龙胆为常用中药.?中国药典?2000版收载为龙胆科植物三花龙胆、龙胆、三花龙胆或坚龙胆的干燥根及根茎,具有清热燥湿、泻肝胆火的功效,主治湿热黄症、阴肿阴痒、带下、强中、湿莎瘟痒、目赤等症。三花龙胆又名东北龙胆,是"关龙胆"的主流,质量优良。一直以来中医以龙胆入药,只取其根及根茎部分,而地上部分则被当作废料丢弃。为了更合理有效地开发资源,充分发掘我国中医药宝库的潜在价值,我们对关龙胆的茎、叶、花、根中的龙胆苦苦和当药苦背进行了较深入的研究。同时,对地上部分总提取物的保肝作用也进行了研究。筛选改善肝功能药物和对其活性进行评价需用动物模型。利用毒物、营养因素缺乏、手术方法、免疫方法以及病毒可以造成肝损伤。造成肝损伤的毒物包括四氯化碳、硫代乙冒生胶、醋氨盼、D-半乳糖胶、乙硫氨酸、皿-茶异硫氟酸酶(ANIE)、鬼笔碱(pballoidin)、四·鹅膏素(a-amanitin)、酒精、黄曲霉素等。本实验选用D-半乳糖胶、硫代乙曹先胶、四氯化碳等3个肝损伤毒物造肝损伤模型,通过不同机制引起的肝损伤来研究龙胆地上部分的保肝作用。

  一、材料

  (一)动物昆明种小鼠,体重(20.0土2.0)g.雌雄各半,哈尔滨市兽医研究所,动物质量合格证号2黑XCXK20020001.

  (二)试剂四氯化碳(CCl的,哈尔滨市新达化工厂产品(分析纯).批号。∞718;硫代乙曹先胶(TAA).天津市科密欧化学试剂开发中心(分析纯).批号200401ω;D-半乳糖胶(GlanN):北京化工厂,批号870S22;联苯双酶,德州德药制药有限公司,批号例。410;甲醇,天津市科密欧化学试剂开发中心(分析纯).批号2∞11222;谷丙转氨酶(ALT)试剂盒、谷尊转氨酶(AST)试剂盒、碱性磷酸酶(AKP)试剂盒,南京建成生物工程研究所,批号2∞4091S.

  二、方法

  取关龙胆根浸膏。.90g.加蒸馆水配成O.OISgfml揭穿液备用。给小鼠按20mllkg灌胃给药(相当于生药Sg/kg给药)。分别取关龙胆地上部分浸膏30.4.IS.2.7.6g加蒸馆水配成O.S.0.2S.0.12SgfmJ.溶液备用。给小鼠按20mllkg灌胃给药(分别相当于生药2S.SO.7Sg/kg给药).

  (一)龙胆地上部分对氨基半乳糖(GlanN)急性肝损伤的保护作用取(20±2)g健康小鼠,雌雄各半,随机分成正常组、模型组、关龙胆根组、不同剂量关龙胆地上部分组、联苯双酶钮,除正常组、模型组小鼠每日灌胃生理盐水20m11kg外,其它各组均按20mllkg给药.1次Id.连续制。于末次给药或生理盐水后O.钮,除正常组小鼠ip生理盐水20mllkg外,其余6组小鼠分别按120mg/kg腹腔注射lO%GIaN.18h后,眼眶取血.30伽/四n离心1伽in,取血清测ALT.AST.AKP。

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  (二〉龙胆地上部分对硫代乙酿胶(TAA)急性肝损伤的保护作用取(20±2)g健康小鼠,雌雄各半,随机分成正常组、模型组、关龙胆根组、不同剂量关龙胆地上部分组、联苯双醋组。除正常组、模型纽小鼠每日灌胃生理盐水20mllkg外,其它各组均按20m1/kg给药,1次地,连续4d。子末次给药或生理盐水后30m血,除正常组小鼠腹腔注射生理盐水20mllkg外,其余6组小鼠分别按SOmg/kg腹腔注射TAA.18h后,眼眶取血.3000r/min离心10min.取血清测ALT.AST.AKP.

  三、结果

  (一〉龙胆地上部分对小鼠氨基半乳糖(GlanN)急性肝损伤的保护作用血清生化测定结果表明.GlanN肝损伤组(模型组)小鼠血清转氨酶ALT.AST和A均明显升高,说明造模成功。龙胆地上部分总提物高、中、低剂量组,龙胆根总提物组与模型组比较虽然可以在一定程度上降低ALT.AST.AKP水平,但经过数理统计分析,并没有显著性差异。说明龙胆全革对GIaN所致的急性肝损伤无明显保护作用。

  (二)龙胆地上部分对小鼠TAA急性肝损伤的保护作用血清生化测定结果表明.TAA肝损伤组(模型组)小鼠血清转氨酶ALT.AST.AKP均明显升高,说明造模成功。龙胆地上部分总提物高、中、低剂量组、龙胆根组与阳性对照药联苯双酶均可对抗血清ALT.AST、AKP的升高,总提物高、中、低剂量组与模型组对照有显著性差别(P<O.O日,与龙胆根组比较无显著性差异(I'>O.OS)。

  四、讨论

  我们采用昆明种小鼠,设计3个实验,发现关龙胆地上部分有一定的保肝作用,可降低各种肝损伤模型的此:r.AST.AKP等。CCI4.TAA.GlanN都是引起肝损伤的传统肝损伤模型,关龙胆地上部分可使CCl4引起的肝损伤转氨酶下降,和龙胆根及根茎作用一致,提示龙胆地上部分具有抗氧化作用和细胞保护作用。TAA干扰RNA从细胞核到细胞质的转运过程,影响蛋白质的合成.龙胆地上部分能降低TAA对肝脏的侵害作用,和龙胆根及根茎作用一致,提示龙胆地上部分可以保护肝细胞膜,不至于使细胞的离子环境破坏,导致肝细胞坏死。关龙胆地上部分对GlanN无明显保护作用,与龙胆根及根茎作用一致。