复元丹是武汉中研现代技术有限公司依据中医元气理论研制的中药胶囊制剂,具有培元固本、平补脾肾的功效。本研究以急性疲劳小鼠为研究对象,探讨复元丹的抗疲劳作用及其机制。

  1 材料与方法

  1.1 动物健康雄性昆明种小鼠150只,体重(20±2)g(由华中科技大学同济医学院实验动物中心提供)。适应性游泳训练14d,每次5min,温度2530~C,水深35cm。1.2 药物复元丹(由Cs一4(蝙蝠蛾拟青霉)、党参、山药、茯苓等组成,武汉中研现代中药技术有限公司胶囊制剂,批号:卫食健字(2002)第0603号)。人参茎叶皂甙溶液(北京金可生物添加剂公司,批号:991130)。

  1.3 试剂与仪器血清尿素氮(BUN)试剂盒、肝糖原及肌糖原测定试剂盒、血清乳酸(LA)测定试剂盒、血清乳酸脱氢酶(LDH)测定试剂盒(南京建成生物工程研究所)。721一A型可见光分光光度计(上海第三分析仪器厂生产);电子分析天平(Metfler Toledo公司);小鼠游泳箱(40cm×50cmX50cm)。

  1.4 分组与给药方法实验小鼠按体重随机分为5组,分别为空白对照组,复元丹低、中、高剂量组和阳性对照组,每组3O只。空白对照组给予等体积的蒸馏水灌胃;复元丹3个剂量组分别给予复元丹内容物165mg/(kg·d)、350mg/(kg·d)、700rag/(kg·d)灌胃;阳性对照组给予人参茎叶皂甙溶液0.1 mg/g体重灌胃。各实验组小鼠灌胃容积为0.5mL,于游泳训练前和正式实验开始前0.5 h灌胃给药,连续给药15d。

  1.5 观察项目

  1.5.1 小鼠力竭游泳实验:取每组小鼠各1O只,末次灌胃前动物禁食12h,在末次给药后30min将小鼠放入游泳箱内进行力竭游泳实验,每鼠尾部1/3至2/3处负重为体重5% 的铅皮。水深35cm,调节水温至2530~C,每只游泳箱内一次放入5只小鼠。自小鼠投入水内开始计时,用秒表记录每只小鼠的力竭游泳时间,比较小鼠耐受疲劳的能力。力竭判断的标准为:小鼠沉人水中超过10s,且放在平面上无法完成翻正反射。

  1.5.2 小鼠血清LA、LDH和BUN含量测定:每组取10只小鼠,末次给药后30rain,在水温为2530~C的游泳箱中无负重游泳90rain,将动物摘眼球采血0.8mL(不加抗凝剂),离心管收集血液4~C过夜,待其血清充分析出,3000r/min离心15rain,收集血清。按照试剂盒说明书,采用721型分光光度测定仪测定LA、LDH、BUN含量。

  1.5.3 肝糖原和肌糖原测定:用于全血乳酸和乳酸脱氢酶含量测定的各组小鼠取血后,立即脱臼处死,取肝脏、后肢股四头肌组织,经冰生理盐水漂洗后用滤纸吸干,精确称取肝脏、股四头肌组织100mg,置于一18C冰箱中保存备用。按试剂盒说明书测定肝糖原和肌糖原含量。

  1.6 统计学处理所有数据均用均数±标准差(面±s)表示,用SPSS10.0统计软件处理分析,各组间比较用单因素方差分析。

  2 结果

  2.1 复元丹对小鼠负重力竭游泳时间的影响复元丹各剂量组和阳性对照组小鼠力竭游泳时间,与空白对照组比较有显著性延长(P<0.05);复元丹各剂量组之间比较,小鼠游泳时间随复元丹计量增加有延长趋势,但其差异不具统计学意义(P>0.05);复元丹各剂量组与阳性对照组组间比较,无显著性差异(P>0.05)2.2 复元丹对疲劳小鼠血清LA和LDH含量的影响与空白对照组比较,复元丹各剂量组和阳性对照组小鼠血清LA含量有下降趋势,但差异均无统计学意义(P>O.05)。各组LDH含量无显著性差异(JP>O.052.4 复元丹对疲劳小鼠肝糖原和肌糖原含量的影响与空白对照组比较,复元丹各剂量组小鼠肝糖原和肌糖原含量均呈显著性升高(P<0.05),组间比较无显著性差异阳性对照组与空白对照组比较无显著性差异(P>0.05)。见表4。3 讨论评价抗疲劳作用的实验方法及指标,目前应用广的是耐力试验和运动前后生化指标的检测。复元丹各剂量组以及阳性对照组小鼠力竭游泳时间,与空白对照组比较有显著性延长,提示复元丹能明显延长小鼠游泳运动时间,提高小鼠的运动耐力,因此具有一定的抗疲劳功效。

  在机体出现疲劳的感觉之前,机体内己发生各种生理生化变化,而且可能正是这些生化变化才导致机体疲劳的产生。

  血乳酸水平可以反映有氧代谢能力、疲劳的产生和消除速度,从而能够降低血乳酸含量的物质,能起到缓解疲劳的作用。

  LDH活力是反映肌肉中乳酸清除代谢速度的标志,它的提高可以加速肌肉中过多乳酸的清除代谢,延缓疲劳的发生或加速疲劳的消除。血乳酸脱氢酶活力越高,预示着机体对运动时所产生乳酸的清除能力越高。血清BUN含量可用来作为评定运动量的指标。BUN与人的身体机能、疲劳程度以及负荷量的大小呈密切正相关。通常血清尿素氮含量随运动负荷增加而升高,身体对负荷适应性越差,血清尿素氮的增加就越明显。

  实验结果显示复元丹能有效降低小鼠游泳时产生的血清尿素氮,而剧烈活动后,尿素氮增值的降低,正是机体耐力增加对剧烈负荷适应能力提高的表现,表明复元丹能够减少蛋白质的分解,提高对运动负荷的适应能力,加速疲劳的消除。另外,复元丹能显著提高小鼠肝糖原和肌糖原储备能,通过增加肝糖原的储备和运动时糖原的消耗,从而为机体提供更多的能量以达到抗疲劳的目的。以上是复元丹抗疲劳作用的可能机制。

  本次研究在连续给药15d,小鼠无负重游泳90min后,检测血清乳酸及乳酸脱氢酶含量,结果显示,与空白对照组比较,复元丹各剂量组小鼠血清乳酸含量有下降趋势但无统计学意义。分析导致以上结果的出现的原因,我们认为存在两种可能性:①复元丹具有抗疲劳的功效,但不是通过提高乳酸脱氢酶的活性,加快血乳酸的消除这一机制发挥作用的;②乳酸是无氧糖酵解的产物,理论上只有短时间大强度剧烈运动,才能动用无氧糖酵解,使乳酸量迅速增加,而马拉松式的长时问活动,由于体内乳酸生成与分解达到平衡,因此并不能使血乳酸迅速升高。所以实验结果显示的复元丹各剂量组与空白对照组小鼠血清乳酸和乳酸脱氢酶含量无显著性差异,可能与实验过程中动物运动时间过长有关。