却,加入5.0 mL冰醋酸,摇匀。相应试剂随行空白对照,波长560/lm处测定吸收度A,以三七皂苷Rgl含量(mg)为横坐标,吸收度为纵坐标,求回归方程为:Y=5.270X+0.0511,r=0.9995。结果表明三七皂苷Rgl在0.02425~0.12125mg之间有良好线性关系。
 
  2.2 三七总皂苷提取法
 
  2.2.1 回流法称取三七干燥粗粉20 g,加50%乙醇(料液比1:10)回流提取,共2次,1小时/次,合并2次滤液,浓缩,定容至500 mL备用。
 
  2.2.2 渗漉法称取三七干燥粗粉20 g,加50% 的乙醇(料液比1:10)润湿1 h后装柱,继续浸泡12 h后调整滤速为10 mL/min过滤,浓缩滤液,定容至500 mL备用。
 
  2.2.3 超声波提取法称取三七干燥粗粉20g,加50% 乙醇(料液比1:10)超声提取,共2次,30分钟/次,合并滤液,浓缩,定容至500 mL备用。
 
  2.2.4 加压提取法称取三七干燥粗粉20 g,置加压提取器中,加50% 乙醇(料液比1:10),于60℃ 、4.5 kg/cm压力下密封加压浸提1 h,浓缩,定容至500 mL备用。
 
  4种提取法提取的三七总皂苷含量分别为:醇回流法7.45% 、渗滤法7.89% 、超声波提取法7.92% 、加压提取法8.02% 。加压提取法所得含量最高,醇回流法最低。渗漉法和超声波提取法所得含量与加压提取法相当,但渗漉法周期长,消耗溶剂多,超声波法不宜用于工业化生产,经综合比较后,确定加压提取法作为三七总皂苷提取法。
 
  2.3 正交试验根据预试验,固定压力为4.5 kg/cm ,粒径为4O目,选取乙醇浓度(A)、固液比(B)、提取时间(c)、提取温度(D)为影响因素,每个因素设定3个水平,以三七总皂苷提取得率为指标,按照L。(3 )正交表进行试验,因素、水平见表1。极差分析结果显示,影响三七总皂苷提取率的主次因素依次是D提取温度、B料液比、C提取时间、A乙醇浓度,最佳组合为A B c D ,即最佳提取条件为:提取液为70% 乙醇,料液比为1:10,提取时间为60 min,温度为60℃。
 
  2.4 验证实验按优选方案安排实验,验证3批,三七总皂苷的提取率分别为9.14% 、9.07% 、9.18% ,均高于正交试验的提取率。
 
  3 讨 论皂苷是极性较强的含糖基化合物,易溶于极性溶剂,化学性质不稳定,在酶、酸性条件下易水解。目前,提取三七中皂苷成分的方法有水煎煮法、醇回流法、大孔吸附树脂法、微波提取法、超声提取法、超临界萃取等 。上述方法虽然技术较为成熟,但存在一定的缺点:水煎煮法、醇回流法存在流程长、提取率低的缺点,而且有机溶剂用量大,后处理困难,污染环境;超声、微波提取法虽省时省力,但目前处于实验室研究阶段,不适宜较大规模的工业化生产。
 
  加压提取一项新兴的提取技术,具有提取时间短、溶剂消耗少、提取效率高等优点,已广泛应用于中药材提取、药物分析、食品、环境等领域。本研究以不同提取方法提取三七总皂苷,结果加压提取法提取的三七总皂苷含量最高,经过综合比较分析后,确定高压提取法提取三七总皂苷优于渗滤法、醇回流法、超声波提取法。正交实验结果表明,三七总皂苷高压高压提取的最佳工艺为:浸提压力为4.5 kg/cm ,粒径为40目,提取液为70% 乙醇,料液比为1:10,提取时间为60 min,温度为60℃。
 
  香草醛一高氯酸比色法,测定三七总皂苷含量,方法简便,污染少,但该法显色受温度、时间等环境因素影响较大 。测定时,应注意控制加热温度和加热时间。当温度高于6O℃长时间加热,糖类吸收干扰显著。总皂苷测定以60℃加热15 min为宜。三七总皂苷显色在1 h内稳定,故显色后需在1 h内测定。
 
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